结果:致伤后3h左右GFAP的表达量明显增强,以后24h内持续性高表达,并与损伤强度呈正比(P<0.05); LDH的释放增加主要出现在损伤后30min内; 损伤后30min各组致伤细胞凋亡率呈非显著性差异(P>0.05),3h后细胞凋亡率增高,6h后细胞凋亡率最高。

结论:Müller细胞形态的改变和细胞膜通透性的改变可能是触发GFAP 表达增强的因素之一。]]> 338true 337true 570值；免疫组织化学方法检测人RPE细胞角蛋白和HPA-1表达。 结果：体外增生的RPE细胞胞浆和细胞核HPA-1呈强阳性表达,以细胞浆内表达为主,PI-88干预后细胞浆表达减弱。PI-88对体外RPE细胞的增生有明显的时效和量效抑制关系,药物干预72h细胞A₅₇₀值随质量浓度不同表现明显下降趋势（P<0.05）；而同一质量浓度,药物质量浓度达到100mg/L及以上时,48~72h才表现A₅₇₀值减小的趋势。结论: HPA-1抑制剂可抑制体外培养RPE细胞的增生,并呈现剂量和时间依赖关系。]]> 336true 2/M期，且能诱导细胞凋亡，高浓度组尤为明显。 结论：氯化锂能抑制HTFs增殖，机制为诱导细胞凋亡，并将细胞阻滞于G₂/M期。]]> 335true 334true 0.05），其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖，且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加，S期细胞比例下降，计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用，并与用药剂量和持续时间有关。]]> 333true 332true 0.05）。B组RPE层VEGF及VEGFR2染色面积及积分光密度均高于A组和C组，差异具有统计学意义（P<0.05）。B组视网膜VEGF蛋白的相对表达量明显高于A组和C组，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论:健脾祛瘀法对改善血脂异常ApoE-/-小鼠的血脂、血流变等生化指标有积极作用，并且提示对该AMD动物模型中RPE层VEGF/VEGFR2信号传导通路有一定调控作用。]]> 331true 330true 329true 0.05），实验组大鼠与假手术组相比：Nogo-A的表达在12h开始升高（P<0.05），48h达到高峰（P<0.01），72h下降（P<0.05），168h达到正常基线水平（P>0.05）；NgR的表达在6h即出现上升，持续至48h达到最高峰（P<0.01），72h下降，168h达到正常基线水平。实验组大鼠Nogo-A与NgR的表达呈正相关（P<0.01）。 结论：Nogo-A和NgR在RIR各时间点均有表达，其表达水平沿时间点呈抛物线形，在再灌注48h时均达到峰值，NgR先于Nogo-A表达，两者协同作用，与RIR损伤后抑制节细胞轴突修复再生有关。]]> 328true 2+IR，n=32)。其中后两组又分为再灌注后6，24，48和72h组（每组8只）。通过前房灌注加压法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。常规HE染色观察视网膜组织形态变化，免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。 结果：E2+IR组视网膜组织损害程度在各时间点较IR组好转。IR组Bax蛋白在6h时已经开始表达，24h达高峰，48h表达开始下降，72h仍有部分表达；而E₂+IR组Bax蛋白的表达在各时间点上较IR组明显下调（P<0.01）；IR组Bcl-2蛋白的表达在再灌注6h时表达量最多，随时间延续表达量逐渐减少；Bcl-2蛋白的表达在各时间点上较IR组明显上调（P<0.01）。 结论：缺血再灌注损伤损害了视网膜组织结构。Bcl-2和Bax参与了视网膜缺血再灌注损伤的调控，苯甲酸雌二醇可上调Bcl-2的表达，下调Bax的表达，保护视网膜组织。]]> 327true 326true 325true 324true 323true 322true 321true 320true 319true 318true 0.05）。免疫组织化学进行平均光密度测定，A和C组PCNA表达强阳性，B组呈部分阳性表达，D组阳性表达较B组更少。B和D组与A组、B组与D组均有显著性意义(P<0.01)。A组和C组无显著差异性（P>0.05）。 结论：在活体兔眼中，EDTA、多聚赖氨酸与EDTA的铰链物均有抑制兔LECs增殖的作用，且EDTA与多聚赖氨酸的铰链物组对LECs的抑制作用优于EDTA组，多聚赖氨酸组对LECs的抑制作用不明显。]]> 317true 316true 315true 314true 313true 312true 311true 2O₂）组和TP（H₂O₂+TP）组，分别于12，24，48h后观察各组晶状体的混浊情况，并检测各组晶状体的抗氧化酶系统中的超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)的含量。 结果：正常对照组晶状体均保持透明，未见白内障形成；H₂O₂组大鼠离体晶状体随作用时间的延长，晶状体的混浊程度逐渐明显增加；TP组的晶状体混浊较H₂O₂组明显减轻，白内障形成不明显。晶状体混浊相对灰度值组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。H₂O₂组大鼠晶状体组织中MDA 含量较对照组明显增高(P<0.05)，而GSH-Px和SOD明显下降(P<0.05)，TP组与H2O2组相比，其晶状体中MDA降低(P<0.05)，但仍高于对照组，而GSH-Px和ATP含量明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论：TP可提高氧化损伤晶状体的抗氧化能力，降低脂质过氧化物水平，从而延缓白内障的发生和发展，为临床白内障的诊疗提供了新的理论基础。]]> 310true 309true 308true 0.05）,给药30d后，C组与各组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；在C组,ERM中EGFmRNA阳性程度低于B组，差异有显著统计学意义(P<0.01)。D组与E组也能降低EGFmRNA表达的阳性程度，与B组相比有统计学差异(P<0.05)。C组中EGFmRNA阳性程度低于另两个治疗组，有统计学差异(P<0.05)。C组中EGFmRNA阳性程度略高于A组，有统计学差异（P<0.01）。 结论：活血利水法是活血化瘀和利水明目两者作用的协同，能通过拮抗ERM中EGFmRNA表达的作用来抑制增殖细胞的过度增生，从而防治PVR形成和发展。]]> 307true 2特异性siRNA真核表达载体转染人结膜囊成纤维细胞后对其TGF-β² mRNA表达的影响。 方法：体外分离并培养人结膜囊成纤维细胞，在培养后传代3次的细胞以TGF-β²特异性siRNA真核表达载体进行转染，并以未转染细胞作为对照。转染后分别于24，48和72h收集细胞，采用RT-PCR技术检测TGF-β²特异性siRNA真核表达载体对TGF-β² mRNA表达的影响。 结果：分离的人结膜囊成纤维细胞于接种约4h左右开始贴壁，同时细胞变长成为梭形，表现出明显的成纤维细胞特性，约36h后达到融合状态；RT-PCR结果示：与对照组相比，转染24,48和72h后的细胞TGF-β2表达抑制率分别为17.40%,52.80%和79.20%,抑制效率呈现随时间延长有所加强的趋势。 结论：TGF-β²特异性siRNA真核表达载体能抑制人结膜囊成纤维细胞TGF-β²mRNA的表达。]]> 306true 2S)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）过程中细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。 方法：以硫氢化钠（NaHS）作为H₂S的供体。将54只SD大鼠随机分成正常组、视网膜缺血再灌注损伤组（RIRI组）及硫氢化钠（NaHS）干预组，后两组进一步分为再灌注后6，24，48，72h组。采用前房灌注加压的方法建立RIRI模型，TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡，免疫组织化学法检测视网膜组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。 结果：细胞凋亡出现于缺血灌注后6h，并逐渐递增, 24h达到高峰, 48h开始下降。与RIRI组比，NaHS组Bcl-2蛋白表达增多，Bax蛋白表达减少（均P<0.05）。 结论：H₂S预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值从而调控细胞凋亡，对大鼠RIRI进行保护作用。]]> 305true 方法：RGCs分为实验组(rhEPO组)和对照组(DMEM组)行体外培养，倒置显微镜下观察细胞和轴突生长情况，培养72h测量细胞最长突起长度进行比较，行GAP-43的Western-blot检测，图像分析系统对两组标本进行灰度值测量。

结果：培养72h的RGCs倒置显微镜下观察，形成典型的细胞突起，rhEPO组的细胞比对照组胞体更大，突起更长(P<0.05)。培养72h的RGCs行GAP-43 Western-blot检测，DMEM组GAP-43呈阳性表达，rhEPO组呈强阳性表达，两组差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：rhEPO能够促进体外培养的RGCs轴突生长，能够上调体外培养的RGCs的GAP-43蛋白表达水平，可能是其能够促进RGCs轴突生长的原因。]]> 304true 方法：体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRCECs。取生长良好的第 3～4代细胞用于实验，实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+(60，80，100，120μg/mL)不同浓度莪术油组，用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCECs的增殖，通过免疫细胞化学法观察各分组HRCECs中VEGF的表达情况。

结果：MTT比色法结果显示：高糖对照组与低糖对照组没有显著差异(P>0.05)，用60，80，100，120μg/mL的莪术油处理高糖下HRCECs作用24h高糖+不同浓度莪术油组与高糖对照组相比具有显著性差异(P<0.05)，高糖+不同浓度莪术油组之间呈时间和浓度的显著性差异(P<0.05)。免疫细胞化学检测显示：与低糖对照组相比，高糖对照组VEGF表达明显(P<0.05)，用80，100，120μg/mL的莪术油处理高糖下HRCECs 24h，高糖+不同浓度莪术油组与高糖对照组相比VEGF表达有显著性差异(P<0.05)，高糖+不同浓度莪术油组之间两两比较均具有显著性差异(P<0.05)。

结论：莪术油可抑制高糖下人视网膜血管内皮细胞增殖和VEGF表达。]]> 303true 方法：采用青紫蓝兔视网膜下注射不同浓度Matrigel的方法建立实验性CNV模型，通过眼底彩照、FFA、脉络膜铺片、组织病理切片分别进行评价分析，确定Matrigel最佳浓度及操作方法。

结果：从FFA来看，Matrigel 40μL和20μL组从7d起出现荧光渗漏，14d和28d逐渐增强； 10μL组14d和28d出现荧光渗漏，5μL组一直未见明显荧光素渗漏。从眼底情况来看，7d时大部分注射部位的视网膜已贴附回去，仅个别眼出现局限性视网膜脱离，Matrigel 40μL组个别眼视网膜增殖明显，造成牵拉性视网膜脱离。因白内障或玻璃体混浊无法进行眼底彩照和造影多出现在Matrigel 40μL组。从组织病理学观察，小血管和/或幼稚纤维组织增生多见于Matrigel 40μL和20μL组。但Matrigel 40μL组视网膜损伤明显。

结论：Matrigel视网膜下注射可成功诱导CNV形成，20μL为最佳剂量。]]> 302true 方法：铜绿假单胞菌生物膜中加入不同浓度的游离铁、不同浓度及不同种类的合成铁和螯合铁条件下定量检测生物膜上的菌落数。

结果：低浓度游离铁离子的作用可以增强细菌的黏附量， 以10μmol/L铁离子的作用最明显。0.1μmol/L EDTA和乳铁蛋白可明显抑制铜绿假单胞菌生物膜的菌数。

结论：低浓度游离铁离子的作用可以促进隐形眼镜铜绿假单胞菌生物膜形成，而一定浓度的乳铁蛋白及EDTA形成的缺铁情况下可阻止该生物膜的形成。]]> 301true 方法：选取40只有色兔，随机分成5组，A组：健康空白组； B组：模型组； C组：维生素E组； D组：驻景丸加减方组； E组：蛴螬提取物组。每组8只16眼，通过氩激光光凝方式建立CNV模型。激光光凝后24h； 7，14，21，28d行眼底彩色照相； 7，14，21，28d行荧光素眼底血管造影(FFA)； 14，28d行光学相干断层扫描(OCT)。然后将每组家兔随机分成2批，分别于14，28d用空气栓塞法处死并摘取眼球后段组织行切片、HE染色，光镜下观察视网膜组织病理形态学改变，并行Ang1和PEDF免疫组织化学染色，以研究蛴螬提取物对CNV的抑制作用。

结果：Ang1含量表达测定显示，空白组较实验组低(P<0.05)，实验组中驻景丸加减方组和蛴螬提取物组较其它三组有显著性差异(P<0.05)，蛴螬提取物组较驻景丸加减方组低，但无显著性差异，蛴螬提取物组28d较14d有显著性差异(P<0.05)。PEDF含量表达测定显示，空白组较实验组高(P<0.05)，实验组中驻景丸加减方组和蛴螬提取物组较其它三组有显著性差异(P<0.05)，蛴螬提取物组较驻景丸加减方组高，但无显著性差异，蛴螬提取物组28d较14d有显著性差异(P<0.05)。

结论：蛴螬提取物对实验性有色兔CNV中Ang1的高表达存在良性影响，能有效干预PEDF的降低，保护视网膜组织，对CNV具有抑制作用。]]> 300true 方法：Balb/c小鼠125只麻醉后在显微镜下用刀片背面尖端于角膜“#”字划痕，其中100只小鼠接种 HSV-Ⅰ病毒，另25只小鼠不接种病毒作为正常对照组。术后每天用10g/L荧光素钠染色后裂隙灯显微镜下观察角膜病变发生情况，并取角膜表面泪液进行HEK293T细胞检测以确定裂隙灯显微镜下有无病毒复制。对潜伏感染期小鼠模型采用紫外线B光照射以诱导HSK复发。

结果：接种HSV-Ⅰ病毒的小鼠模型眼于接种后3d内全部出现急性上皮性角膜炎表现。经阿昔洛韦滴眼液治疗1wk后角膜炎症消失，但角膜和三叉神经节中PCR检测病毒仍为阳性。潜伏感染期小鼠模型经紫外线B光照射后也都在1wk内复发，并表现为以基质型角膜炎为主要临床表现的角膜病变。

结论：采用角膜划痕法对Balb/c小鼠接种HSV-Ⅰ病毒和紫外线B光照射可以成功地制作出原发感染期、潜伏感染期和复发感染期等不同感染时期的HSK模型，而且操作相对简单、方便易行。]]> 299true 方法：将50只兔随机分成实验组及对照组，每组分别25只，建立兔角膜烧伤模型。实验组在角膜烧伤后当天行结膜瓣覆盖术。采用免疫组化法测定两组角膜碱烧伤后不同时间点MMP-9和TIMP-1的表达。

结果：MMP-9在角膜碱烧伤后的3d开始升高，14d达到最高，之后逐渐下降； 而TIMP-1在伤后即有表达，7d有所下降，于14d达到最低，21d达到峰值。实验组MMP-9的表达均明显低于对照组，且角膜碱烧伤后的3，14，21d和28d差异有统计学意义(P<0.05)； 而TIMP-1则明显高于对照组，且角膜碱烧伤后3，14d和21d差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：角膜碱烧伤的病理损伤及修复过程中，MMP-9及TIMP-1的表达密切相关。结膜瓣覆盖治疗重度角膜碱烧伤的疗效确切。]]> 298true 方法：采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot印迹分析方法分别测定不同浓度雌二醇(E₂)作用于缺氧Müller细胞后，细胞内PEDF mRNA，VEGF mRNA及相应的蛋白表达水平。

结果：缺氧24h后PEDF mRNA及蛋白表达明显降低，10^-5mmol/L和10^-6mmol/L E₂作用于Müller细胞后可明显缓解由于缺氧引起的细胞内PEDF mRNA及蛋白表达的降低，并与E₂的浓度有关。缺氧24h后VEGF mRNA及蛋白表达明显升高，10^-5mmol/L和10^-6mmol/L E₂作用于Müller细胞后可以明显降低细胞内VEGF mRNA及蛋白表达水平，并与E₂的浓度有关。

结论：雌激素可以调控缺氧条件下视网膜Müller细胞内PEDF和VEGF的表达，对视网膜病理性新生血管的形成具有保护作用。]]> 297true 方法：建立形觉剥夺弱视大鼠模型，对10只正常大鼠和10只单眼形觉剥夺弱视大鼠大脑视皮层17区进行HE染色观察形态学变化，采用免疫组化法以及图像分析系统对Caspase-3免疫阳性神经元进行定位观察并定量研究其变化。

结果：正常大鼠和单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮层17区各层次均可见Caspase-3免疫阳性神经元存在，而以Ⅱ~Ⅳ层较多。与正常大鼠相比，Caspase-3在单眼剥夺性弱视大鼠组视皮层17区Ⅱ～Ⅳ层的表达比正常组明显增多，差异具有统计学意义(P<0.05)。

结论：Caspase-3在单眼剥夺弱视大鼠大脑视皮层17区表达升高，可能参与弱视的发生、发展过程。]]> 296true 方法：对照实验研究。将体外培养的人RPE细胞置于含终浓度为200μmol/L CoCl₂的培养液中培养以建立RPE细胞化学缺氧模型。在缺氧后即刻(即常氧状态下)、2，6，12和24h终止缺氧，用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction， RT-PCR)和免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测RPE细胞中DDR2的表达。缺氧条件下以Ⅰ型胶原(10μg/mL， 50℃孵箱内孵育)刺激，在刺激后即刻(即常氧状态下)、2，6，12，24h终止缺氧，用RT-PCR和Western blotting检测RPE细胞中DDR2和HIF-1α的表达，酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay， ELISA)法观察RPE细胞培养上清中VEGF的表达。

结果：随着缺氧时间延长，RPE细胞中DDR2 mRNA和蛋白表达降低。在缺氧状态下Ⅰ型胶原仍可以随时间迁移使得DDR2 mRNA和蛋白表达增加，激活DDR2。缺氧胶原刺激组相对于缺氧组HIF-1α mRNA和蛋白表达减少，VEGF蛋白表达减少。

结论：缺氧条件下，RPE细胞中DDR2表达随时间推移逐渐降低。Ⅰ型胶原仍可以随时间迁移激活DDR2，缺氧胶原刺激可以抑制缺氧诱导的RPE细胞HIF-1α和VEGF表达上调。]]> 295true 方法：将培养生长状态良好的泪腺上皮细胞，随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(以下简称密蒙花总黄酮组)，含雄激素培养对照组(以下简称雄激素组)，无雄激素培养空白组(以下简称空白组)。分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预。建立干眼症细胞模型。用Trizol试剂提取细胞总RNA。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达。

结果：密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA的表达，与空白组比较差异有显著性(P<0.01)； 密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组，比较差异有显著性(P<0.01)。密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组，比较差异有显著性(P<0.01)； 密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组，比较差异有显著性(P<0.01)。

结论：密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达，使Bax mRNA的表达量降低，同时促进Bcl-2 mRNA的表达，使Bcl-2 mRNA的表达量增加。密蒙花总黄酮含药血浆很可能是通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用。]]> 294true 35H₂₇O₅)₈介导的PDT对人RPE影响的可能机制。

方法：将hRPE细胞分空白对照组、激光组、光敏剂SiPc(C₃₅H₂₇O₅)₈组、PDT 1J组、PDT 2J组，对各实验组应用CCK-8、荧光显微镜蓝光激发、DCFH-DA检测RPE细胞线粒体活性氧水平与RPE细胞凋亡率。

结果：不同浓度光敏剂\〖SiPc(C₃₅H₂₇O₅)₈\〗 介导的PDT对RPE产生的作用不一样，其中以5μg/L的浓度对RPE的杀伤作用最大。

结论：新型光敏剂SiPc(C₃₅H₂₇O₅)₈介导的PDT对RPE具有一定的杀伤作用，其可能机制为光敏剂\〖SiPc(C₃₅H₂₇O₅)₈\〗 介导的PDT对RPE细胞线粒体活性氧水平增加导致细胞凋亡。]]> 293true 方法：应用RT-PCR法检测rAAV2介导HSV-tk基因转染N/N1003A细胞后TK基因的表达，MTT 法观察经ATRA诱导后HSV-tk/GCV系统对N/N1003A细胞旁观者效应的变化，流式细胞术检测经ATRA诱导后HSV-tk/GCV系统对N/N1003A细胞凋亡的影响。

结果：rAAV2介导HSV-tk基因成功转染N/N1003A细胞并稳定表达。与对照组比较，ATRA诱导组可显著提高HSV-tk/GCV系统对兔晶状体上皮细胞N/N1003A的旁观者效应(P<0.01)，且ATRA诱导组细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。

结论：ATRA可显著增强rAAV2介导的HSV-tk/GCV系统对体外培养兔晶状体上皮细胞的旁观者效应。]]> 292true 方法：用CFA+PTX+IRBP对6～10周龄雌性C57BL/6小鼠后肢及尾部皮下进行三点免疫建立EAU模型，于免疫3，7，14，21，28d取外周血行流式细胞术检测。

结果：用特异性抗原IRBP免疫后，EAU疾病在第14d左右产生，在第21d达最高峰，以后开始逐渐缓解。随着EAU疾病的发生，CD4⁺CD25⁺调节性T细胞、CD4⁺CD3⁺辅助T细胞数量均有增加，CD4⁺CD25⁺调节性T细胞增加更为明显，CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞数量第21d达到高峰，第28d开始下降，CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺/CD4⁺CD25^-Foxp3⁺比值从第3d开始逐渐增加，到第21d达到高峰，从第28d开始下降。

结论：EAU疾病的发生和转归与CD4⁺CD25^+/-Foxp3⁺Treg细胞密切相关，CD4⁺CD25^+/-Foxp3⁺Treg细胞为阐明EAU的缓解机制、预防和治疗人类葡萄膜炎提供了新思路。]]> 291true 2(transforming growth factor β₂，TGF-β₂)的影响。

方法：幼年健康豚鼠(2周龄)10只，体外培养RPE细胞，传代、鉴定后，将细胞分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组，前3组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射，空白对照组不接受照射。于照射后24h采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR， RTFQ-PCR)检测细胞中TGF-β₂及TGF-β₂ mRNA的表达，分析不同光照形式与效应的关系。

结果：免疫细胞化学法显示各组TGF-β₂表达均为阳性，病理VISTA图像分析软件测量单位面积中平均光密度(optical density，OD)值进行半定量分析，聚焦光组明显高于其它各组，组间比较有统计学差异(F=11.08，P<0.05)； RTFQ-PCR法显示，聚焦光组TGF-β₂mRNA表达水平较其它各组明显增加，组间比较有统计学差异(F=133.01，P<0.05)。

结论：不同形式光线可影响豚鼠RPE细胞TGF-β₂表达，以聚焦光最明显。]]> 290true 方法：雄性Wistar大鼠42只，随机分为7组，每组6只，其中一组为正常对照组，动物模型组均取右眼制造角膜针刺损伤模型。于损伤后各时间点(6h； 1，3，5，7，14d)取角膜标本，HE染色行组织病理学检查，免疫组织化学染色观察BMP-7的表达与分布，计算机图像分析系统对结果进行分析。

结果：鼠角膜上皮BMP-7的表达于损伤后1，3d逐渐升高(P<0.05)； 损伤后5d时表达逐渐降低，至损伤后14d时表达恢复正常。角膜基质层及角膜内皮层中BMP-7的表达未见明显变化。

结论：BMP-7在大鼠角膜上皮层均有表达，可能作为负性的生长因子参与角膜损伤愈合过程。]]> 2013/8/26 15:29:05 289true 方法：选取健康雄性Wistar大鼠，随机分成糖尿病组和正常对照组(M0)，用链脲佐菌素大剂量一次性腹腔注射诱导1型糖尿病模型。成模后大鼠随机平均分成1mo(M1)，2mo(M2)，3mo(M3)及5mo(M5)组，免疫组织化学法检测VEGF和PEDF在各组大鼠视网膜及脉络膜的表达。

结果：M1大鼠VEGF在视网膜及脉络膜的表达均与M0无明显差别； M2大鼠VEGF在脉络膜有阳性表达(33.3%)，在视网膜的表达与M0无明显差别； M3大鼠VEGF在脉络膜有阳性表达(55.6%)，在视网膜的表达与M0比较有明显差别(33.3%)； M5大鼠VEGF在视网膜及脉络膜阳性表达(88.9%)； M1和M2大鼠视网膜PEDF表达与M0比较无明显差别，各组脉络膜均无PEDF表达； M3和M5大鼠视网膜PEDF表达均较M0减弱，且随病程延长表达逐渐减弱(P<0.05)，各组脉络膜均无PEDF表达； 随着糖尿病病程延长，VEGF/PEDF比值逐渐增大，与M0相比有显著统计学差异(P<0.01)。

结论：随着糖尿病病程的延长，VEGF在视网膜及脉络膜的表达均逐渐增强，而PEDF与之相反，在视网膜的表达逐渐减弱，且VEGF/PEDF比值逐渐增大，提示VEGF和PEDF均与糖尿病病程密切相关。]]> 2013/8/26 15:29:05 288true 方法：采用Western-blot和RT- PCR的方法检测60只雌鼠泪腺中MMP1和TIMP1的表达情况，并进行SⅠt检测。

结果：雌鼠去势后SⅠt显著缩短，MMP1和TIMP1蛋白、mRNA表达均显著增高(P<0.05)； 给予雌激素后，SⅠt比给药前显著缩短，MMP1和TIMP1蛋白、mRNA表达较给药前均显著增高(P<0.05)。

结论：雌激素上调MMP1和TIMP1表达，而且可以加重泪液分泌的减少，所以临床需慎用雌激素治疗绝经后干眼症。]]> 2013/8/26 15:29:05 287true 方法：将3周龄雌性三色豚鼠45只随机选出15只为空白对照组，剩余豚鼠均带头套右眼形觉剥夺诱导病理性近视，A超检影(诱导失败者剔除出组)并随机分为模型组、中药组，双眼行氪激光光凝。中药组于光凝后第2d开始连续灌胃21d，3.285g/(kg·d)，每次1.5mL，1次/d。21d后行脉络膜铺片、HE染色、免疫荧光、免疫组织化学观察。

结果：形觉剥夺4wk后右眼均诱导出高度近视，且眼轴较左眼增长； 脉络膜铺片及免疫荧光示模型组右眼CNV面积及视网膜VEGF表达均明显高于左眼(P<0.01)，中药组右眼CNV的面积及VEGF的表达较模型组右眼减少(P<0.01)； 免疫组织化学结果显示，中药组右眼VEGF的平均光密度值(0.0589±0.0146)较模型组右眼(0.0972±0.0507)减少(P<0.01)。

结论：中药驻景方可抑制氪激光诱导的病理性近视脉络膜新生血管的生长及VEGF的表达。]]> 2013/7/29 14:34:24 286true 方法：SD大鼠40只40眼，通过1mol/L的NaOH建立角膜碱烧伤模型。对照组(A组)行PBS液点眼4次/d，其余三组(B、C、D组)分别行240，400，560μg/mL的AM点眼。通过裂隙灯显微镜记录并比较四组角膜新生血管的生长情况。角膜共聚焦显微镜动态观察损伤后角膜的超微结构。

结果：损伤后的各个时间点，C组的角膜新生血管面积与A、B两组均有显著性差异(P<0.05)，即随着羊膜匀浆提取液浓度的增加，其抑制角膜新生血管的作用增强。但是C、D两组之间的CNV面积差异无统计学意义。角膜共聚焦显微镜观察发现，羊膜匀浆提取液治疗组的多形核细胞浸润明显少于对照组。

结论：羊膜匀浆提取液对碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用呈剂量依赖性，但当浓度达到400μg/mL，其对角膜新生血管的抑制作用趋于稳定。这可能部分与羊膜匀浆提取液抑制碱烧伤炎症反应有关。]]> 2013/7/29 14:34:24 285true 方法：制备细胞8-DC，GFP-DC及IL-10-GFP-DC。55只SD受体大鼠，随机抽取6只6眼，作为阴性对照组，其余随机分成4组：阳性对照组(术前3d受体大鼠尾静脉注射1mL PBS)、8-DC组、GFP-DC组、IL-10-GFP-DC组，分别于术前3d受体大鼠尾静脉注射1mL已制备的细胞悬液(8-DC，GFP-DC，IL-10-GFP-DC)。以Wistar大鼠为供体建立角膜移植实验模型。术后观察各组大鼠的角膜植片状态，并于术后第14d采用ELISA方法检测大鼠房水中IL-4和IFN-γ因子的表达。

结果：IL-10-GFP-DC组角膜植片的存活时间显著延长。IL-10-GFP-DC组细胞因子IL-4表达较其他各组高，而IFN-γ的表达较其他各组低，差异具有统计学意义。

结论：外源性IL-10基因转染的未成熟树突状细胞能抑制角膜移植排斥反应，诱导免疫耐受的形成。其中干扰大鼠房水中细胞因子IL-4和IFN-γ的表达是诱导角膜移植免疫耐受的机制之一。]]> 2013/7/29 14:34:24 284true 方法：健康8周龄雌性SD大鼠，30只，随机分为2组，20只为实验组，10只为对照组。右侧泪腺注射肉毒杆菌B 0.1mL(20mU)，生理盐水0.1mL。分别于实验前1d及实验后第3d； 1，4，6wk，观察基础泪液分泌量、角膜荧光染色，并且酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泪腺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)变化。

结果：术后实验组从第3d时出现泪液分泌减少，4wk达到高峰，6wk后恢复； 角膜荧光染色第3d时出现，持续6wk； 泪腺组织IL-1β从第3d开始出现增加，持续6wk； TNF-α表达水平未增加，MIF检测从第4wk开始表达增加，持续6wk。

结论：泪腺注射肉毒杆菌B可以成功诱导大鼠炎症干眼模型，炎症因子的表达变化具有一定的特征性，为干眼病实验提供较理想的动物模型。]]> 2013/7/29 14:34:24 283true 方法：新西兰白兔16只32眼，左眼行小梁切除术为治疗组，右眼未手术作为正常对照组。术后定期观察晶状体混浊情况，6mo后取出晶状体行Na⁺-K⁺-ATP酶、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)的含量检测。

结果：6mo后，治疗组晶状体在透明度和组织形态学上与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)，治疗组与正常对照组相比，晶状体Na⁺-K⁺-ATP酶、CAT，SOD，GR，GSH-Px活性分别下降了20.97%，16.36%，4.46%，4.85%和10.02%，差异均有统计学意义(P<0.05)，与正常对照组相比，治疗组的MDA含量升高了16.31%，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：小梁切除术可使成年兔晶状体发生生物化学改变，对研究青光眼滤过术后白内障的发生发展机制有重要的指导意义。]]> 2013/7/29 14:34:24 282true 方法：根据患儿的眼位情况及斜视类型分组：共同性内斜视组67例86眼，共同性外斜视组129例183眼，正常眼位组23例23眼，运用免疫组织化学、免疫印迹及ELISA法分别检测各组儿童眼外肌及血清中IGF-1的含量，并行统计学分析。

结果：(1)免疫组织化学检测结果显示：IGF-1在眼外肌细胞中主要表达在胞浆，细胞外基质中有少量的表达。正常眼位组眼外肌中IGF-1含量明显多于共同性内斜视组及共同性外斜视组(P <0.05)。(2)免疫印迹法检测结果显示：正常眼位组与共同性内斜视组、共同性外斜视组相比较，眼外肌中IGF-1含量明显增多(P<0.05)。(3)正常眼位组、共同性内斜视组、共同性外斜视组儿童血清中IGF-1含量的差异无统计学意义(P >0.05)。

结论：共同性内斜及共同性外斜等儿童常见单纯眼位异常的发生，可能与眼球血供中IGF-1含量的多少相关性不大，其影响在于控制眼球运动的眼外肌局部IGF-1含量的多少，提示应用IGF-1在眼外肌局部注射对于治疗斜视等眼外肌相关疾病具有潜在的应用前景。]]> 2013/7/29 14:34:25 281true 方法： SD大鼠60只随机分为正常组(n=15)、IR组(n=15)、生理盐水组(n=15)、y-39983治疗组(n=15)。正常组不做任何处理，后三组制作视网膜IR模型(前房加压灌注法)，其中生理盐水组和y-39983治疗组于造模前5min分别向实验眼玻璃体腔内注入无菌生理盐水和y-39983各10μL。采用免疫组化方法检测细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecules-1，ICAM-1)表达。荧光金逆行标记计数各组大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)。应用组织病理学方法和视网膜电流图评估视网膜损伤程度。

结果：y-39983预处理能降低 ICAM-1 蛋白表达和视网膜水肿程度，并且显著提高了视网膜神经节细胞存活率及b波和O₂相对恢复率，缓解IR损伤所致的内层视网膜变薄的情况。

结论：y-39983能减轻视网膜IR损伤，而这一保护效应在一定程度上与其抑制ICAM-1异常表达增加有关，表明y-39983对IR损伤相关的视网膜疾病有治疗作用。]]> 2013/7/1 11:07:54 280true 方法：选择我院2001-01/2012-12收存在眼科病理室的15例Rb组织切片设为观察组，再选取15例正常视网膜组织切片设为对照组。应用Western-Blot及RT-PCR(逆转录酶链反应)法分别对正常视网膜组织及Rb组织中的Pax6蛋白和Pax6 mRNA的表达进行检测，同时应用Western-Blot法对Pax6基因下游的BRN3b及MATH5促分化基因在蛋白水平的表达进行检测，最后进行组间比较，进而对Pax6基因在Rb中的表达及临床意义进行探讨。

结果：观察组Pax6基因mRNA表达平均值为0.99±0.03，Pax6基因蛋白表达平均值为2.07±0.15，BRN3b蛋白表达平均值为0.195±0.016，MATH5蛋白表达平均值为0.190±0.031，均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：异常表达的Pax6基因可能对Rb的出现起到促进作用。]]> 2013/7/1 11:07:54 279true 方法：用不同浓度噻吗心安处理体外培养的HCE细胞，在倒置显微镜下观察细胞的生长、增殖和形态变化，利用吖啶橙/溴化乙锭荧光双染色法检测质膜的通透性，利用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的断片化，利用透射电镜观察细胞的超微结构。

结果：噻吗心安在0.15625～5g/L的浓度范围内均能不同程度地引起HCE细胞出现不同程度的生长缓慢、数量减少、胞质皱缩、胞内空泡化、变圆脱落、质膜通透性增大、染色质凝缩、DNA断片化和出现凋亡小体等典型的细胞凋亡特征，并具有浓度和时间依赖性。临床使用浓度2.5～5g/L的噻吗心安对HCE细胞的凋亡诱导作用最大，处理28h的凋亡率高达83.23%～96.71%。

结论：噻吗心安在0.15625～5g/L的浓度范围内能显著诱导HCE细胞凋亡，临床使用浓度时对HCE细胞的毒性作用极大，在眼科临床中应谨慎使用。]]> 2013/6/3 10:33:25 278true 方法：人晶状体上皮细胞系传代培养，紫外线诱导细胞发生凋亡， 20μmol/L白藜芦醇预处理细胞后，观察各项指标改变：流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测凋亡相关因子caspase-3及caspase-9的表达，透射电镜观察超微结构变化。

结果：流式细胞仪检测发现，白藜芦醇可以抑制紫外线照射诱导的细胞凋亡，阳性对照组中caspase-3及caspase-9含量显著高于同时段阴性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)； 实验组中caspase-3及caspase-9含量均低于同时段阳性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。此外，伴随白藜芦醇作用时间的延长， 透射电镜下人晶状体上皮细胞损伤的程度减轻。

结论：白藜芦醇可以抑制紫外线诱导的晶状体上皮细胞的凋亡，对辐射性白内障具有预防作用，从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。]]> 2013/6/3 10:33:25 277true 方法：采用STZ腹腔注射制作糖尿病大鼠模型，在造模后6mo内各时点(2wk； 1，2，3，4，5，6mo)采用伊文思蓝灌注示踪显示血-视网膜的渗漏情况，在造模后3mo开始用中药芪灯明目胶囊(低中高剂量组分别给予125，250，500mg/kg体质量剂量的胶囊内容物灌胃)，对照组用安多明胶囊(200mg/kg体质量剂量，相当于10倍成人剂量)，灌胃3mo，观察药物对 BRB的影响。

结果：STZ糖尿病大鼠在2wk即可出现BRB的损害，并随着高血糖状态的持续而不断加重。对造模3mo STZ糖尿病模型大鼠连续灌胃中药芪灯治疗3mo，结果提示：中药芪灯对STZ糖尿病BRB有保护作用，可明显减少视网膜血管的渗漏。

结论：STZ糖尿病模型大鼠在早期即可出现BRB损害，并随着高血糖的持续而加重，中药芪灯明目胶囊可减少高血糖导致的BRB损害。]]> 2013/6/3 10:33:25 276true 方法：采用随机分组设计的实验研究。本实验选择120只健康、无眼疾SD大鼠，随机分为以下4组：αB晶体蛋白组(αB)30只，生理盐水组(S)30只，假手术组(P)30只，急性高眼压组(H)30只，均以右眼为实验眼，分别于术后7d和14d各取5只术眼的视网膜，行Western-blot法，观察急性高眼压后视网膜中αB-晶体蛋白的表达； 术后7，14，21d各取5只术眼的视网膜，行免疫组织化学法，观察急性高眼压后RGCs的GAP-43表达； 术前和术后1mo时应用全视野ERG的b波振幅变化测定视网膜功能。组间数据比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，组间两两比较采用SNK-q检验。

结果：αB组视网膜中αB-晶体蛋白的表达于术后7d较高，14d时表达减弱(P =0.000)，但同一时间点明显高于其他三组(P=0.006，P=0.024，P=0.007； P=0.006，P=0.008，P=0.010)； αB组RGCs的GAP-43表达于术后7d达高峰，14d时表达减弱，21d时仍有少量表达(P=0.000)，但各时间点明显高于其他三组(P=0.001，P=0.002，P=0.001； P=0.015，P=0.002，P=0.006； P=0.005，P=0.003，P=0.005)； ERG- b波振幅于术后1mo较低(P=0.014，P=0.004，P=0.003，P=0.006)，其中术前各组ERG-b波振幅无明显差异(P=0.993)，术后1mo时αB组ERG-b波振幅明显高于其他三组(P=0.000，P=0.004，P=0.002)。

结论：外源性αB-晶体蛋白能够提高视网膜αB-晶体蛋白的表达； αB-晶体蛋白通过促进RGCs中GAP-43的表达，从而促进RGCs的轴突再生； αB-晶体蛋白可促进视网膜功能的恢复，对大鼠视网膜无毒性作用。]]> 2013/6/3 10:33:25 275true 方法：选取SD大白鼠共30只，建立碱烧伤模型，随机将大鼠分成A，B两组，各15只，A组中右眼为实验组 A1组，左眼为空白对照组A2； B组中右眼为实验组B1，左眼为空白对照组B2。A1组给予40μmol/L姜黄素配置成的滴眼液，A2组滴用生理盐水； B1组给予5g/L Avastin滴眼液，B2组滴用生理盐水。根据不同时间点取角膜组织进行病理切片研究、抽取房水进行ELISA测定，计算出每视野计数微新生血管及房水中VEGF含量。对以上指标进行对比分析研究。

结果：两种药物均未发现在角膜水肿、角膜修复等方面的毒副作用。对新生血管的影响，两种药物CNV计数均明显低于空白对照组(P<0.01)，两种药物之间对新生血管影响的对照，平均CNV计数无显著性区别。A1组与A2组对比、B1组与B2组对比，实验组VEGF均明显低于对照组，有高度显著性统计学意义(P<0.01)，A1组与B1组对照，平均VEGF含量A1组高于B1组，有统计学意义(P<0.05)。

结论：姜黄素的VEGF抑制能力可能不如Avastin，但在整体抗CNV的能力上并不输于Avastin，说明姜黄素还参与了干预角膜碱烧伤CNV形成的其他机制。]]> 2013/6/3 10:33:25 274true 方法：将青光安有效组份作用于滤过性手术后兔眼(D，E，F，G组)，通过与空白组(A组)、模型组(B组)、MMC组(C组)的比较，观察青光安4种有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响。

结果：术后MMC组及有效组份2组(E组)眼压回升缓慢，第4wk时眼压仍为最小，该两组眼压值与其他组眼压值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。成纤维细胞个数组间比较，除组份1组与组份3组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)外，其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ型胶原蛋白的表达除C组与E组、B组与G组、F组与G组间胶原表达差异无统计学意义(P>0.05)，其他组间两两比较结果，差异具有统计学意义(P<0.05)。

结论：青光眼术后滤过道瘢痕化，是导致术后眼压异常回升、滤过性手术失败的重要原因。青光安有效组份2和MMC都可通过抑制成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少瘢痕组织增生，具有明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用。]]> 2013/5/6 14:25:10 273true 2)模拟缺氧环境下对大鼠视网膜前体细胞(RPCs)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。

方法：全神经球贴壁法分离、培养、鉴定RPCs。应用RT-PCR及ELISA，检测不同浓度 CoCl₂(0，50，100，150，200μmol/L)干预24h后RPCs中VEGF表达的变化，检测150μmol/L CoCl₂作用不同时间(0，12，24，36，48，72h)RPCs中VEGF表达的变化。

结果：全神经球贴壁法培养的RPCs高表达神经干细胞特异性标记(Nestin)，自然分化后表达视网膜细胞标志性抗原Rhodopsine，MAP-2和GFAP，在缺氧培养时间相同的情况下，VEGF 基因的表达随着 CoCl₂浓度的增加而逐渐增加而后降低，CoCl₂为150μmol/L时达到峰值(P≤0.05)。当 CoCl₂浓度为150μmol/L培养不同时间时，随着缺氧干预时间的延长，VEGF基因的表达亦是逐渐增加而后降低，于36h时达到峰值(P≤0.05)，蛋白与基因表达的变化基本一致。

结论：全神经球贴壁法培养RPCs能较好地表达其干细胞特性。CoCl₂模拟缺氧环境下，缺氧使 RPCs中VEGF 的分泌增强并具有时间和剂量依赖性。]]> 2013/5/6 14:25:10 272true 方法：将24只健康新西兰白兔随机分为正常对照组(A组)，高眼压模型空白组(B组)，高眼压模型灯盏细辛(erigeron brevicapas hand mass，EBHM)治疗组(C组)，高眼压模型蒺藜皂苷(gross saponins of tribulus terrestris，GSTT)治疗组(D组)； 以20g/L甲基纤维素前房注射建立兔慢性高眼压模型，EBHM治疗组实验兔每日耳缘静脉推注EBHM注射液4.5mg/kg，GSTT治疗组实验兔每日耳缘静脉推注GSTT针剂5mg/kg，连续用药4wk并每日测眼压，于第28d摘取眼球检测兔视网膜组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性和丙二醛(maleic dialdehyde，MDA)含量。

结果：兔眼造成青光眼模型后，其眼压在观察期内维持在32～39mmHg； 高眼压模型空白组与正常对照组、EBHM治疗组、GSTT组比较，视网膜中MDA和SOD的含量差异有统计学意义(P<0.05)，EBHM治疗组、GSTT组之间数值差异无统计学意义(P>0.05)，EBHM治疗组、GSTT组与正常对照组比较视网膜中MDA的含量仍略高(P<0.05)，SOD的含量略降低(P<0.05)。

结论：白蒺藜皂苷能有效提高慢性高眼压下兔视网膜中SOD活性，降低MDA含量，从而对持续性高眼压视网膜氧化应激具有保护作用。]]> 2013/5/6 14:25:10 271true 方法：针对26例PDR Ⅴ～Ⅵ期患者，行玻璃体切除+剥膜术(有合并视网膜脱离者加行视网膜复位术)，术中取出视网膜前膜行免疫组织化学染色，观察视网膜前膜中HIT-1α与VEGF和血管内皮标志物CD34的表达。同时行术前血糖、甘油三脂、糖化血红蛋白、是否合并视网脱进行分类并行多因素Logistic回归分析。

结果：PDRⅤ～Ⅵ期视网膜前膜血管内皮细胞中，表达HIT-1α者24例(92.3%)，VEGF者15例(57.7%)，血管内皮标志物CD34者26例(100%)。血管内皮标志物CD34分别与HIT-1α(r=0.556，P=0.028)和VEGF(r=0.745，P=0.001)直线相关。 术前血糖、甘油三脂、糖化血红蛋白、是否合并视网脱是PDR视网膜前膜中表达因子HIT-1α，VEGF和CD34表达的相关因素。

结论：HIT-1α和VEGF在糖尿病视网膜病变视网膜前膜中明显表达。HIT-1α和VEGF可能在PDR的发病中起重要作用。]]> 2013/5/6 14:25:10 270true 方法：SS性干眼的8周龄雌性NOD模型小鼠20只，随机分为4组，每组5只，9周龄时开始给药。另有5只8周龄健康KM小鼠作为正常对照组。实验Ⅰ组和Ⅱ组小鼠分别给予200μg/kg和400μg/kg的雷帕霉素缓释微球结膜下注射，实验Ⅲ组和Ⅳ组动物分别给予生理盐水和空白微球载体结膜下注射。用药前及用药后第5，10，15，20d检查各组小鼠的泪液分泌量，对角膜行荧光素染色并评分，对角结膜行虎红染色并评分，用结膜印记细胞学方法检测结膜细胞并分级。

结果：实验组与对照组相比，泪液分泌量明显增加，角膜荧光素染色和角结膜虎红染色评分降低，结膜印记细胞学等级降低。

结论：雷帕霉素缓释微球可以通过抑制细胞免疫反应，增加NOD小鼠泪液分泌量，对NOD小鼠干燥综合征性干眼具有显著疗效。]]> 2013/5/6 0:00:00 269true 方法：体外兔角膜基质细胞原代、传代培养； 脂质体介导人类TFPI-2真核表达载体pBos-Cite-neo/ TFPI-2转染基质细胞，G418筛选阳性细胞，RT-PCR和Western-blot技术检测转染前后三组角膜基质细胞(转染TFPI-2基因组K-TFPI-2、转染空载体组K-V、未转染组K-P)中TFPI-2 mRNA以及相应蛋白质的表达水平； 利用明胶酶谱法分析比较转染前后三组角膜基质细胞表达MMPs的活性差异。

结果：K-TFPI-2组角膜基质细胞TFPI-2 mRNA和蛋白质的表达较K-P和K-V组显著上调(mRNA：0.79±0.02 vs 0.51±0.03和0.48±0.02，P=0.000 和 P=0.000； 蛋白质：24.5±0.8 vs 15.5±0.5 和 14.9±0.9，P=0.000 和 P=0.000)； 与K-P和K-V组相比，K-TFPI-2组细胞表达MMP-1，2的活性下降(MMP-1： 12.3±0.7 vs 16.7±1.2 和15.9±0.7，P=0.001和P=0.003； MMP-2 ： 15.4±1.3 vs 18.2±1.1 和 17.8±1.1，P=0.027 和 P=0.046)。

结论：TFPI-2表达可明显抑制角膜基质细胞表达MMPs的活性，为进一步开展角膜新生血管性疾病的基因治疗提供实验依据。]]> 2013/4/7 15:27:38 268true 方法：SD大鼠行链脲佐菌素腹腔注射以诱导糖尿病。造模成功后，墨汁灌注及视网膜铺片观察视网膜的血管情况。免疫组织化学染色检测大鼠视网膜及人糖尿病视网膜增殖膜中syndecan-1蛋白的表达。

结果：糖尿病大鼠9wk时，视网膜周边血管走形迂曲，毛细血管网明显减少，部分毛细血管灌注不良。对照组大鼠的视网膜syndecan-1呈阳性表达，其中神经纤维层、节细胞层呈强阳性表达，内丛状层和光感受器外节呈中度阳性表达，外丛状层呈弱阳性表达。糖尿病大鼠视网膜中，syndecan-1的表达减低，其中神经纤维层、神经节细胞层、光感受器外节呈中度阳性表达，内丛状层及外丛状层呈弱阳性表达。13例人糖尿病视网膜病变视网膜增殖膜标本中，syndecan-1弱阳性表达8例(61.5%)，阴性表达5例(38.5%)。

结论：临床和动物实验共同表明，糖尿病状态下，视网膜中syndecan-1的表达降低。]]> 2013/4/7 15:27:38 267true 2(TGF-β₂)的影响。

方法：将不同浓度的胰岛素(0.1～10×10³U/mL)加入培养基刺激ARPE-19细胞不同时间(0～48h)。采用MTS法检测RPE细胞的增殖情况； 采用ELISA法检测各种处理情况下RPE细胞分泌TGF-β₂的情况，Real-time PCR法检测TGF-β₂ mRNA的表达情况。

结果：MTS结果显示，作用12h后，各实验组与对照组比较RPE细胞明显增殖(P<0.05)。ELISA结果表明胰岛素可明显促进RPE细胞分泌TGF-β₂，并呈时间及剂量依赖性。Real-time PCR结果显示，胰岛素作用24h后，TGF-β₂ mRNA表达上调(P<0.01)，且10×10³U/mL胰岛素组TGF-β₂ mRNA表达明显高于0.1×10³U/mL胰岛素组(P<0.01)。

结论：RPE细胞是眼内近视信号因子TGF-β₂的重要来源，胰岛素可以通过促进RPE细胞增殖并分泌TGF-β₂进行信号传递，促进近视发生。]]> 2013/4/7 15:27:38 266true 方法：取新鲜尸体猪眼130眼，随机均分A，B，C，D及对照组共5组，每组再分为2小组，每小组各13只。其中A和B组为透明质酸酶(hyaluronidase， HA)组，分别于玻璃体腔内注射终浓度为200，800U/mL的HA 0.1mL； C和D组为软骨素酶(chondroitinase， CA)组，分别于玻璃体腔内注射终浓度为10，50U/mL的CA 0.1mL； 对照组玻璃体内注射磷酸缓冲盐(PBS)0.1mL。各组的眼球分别在37℃下水浴15min和30min后取出，经4%戊二醛和自配视网膜固定液固定，行石蜡切片苏木素-伊红染色检查、基底部扫描电镜检查及透射电镜检查，观察基底部玻璃体视网膜情况。

结果：病理检查显示，大体标本和切片均见基底部玻璃体有部分液化、降解； 扫描电镜显示，CA 50U/mL组和HA 800U/mL组均可见基底部玻璃体与对照组相比有显著减少； 透射电镜显示，实验组(B，C，D组)各组玻璃体视网膜界面残余纤维较对照组明显减少。

结论：体外使用HA和CA均可诱导猪眼基底部玻璃体脱离，但CA可能引起的眼内副作用更大。]]> 2013/4/7 15:27:38 265true 2O₂诱导的大鼠白内障模型，并观察茶多酚(tea polyphenols，TP)对H₂O₂诱导大鼠晶状体上皮细胞中NF-κB表达的影响。

方法：采用离体晶状体培养技术，在一定浓度H₂O₂的MEM培养液中置入透明的SD大鼠晶状体，建立实验性白内障晶状体模型。设置空白对照组、H₂O₂组和茶多酚(0.02g/L，0.2g/L，2g/L)处理组，分别于不同时间点(6，12，24，48h)取样，应用RT-PCR检测晶状体上皮细胞中NF-κB mRNA表达，Western-blot检测晶状体上皮细胞中NF-κB蛋白表达。

结果：H₂O₂上调晶状体上皮细胞中NF-κB的表达，且呈时间依赖性(P<0.01)； 不同浓度的茶多酚均可抑制晶状体上皮细胞中NF-κB的表达，茶多酚浓度为0.2g/L时抑制效果最显著(P<0.05)。

结论：茶多酚可抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞中NF-κB的表达，并且在茶多酚浓度为0.2g/L时抑制效果最明显。]]> 264true 方法：自由落体法制作视网膜挫伤模型。将SD大鼠随机分为正常组6只、模型组24只及治疗组24只。每组按挫伤后不同时间段分为1，3，7，14d，每个观察时段6只大鼠。HE染色光镜观察视网膜组织学变化，应用SABC免疫组织化学法检测大鼠视网膜挫伤后视网膜组织Bcl-2/Bax蛋白表达的变化。

结果：挫伤性视网膜病变的损害主要集中在神经纤维层。挫伤后视网膜组织水肿，细胞紊乱，胞浆空泡样变，视网膜组织变薄，细胞丢失。NAC治疗组视网膜水肿程度有所改善，细胞紊乱，胞浆空泡样变，细胞丢失有所恢复。正常组及NAC治疗组视网膜组织Bax均未见表达，Bcl-2低表达。视网膜挫伤后1d时Bax表达开始增多，3d强阳性表达，7d表达有所减少，14d时表达进一步减少。Bcl-2低表达，未见明显变化。NAC治疗组各观察指标变化趋势基本与视网膜挫伤组相似，但表达明显减弱，两组相比较，于挫伤后1，3d和7d时差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2在各时段的表达均较模型组有所增强，两组相比较，于挫伤后1，3d和7d时差异有统计学意义(P<0.01)。

结论：在大鼠挫伤性视网膜病变中，NAC能够改善视网膜组织病理学损害并通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达而抑制细胞凋亡，对视网膜挫伤具有保护作用。]]> 263true 2+浓度的影响，并比较有无Ver作用下经不同形式光照后RPE细胞内Ca²⁺浓度的变化。

方法：2周龄幼年健康豚鼠10只，体外培养RPE细胞，传代、鉴定后，将细胞分为Ver处理组和未处理组，Ver处理组加入80mg/L Ver作用12h。两组均进一步分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组，前三组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射，空白对照组不接受照射。于照射后立即采用激光扫描共焦显微镜(laser scanning confocal microscopy，LSCM)测定细胞内Ca²⁺荧光强度，分析不同光照形式与效应的关系。统计学方法采用单因素方差分析。

结果：Ver作用于RPE细胞12h后，20，40，80mg/L组的细胞凋亡情况与空白对照组相比均无统计学意义(P>0.05)，Ver可降低RPE细胞内Ca²⁺荧光强度，浓度为20，40，80mg/L时分别降低了10.36%，24.54%，58.05%，仅80mg/L组与无光照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。未加Ver对RPE细胞进行光照，聚焦光组的Ca²⁺荧光强度较其他各组明显升高，离焦光组的荧光强度也较高，组间比较有统计学差异(P<0.05)。加入80mg/L Ver对RPE细胞作用12h后再进行光照，光照各组Ca²⁺荧光强度没有明显提高，组间比较没有统计学差异(P>0.05)。

结论：超过一定浓度的Ver可诱导RPE细胞凋亡，80mg/L可在不引起RPE细胞凋亡的前提下有效降低细胞内Ca²⁺荧光强度； 不同光照形式对豚鼠RPE细胞内Ca²⁺有明显刺激作用，聚焦光影响最大； 不同光照形式对Ver处理的RPE细胞内的Ca²⁺荧光强度无明显作用。]]> 262true 方法：大鼠随机分为3组：PEDF治疗组(A组)、生理盐水对照组(B组)、正常组(C组)。建立碱烧伤诱导的大鼠CNV模型，A组和B组分别给予PEDF+氯霉素滴眼液和生理盐水+氯霉素滴眼液点眼，采用裂隙灯观察CNV的生长情况，用免疫组化方法检测并半定量分析VEGF， PEDF，Fas及FasL在正常角膜组织和碱烧伤后4，7，10，14d角膜组织中的表达，用TUNEL法检测CNV内皮细胞的凋亡情况。

结果：正常角膜组织中可以检测到高PEDF表达和低VEGF表达，也可以检测到一定的低Fas和FasL表达。各时间点角膜新生血管的面积，A组均低于B组(P<0.05)。免疫组化显示，碱烧伤后4，7，10，14d A组VEGF的表达均低于B组(P<0.05)，PEDF的表达均高于B组(P<0.05)，A组Fas/FasL的表达明显高于B组(P<0.05)，A组TUNEL法测到的角膜新生血管内皮细胞凋亡计数和凋亡指数AI明显高于对照组(P<0.05)。两组检测到的VEGF均在第7d达到峰值，随后下降； 而PEDF和Fas及FasL在第10d达到峰值，随后下降。碱烧伤后第4～10d，VEGF/PEDF>1，CNV逐渐生长并达到峰值； 第10d后，VEGF/PEDF<1，CNV开始逐渐退化。

结论：PEDF抑制碱烧伤后CNV的作用机制可以归结为两点：(1)下调VEGF的表达，控制PEDF/VEGF的动态比值，抑制CNV生长；(2)上调Fas/FasL等凋亡受体的表达，诱导角膜新生血管内皮细胞的凋亡，促进CNV的退化。]]> 261true 方法：建立碱烧伤诱导大鼠CNV模型，将30只SD大鼠随机分为5组：A组于烧伤当日开始给予10μg/mL PEDF点眼； B组于烧伤后第3d开始给予10μg/mL PEDF点眼； C组于烧伤当日开始给予5mg/mL Avastin点眼； D组于烧伤后第3d开始给予5mg/mL Avastin点眼； E组于烧伤当日开始使用生理盐水点眼，均每日4次，每次10μL。裂隙灯显微镜观察CNV情况并计算各组CNV的面积，采用免疫组织化学染色观察VEGF和CD31的表达。

结果：第12d时，A组CNV面积小于B组和C组，差异有统计学意义(P<0.01)； B，C组与D组相比，差异无统计学意义(P=0.215，0.058)。免疫组织化学检测VEGF及CD31示A组VEGF及CD31表达较弱，B，C，D组表达增多，E组表达显著增强。

结论：局部应用Avastin及PEDF均能抑制大鼠角膜化学伤后的CNV。烧伤后早期使用PEDF效果优于Avastin。]]> 260true 方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、3-AB干预组。糖尿病组和3-AB干预组大鼠予以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型，正常对照组注射等体积柠檬酸盐缓冲液。建模成功后3-AB组每日按照30mg/kg给予3-AB灌胃，正常对照组和糖尿病组则给予等体积9g/L 生理盐水(NS)灌胃。观察并记录各组大鼠晶状体混浊进展情况，分别于给药后2，4，8wk处死各组大鼠，取出晶状体检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)和糖基化终末产物(AGE)的含量，并检测晶状体上皮细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达情况。

结果：灌胃3wk时糖尿病组和3-AB组大鼠均开始出现不同程度的晶状体混浊，4wk和8wk时糖尿病组晶状体混浊程度比3-AB组重(P<0.01)。3-AB组大鼠晶状体中GSH-Px和SOD活性在2，4，8wk时均高于糖尿病组(均P<0.05)，但均低于正常对照组(P<0.01)。3-AB组大鼠晶状体中MDA的含量在2，4，8wk时均低于糖尿病组(P<0.05)，但均高于正常对照组(P<0.01)。糖尿病组和3-AB组大鼠晶状体中AGE含量在2，4，8wk时高于正常对照组(均P<0.05)，而糖尿病组在2wk和4wk时高于3-AB组(P<0.05)，但在8wk时无差异。MMP-2在正常对照组大鼠晶状体上皮细胞几乎无表达，在2，4，8wk时糖尿病组均强于3-AB组(P<0.05)。 bFGF在三组大鼠晶状体上皮细胞均呈阳性表达； 在2，4，8wk时，糖尿病组和3-AB组均强于正常对照组(均P<0.05)，但糖尿病组与3-AB组之间无差异。

结论：3-AB对STZ诱导的糖尿病大鼠晶状体混浊具有一定抑制作用，其机制可能是通过减轻STZ诱导的糖尿病大鼠晶状体上皮细胞氧化损伤，降低非酶糖基化水平，抑制晶状体上皮细胞中MMP-2的表达，减轻晶状体上皮细胞外基质降解，从而抑制晶状体混浊。]]> 259true 方法：60只新生SD大鼠随机分为6组：正常对照组(Nor)、正常+PBS治疗组(Nor+PBS)、正常+NEP1-40治疗组(Nor+NEP)、模型对照组(MD)、模型+PBS治疗组(MD+PBS)及模型+NEP1-40治疗组(MD+NEP)。模型组大鼠于出生后21d缝合右侧眼睑建立单眼剥夺弱视模型，于45日龄时打开剥夺眼，对各组大鼠行闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测，确定单眼剥夺模型建立成功后，对需给药的各组大鼠按组别给予NEP1-40或PBS侧脑室注药治疗7d。于52日龄时对各组大鼠再次行F-VEP检测后处死动物，取左侧视皮层进行透射电镜观察突触超微结构变化。

结果：45日龄时F-VEP检测示，MD组、MD+PBS组及MD+NEP组与Nor组比较，P波潜伏期延长，波幅降低(P<0.05)； 52日龄时F-VEP检测示，MD+NEP组与MD组、MD+PBS组大鼠比较，右眼F-VEP的P波潜伏期及波幅差异有统计学意义(P<0.05)，而与Nor组比较差异无统计学意义(P>0.05)； MD+PBS组与MD组大鼠比较，右眼F-VEP的P波潜伏期及波幅差异无统计学意义(P>0.05)，而与Nor组比较差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜观察视皮层神经元突触界面结构参数：与Nor组比较，MD组大鼠剥夺眼对侧视皮层神经元突触间隙增大，突触活性区长度缩短，突触界面曲率减小，突触后致密物厚度变薄(P<0.05)。MD+NEP组大鼠剥夺眼对侧视皮层神经元突触界面结构参数的各项指标均较MD组、MD+PBS组明显改善(P<0.05)，与Nor组相比除突触间隙外(P<0.05)，其余各项参数差异无统计学意义(P>0.05)。MD+PBS组与MD组大鼠比较剥夺眼对侧视皮层神经元突触界面结构参数的各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)，而与Nor组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：NEP1-40可使成年单眼剥夺弱视大鼠剥夺眼对侧视皮层神经元的突触界面结构参数得以恢复，F-VEP的P波潜伏期及波幅恢复至正常水平，重新“激活”被抑制的视皮层结构及功能可塑性，为成年弱视患者提供新的治疗途径奠定了理论基础。]]> 258true 方法：从新鲜人眼球提取HRCECs，进行体外培养。取第3～4代生长良好的细胞用于实验，实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度青蒿琥酯组(15，30，60，120μg/mL)，用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCECs的增殖，通过免疫细胞化学法观察各分组HRCECs中VEGF的表达。

结果：MTT比色法检测细胞增殖结果显示：与低糖组比较，高糖显著促进HRCECs增殖(P>0.05)； 15，30，60，120μg/mL青蒿琥酯处理24h或48h，可时间和浓度依赖性地抑制高糖环境下HRCECs的增殖(P<0.05)。免疫细胞化学法检测VEGF表达结果显示：与低糖对照组相比，高糖对照组VEGF表达明显增加(P<0.05)； 高糖+不同浓度青蒿琥酯(15，30，60μg/mL)组与高糖对照组相比VEGF表达明显下降(P<0.05)，高糖+不同浓度青蒿琥酯组之间两两比较均具有统计学差异(P<0.05)，且随着药物浓度的提高，VEGF的表达量逐渐减少。

结论：青蒿琥酯呈浓度依赖性地抑制高糖环境下HRCECs的增殖以及VEGF的表达，表明青蒿琥酯抑制高糖环境诱导HRCECs增殖可能与其抑制VEGF表达有关。]]> 257true 方法：通过免疫荧光及共聚焦显微镜的方法检验Cav-1在野生鼠视网膜中的表达； 通过HE染色的方法检测野生型(wild type，WT)和Cav-1敲除小鼠视网膜的形态及结构； 应用视网膜电流图的方法检测WT和Cav-1敲除小鼠视网膜的功能。

结果： Cav-1在视网膜的多种细胞中都有表达，在Müller细胞、视网膜血管和RPE中的表达尤为强烈。视网膜电流图表明，Cav-1敲除小鼠a波与b波均较WT鼠低，但HE染色显示其视网膜形态和结构没有明显异常。

结论：Cav-1缺陷小鼠表现出光感反应降低，但视网膜形态和结构均正常，提示Cav-1缺陷鼠视力下降并不源于光感受器细胞的功能缺陷，而是由于视网膜下微环境改变所致。]]> 256true 方法：以1mg/kg内毒素注射于大鼠后足垫建立EIU模型，分别于注射后不同时间点观察大鼠眼内的炎症反应。吸取房水观察细胞数。摘取眼球，行HE(hematoxylin eosin)染色观察大鼠虹膜组织的病理改变； TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling)法检测炎症细胞凋亡情况； 同时运用SABC法检测在内毒素诱导后的不同时间TRAIL在炎症细胞上的表达，并行图像分析。

结果：内毒素注射6h开始出现炎症，以后炎症加重，于18～24h达到炎症高峰，48h炎症明显消退。房水中的细胞数也在24h组达到最多。HE染色显示：内毒素注射后6h，即出现炎症细胞，细胞数目在24h组最多，多数为多形核中性粒细胞，少数为单核细胞和淋巴细胞，48h组炎症细胞几乎消失。TUNEL染色显示：在内毒素注射后6h组即有炎症细胞出现阳性着色，24h组凋亡数达到最多。免疫组化显示：TRAIL蛋白在大鼠的虹膜色素上皮层呈弱阳性着色； TRAIL在炎症细胞上呈阳性着色，24h组在炎症细胞中的着色数量及着色强度达到最高。

结论：以1mg/kg的内毒素注射于SD大鼠后足垫可诱导出葡萄膜炎反应，炎症反应在24h组最为强烈。炎症细胞凋亡可能是EIU炎症迅速消退的原因之一。TRAIL可能参与了炎症细胞的凋亡。]]> 255true 方法：40只新生SD大鼠随机分为6组：28日龄正常组、35日龄正常组、42日龄正常组、28日龄模型组、35日龄模型组及42日龄模型组，模型组大鼠于出生后21d缝合右侧眼睑建立单眼剥夺弱视模型，采用免疫印迹及免疫组织化学法检测视网膜中BDNF及受体TrkB的表达。

结果：正常大鼠在出生后视觉发育关键期内，随年龄增长视网膜中BDNF及受体TrkB蛋白表达无明显变化。早期单眼剥夺后，模型组大鼠视网膜中BDNF及受体TrkB蛋白表达在28日龄立即呈现显著上升趋势，然而随着剥夺时间延长35日龄时表达剧烈下调，并持续至42日龄。BDNF表达在视网膜神经节细胞层、内核层及外核层，而TrkB受体仅表达在视网膜神经节细胞层。早期单眼剥夺可使28日龄大鼠视网膜神经节细胞层中BDNF及受体TrkB阳性细胞数目显著增多，但随着视觉剥夺时间延长，35日龄至42日龄时两者的阳性细胞数目呈现逐渐减少的趋势。

结论：BDNF及受体TrkB的表达呈现一定的视觉经验依赖性，其参与了单眼剥夺弱视的发病。]]> 254true 方法：对眼科手术新鲜的人角膜移植术后眼球进行取材并进行HRCEC的原代培养。进行实验的为生长良好的第3～4代细胞，实验分为空白对照组、低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度阿魏酸(1mg/L，2mg/L，3mg/L，4mg/L)组， 用噻唑蓝比色法(MTT)检测48h后不同浓度的阿魏酸钠对其增殖的抑制作用。免疫细胞化学法用于检测低糖对照组、高糖对照组和不同浓度阿魏酸(1mg/L，2mg/L，4mg/L)组HRCEC中VEGF的表达。

结果：MTT比色法结果表明： 48h后不同浓度的阿魏酸钠分别作用于原代培养的HRCEC细胞增生抑制率分别为46.97%，61.55%，76.91%和83.47%。一定质量浓度范围内阿魏酸钠对高糖环境下HRCEC具有明显的增殖抑制作用(P<0.05)。低糖对照组与高糖对照组吸光度A结果相比，差异无统计学意义(P=0.068>0.05)。低糖对照组、高糖对照组与浓度分别为1mg/L，2mg/L，4mg/L的阿魏酸钠作用组作用于HRCEC 48h后免疫细胞化学背景灰度值与阳性灰度值之差分别为28.27±1.62，93.67±0.81，72.67±2.89，53.73±1.70，30.93±3.72。通过48h后加药组和高糖对照组相比， VEGF表达下降明显，且均有统计学意义(均为P<0.05)，具有质量浓度依赖性。与低糖对照组相比，高糖对照组VEGF的表达明显增加(P<0.05)。

结论：阿魏酸钠对体外培养的高糖环境下HRCEC的增殖及高糖引起VEGF表达具有抑制作用。]]> 253true 方法：以高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜新生血管模型。取对照组和给氧组幼鼠眼球作荧光素血管灌注、病理切片及免疫组织化学检测，分别观察视网膜血管的改变、视网膜新生血管内皮细胞数目及Survivin和COX-2蛋白的表达。

结果：给氧组视网膜可见大量新生血管形成，新生血管内皮细胞核数为23.38±1.07个，与对照组相比差异有显著统计学意义(P<0.01)。正常对照组：视网膜组织各层中未见Survivin和COX-2蛋白表达(2.56±0.46，2.37±0.80)。给氧组：Survivin蛋白表达在神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管(3.34±0.40)，COX-2蛋白表达在内核层、神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管(3.89±0.56)。两者表达呈显著正相关(r=0.394，P<0.01)。

结论：在视网膜新生血管形成中存在Survivin和COX-2的高表达，且两者表达密切相关。]]> 252true 方法：选用健康新西兰大白兔30只，随机分为实验组(25只)，分为A，B，C，D，E组，对照组(5只)，实验组行右眼晶状体皮质吸出，分别于术后即刻； 3，7，14，28d(每个时间点5只)对术眼行裂隙灯显微镜检查，并处死动物获取术眼晶状体后囊膜，对照组直接处死动物获取右眼后囊膜，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting方法检测Livin在正常对照组及术后不同时间点PCO中的表达。

结果： RT-PCR和Western-blotting在正常对照组及术后即刻A组均未检测到Livin的表达，实验组B，C，D，E术后不同时段的PCO组织中均可检测到不同程度Livin的表达，其中RT-PCR和Western-blotting均显示术后C组Livin表达较为明显，D组表达开始下降，但至E组仍有表达，B组表达最低。

结论：Livin的表达在PCO的形成过程中具有相应的时相性，为进一步探索PCO的基因治疗提供了理论依据。]]> 2013/11/25 11:01:51 251true 方法：采用裂解液溶解白内障晶状体组织样本，超声裂解离心后分别采用三氯乙酸/丙酮法和ReadyPrep 2D Cleanup Kit对晶状体蛋白样本进行提取、二维电泳，并对电泳后凝胶进行染色、图像采集和图像分析。

结果：在2-DE图谱上蛋白斑点的相对分子量在14～97.4kDa之间，等电点在5～9之间，其中高丰度蛋白相对分子量处于20～31kDa范围内，低丰度蛋白斑点相对分子量处于31～43kDa范围内。经TCA/丙酮沉淀法处理的含有透明质酸钠白内障晶状体蛋白样本，二维电泳凝胶图谱背景较清晰，蛋白斑点较清楚，共检测到35～40个左右的蛋白斑点。

结论：在人白内障晶状体蛋白质组学研究中，TCA/丙酮法具有较好的纯化效果，为人晶状体组织蛋白质组学的质谱分析研究提供了可靠的二维电泳凝胶图谱。]]> 2013/11/25 11:01:51 250true 方法：通过蓝光诱导建立hRPE细胞光损伤模型，分别用不同浓度的枸杞多糖(分别为0.01，0.1，1mg/mL)对体外培养的 hRPE细胞进行干预，通过流式细胞仪检测各实验组的细胞线粒体活性氧和凋亡率。实验组分为正常对照组、光照损伤组以及不同浓度枸杞多糖(0.01，0.1，1mg/mL)干预组。

结果：线粒体活性氧检测：正常对照组荧光强度最小； 蓝光损伤组荧光强度最大，不同浓度枸杞多糖处理组荧光度与蓝光损伤组强度相比，荧光强度差异有统计学意义(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI凋亡检测显示不同浓度枸杞多糖干预组凋亡细胞数量与蓝光损伤组凋亡细胞相比差异均有统计学意义(P<0.05)； 1mg/mL枸杞多糖干预组凋亡细胞数量与对照组凋亡数量相比差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：枸杞多糖能抑制蓝光诱导损伤的hRPE细胞的凋亡，1mg/mL枸杞多糖抑制蓝光诱导的hRPE细胞凋亡的作用更强，其作用机制可能与抑制细胞线粒体产生活性氧有关。]]> 2013/11/25 11:01:51 249true 方法：健康青紫蓝兔20只随机分为A组16只(激光损伤组)和B组4只(正常对照组)，使用倍频532nm激光照射A组兔视网膜(光斑大小200μm，脉宽0.05s，光斑Tso Ⅲ)，B组未行光凝。按激光光凝术后不同时相点：1d； 1，2wk； 1mo观察眼底照片的改变、光镜下组织形态学改变、电镜下超微结构的改变及光斑直径在不同时相点的变化。

结果：(1)眼底照相：随时间推移，光斑由术后1d时的浓白色水肿外观变为术后1mo时的黑色素附着区域；(2)光镜观察：光凝后光斑区域主要损伤集中在视网膜外层，光感受器细胞坏死、凋亡，随时间推移，胶质细胞、色素细胞充填损伤区域，形成纤维增殖；(3)电镜观察：光凝后出现明显的视细胞外节膜盘结构模糊，排列紊乱，线粒体嵴模糊、断裂甚至消失，明显的空泡样变，术后1wk开始即出现细胞染色质集边等凋亡改变，后期胶原纤维增殖；(4)光斑大小：光斑大小从术后1d时的最大值随时间推移，逐渐变小，术后1wk时光斑大小缩小15%，术后2wk时光斑大小缩小20%，术后1mo时光斑大小缩小21%。

结论：倍频532nm激光照射青紫蓝兔黄斑区，光斑反应术后1d时最为明显，至术后2wk左右基本稳定。]]> 2013/11/25 11:01:51 248true 方法：将1月龄健康雄性Wistar大鼠150只，体质量200g左右，采用随机数字法分为5组，每组30只。分别为：A：正常组； B：假手术组； C：手术对照组； D：雄激素治疗组； E代表：密蒙花总黄酮治疗组； 将C，D，E三组实验鼠切除双侧睾丸及附睾； B组只切开阴囊而不切除睾丸，作为假手术组； A组不做任何处理。各组在造模后1wk，待伤口基本愈合后开始用药。各组实验动物分别于用药1，3，5mo后随机取10只， 行Schirmer Ⅰ试验(SⅠt)、测量泪膜破裂时间(breaking up time，BUT)，于第5mo，抽血测定血清睾酮水平。

结果：D，E组SⅠt测量值明显高于C组(P<0.05)、BUT明显长于C组(P<0.05)，血清睾酮水平C，E组明显低于A，B，D组(P<0.0l)。

结论： 雄激素水平下降可导致干眼病，采用双侧睾丸及附睾切除的方法可成功建立雄激素水平下降所致的大鼠干眼病动物模型。密蒙花总黄酮具有拟雄激素效应，能够产生同丙酸睾酮治疗干眼病相似的效果。密蒙花总黄酮可能成为治疗干眼病的一个全新药物。]]> 2013/10/28 11:29:57 247true 方法：选取60只大鼠，随机分为4组，分别为正常组、模型组、实验组、生理盐水组，每组15只大鼠。除正常组外其余各组均行氪激光光凝制作CNV模型，模型组不做任何处理，实验组均在光凝后每日行腹腔注射银杏叶提取物(Extract of Ginkgo Biloba，EGb761)，生理盐水组在光凝后每日腹腔注射生理盐水。于光凝后7，14，21d后对各组大鼠行眼底造影检查，观察CNV的渗漏情况，然后立即处死各组动物，行脉络膜视网膜切片，HE染色后观察各组视网膜及脉络膜的结构和CNV的情况。

结果：荧光造影结果显示正常大鼠脉络膜无渗漏，7d时各组大鼠脉络膜渗漏均较轻微，14，21d时模型组和生理盐水组大鼠脉络膜渗漏明显，实验组大鼠脉络膜荧光素渗漏点数明显要少于对应的模型组和生理盐水组差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠的视网膜、脉络膜结构保存比模型组更好。

结论：腹腔注射EGb761可以明显减少大鼠CNV的形成，用药时间越长，疗效越好。]]> 2013/10/28 11:29:57 246true 1(transforming growth factor-β₁， TGF-β₁)对甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy，TAO)患者纤维化眼外肌来源的成纤维细胞(orbital fibroblasts，OF)细胞Smad3，Smad4，Smad7基因表达的影响。

方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶连反应(real-time quantitative RT-PCR)观察5μg/L TGF-β₁刺激OF在不同时间点(0h； 15，30min； 1，2，4h)表达Smad3 mRNA，Smad4 mRNA，Smad7 mRNA的变化。

结果： 5μg/L TGF-β₁刺激OF 15min后，Smad3 mRNA的表达量已显著增加，为对照组的10.71倍，于1h达顶峰，为对照组的25.07倍(P<0.01)，持续近2h，然后呈下降趋势，4h基本恢复正常； 5μg/L TGF-β₁刺激OF 15min后，Smad4 mRNA的表达量开始增加，为对照组的1.54倍，于1h达顶峰，为对照组的15.99倍(P<0.01)，然后呈下降趋势，4h基本恢复正常； 5μg/L TGF-β₁刺激OF 30min后，Smad7 mRNA的表达量明显开始增加，为对照组的3.21倍，持续至4h为对照组的14.66倍(P<0.01)。

结论：TGF-β₁可活化眼眶成纤维细胞Smads信号通路。在一定的时间范围内，诱导OF表达Smad3 mRNA和Smad4 mRNA呈先增加后下降的趋势，而Smad7 mRNA表达则呈现持续增加的趋势，说明TGF-β₁/Smads这一纤维化相关的经典信号转导通路可能在TAO眼外肌纤维化机制中发挥了重要的作用。]]> 2013/9/23 14:08:04 245true 方法：将实验大鼠分为正常组、拮抗剂组、糖尿病组。腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型。拮抗剂组、糖尿病组分别于成模后1wk玻璃体腔注射AMD3100和PBS。随后各组球后多次球后注射相应药物。实验方法采用RT-PCR和Western-Blot。RT-PCR实验共饲养三组大鼠60只，各组均于1，3，5mo处死部分大鼠，各组提取标本，RT-PCR检测并HE染色观察视网膜血管增生情况。Western-Blot实验将18只大鼠分为正常对照组、4组不同剂量AMD3100的拮抗剂组及糖尿病组共6组，饲养时间均为3mo。

结果：RT-PCR检测1，3，5mo各同龄组中三组间大鼠视网膜SDF-1和VEGF mRNA的表达均有显著统计学差异(P<0.01)，且均以糖尿病组表达最高，拮抗剂组的表达低于糖尿病组。随着糖尿病病程的延长，SDF-1和VEGF mRNA的表达进一步增加，视网膜HE染色切片上突破内界膜的内皮细胞核数明显增加。Western-Blot检测表明，在一定范围内随着拮抗剂AMD3100浓度的增大，SDF-1和VEGF的蛋白表达量逐渐减少，差异具有显著统计学差异(P<0.01)； 当继续增加浓度(玻璃体腔注射>10μg/μL)，SDF-1和VEGF的蛋白表达量无明显改变，差异无统计学意义(4和5组相比，P>0.05)。

结论：随着糖尿病视网膜病变病程的进展，糖尿病大鼠视网膜组织里VEGF和SDF-1 mRNA的表达量增加。SDF-1受体拮抗剂 AMD3100可降低SDF-1和VEGF的蛋白表达。这种拮抗作用在一定的浓度范围内，其抑制作用有剂量依从性，剂量越大，抑制作用越强。]]> 2013/9/23 14:08:04 244true 方法：在正常和高糖条件的培养基中，分别加入0.1mmol/L和0.5mmol/L的人参皂甙Rg3，在24h，48h和72h用MTT检测细胞的增殖情况，用Transwell小室检测细胞迁徙情况，用Matrigel检测细胞管腔形成的情况，用实时定量RT-PCR和Western-Blot检测细胞中血管内皮生长因子 mRNA和蛋白的表达情况。

结果：在正常和高糖条件下，人参皂甙Rg3对于人视网膜血管内皮细胞增殖、细胞迁徙和细胞内皮管腔形成均具有抑制作用，且呈浓度与时间依赖性； 且人参皂甙Rg3具有抑制人视网膜血管内皮细胞VEGF蛋白和mRNA表达的作用。

结论：通过抑制VEGF的表达，人参皂甙Rg3可抑制人视网膜血管内皮细胞增殖、迁徙和管腔形成，进而抑制新生血管的形成。]]> 2013/9/23 14:08:04 243true 方法：用不同浓度的曲尼司特0(对照组)，12.5，25，50，100mg/L作用于体外培养的3～5代人RPE细胞(RPE-19细胞株)，在倒置显微镜下、结合HE染色观察细胞形态，并采用细胞角蛋白CK18对细胞进行鉴定。分别在作用12，24，48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞抑制率，蛋白质印迹法(Western-Blot)和免疫组织化学法观察不同浓度的曲尼司特作用24h后细胞表达转化生成因子-β₁(TGF-β₁)、血小板衍化生长因子受体A(PDGFR-A)蛋白的情况。

结果：相同时间点不同浓度曲尼司特对细胞抑制率随浓度增加而增大，差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β₁蛋白表达定位于细胞浆，PDGFR-A蛋白定位于胞膜和胞浆，它们的表达量都随曲尼司特浓度的增加而下调，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：曲尼司特可以抑制人RPE细胞的增殖，并有剂量依赖性，其机制可能与下调TGF-β₁和PDGFR-A蛋白表达有关。]]> 2013/9/23 14:08:04 242true 方法：采用细胞体外培养技术，用铁锈建立hRPE细胞增殖分化模型。设置空白组、铁锈组、抗PDGFR-ɑ抗体(1，10，50，100μg/mL)处理组，分别作用0，12，24，48h后采用MTT比色法测定hRPE细胞的抑制率。

结果：加入抗PDGFR-ɑ抗体后hRPE细胞增殖活性在一定浓度范围内随着抗体浓度增加而下降，而50μg/mL抗PDGFR-ɑ抗体为抑制hRPE细胞增殖的最佳浓度，其抑制率为42.44%。

结论：抗PDGFR-ɑ抗体可以抑制hRPE细胞的增殖活性。]]> 2013/9/23 14:08:04 241true 方法：健康SD大鼠，以50mg/kg体质量单次腹腔注射1%链脲佐菌素的方法处理，以血糖值大于16.7mmol/L定为糖尿病模型； 然后随机分成3组，每组10只。另取10只健康SD大鼠作对照组。再依次对4组大鼠进行双侧眼球玻璃体腔内注射NgR小干扰病毒10μL(siRNA组)、NgR小干扰病毒稀释液10μL(DM组)、NgR小干扰病毒阴性对照液10μL(siRNA空白组)、NgR小干扰病毒稀释液10μL(正常对照组)，正常喂养。期间对血糖、体质量等一些生命指标进行观查、测量并记录。12wk后，行视网膜Western blot检测NgR、Rhoa的表达，HE染色、TUNEL染色。

结果：Western检测：与正常对照组相比，DM组和siRNA空白组中NgR、Rhoa表达明显增加(P<0.01)，而siRNA组无明显变化(P>0.05)； 与DM组和siRNA空白组相比，siRNA组NgR、Rhoa表达明显下调。HE染色：与正常对照组相比，三组模型鼠均有不同程度节细胞排列紊乱、形态不规则、间距不一致； 与DM组和siRNA空白组相比，siRNA组节细胞在排列顺序、外形大小等有一定程度改善。TUNEL染色：与正常对照组相比，三组模型鼠均有节细胞凋亡； 与DM组和siRNA空白组相比，siRNA组凋亡细胞数量较少，细胞外形有明显改善。

结论：DM时大鼠视网膜NgR、Rhoa表达上调，抑制NgR-Rhoa-Rock可以改善糖尿病视网膜神经节细胞的凋亡。]]> 2014/8/19 14:40:38 240true 方法：成年家兔43只，随机选取40只兔双眼行角膜基质层缝线建立兔角膜新生血管模型，造模成功后右眼(A组)未行特殊处理，左眼(B组)给予地塞米松局部注射，未造模3只兔双眼为正常对照，造模后裂隙灯动态观察新生血管的形态并计算其生长面积，并分别于造模后1，4，7，14，21d各处死8只兔，取角膜新生血管组织行HE染色观察其病理学特点，并检测角膜中IL-1β及TNF-α的表达情况。

结果：缝线后4d可见CNV长入，7～14d生长最为旺盛，HE染色见炎性细胞浸润，浅基质层大量新生血管生长，免疫组化染色提示，随缝线时间延长角膜IL-1β及TNF-α的表达逐渐增加； 而经地塞米松治疗后，CNV较前延迟长入，面积缩小，炎性细胞浸润减轻，且角膜中IL-1β及TNF-α的表达较单纯缝线眼明显降低，结果有统计学意义(P<0.05)。

结论：地塞米松可能通过早期抑制角膜组织中IL-1β及TNF-α表达而抑制新生血管的生长。]]> 2014/8/19 14:40:38 239true 方法：体外培养hRPE细胞，以60mmol/L的葡萄糖建立高糖模型，实验分对照组(5.5mmol/L的葡萄糖)和高糖24，48，72h组，用免疫组织化学法及Real-time PCR技术检测各组RPE细胞N-cadherin和fibronectin的表达。

结果：高糖组RPE细胞出现排列紊乱，胞体变长变大，高糖72h组最明显。免疫组织化学法检测结果显示：与对照组相比，高糖组RPE细胞N-cadherin表达呈下降趋势； 而fibronectin表达出现并呈升高趋势。Real-time PCR检测结果显示：与对照组相比，高糖组RPE细胞N-cadherin mRNA表达水平在24h时出现下降，72h时降低最明显(F=12.252，P=0.000)，24h组与对照组相比差异无统计学意义，48h及72h组分别与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)； 与对照组相比，高糖组RPE细胞fibronectin mRNA表达水平在24h时出现升高，72h时升高最明显(F=50.543，P=0.000)，24h组与对照组相比差异无统计学意义，48h及72h组fibronectin mRNA表达水平明显升高，分别与对照组相比差异有统计学意义(P=0.000，P=0.000)。

结论：高糖条件下RPE细胞上皮标记物N-cadherin表达下调，间质标记物fibronectin表达出现，发生EMT改变，这一现象为探讨增生性糖尿病视网膜病变的发病机制及其防治提供新的思路。]]> 2014/8/19 14:40:38 238true 方法：SD雄性大鼠72只，建立大鼠急性视神经钳夹损伤模型，随机分为正常组、PBS阴性对照组、大豆黄酮治疗组(10μmol/L，100μmol/L，1 000μmol/L)、鼠神经生长因子(mNGF，100ng/mL)阳性对照组； 玻璃体内注射3d后处死各组大鼠，用组织病理(HE)、免疫组化检测以及Western Blot分析来观察和评价视网膜形态变化及进行各组间视网膜Caspase-3蛋白和GAP-43蛋白表达的比较。

结果：与正常组和阴性对照组相比，不同浓度的大豆黄酮各治疗组和阳性对照组的视网膜形态结构较完整，Caspase-3蛋白的表达相对降低，GAP-43蛋白的表达相对较高，其差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：大豆黄酮玻璃体腔注射对大鼠急性视神经损伤具有修复和保护作用。]]> 2014/7/22 8:27:34 237true 方法：采用hRPE细胞株，将细胞分为正常对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖对照组(15，20，30mmol/L葡萄糖)、PD98059处理组(20μmol/L p42/p44MAPK高效选择性抑制剂PD98059处理hRPE细胞)和溶剂二甲基亚砜对照组(dimethyl sulfoxide，DMSO组)。应用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测VEGF及色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium derived factor， PEDF)mRNA的表达。应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)技术检测细胞上清液中VEGF蛋白的表达

结果：高糖作用下VEGF mRNA和蛋白表达显著增高，PD98059处理组VEGF mRNA和蛋白表达受到抑制，且VEGF mRNA/PEDF mRNA比值较高糖组显著降低。

结论：p42/p44MAPK信号转导通路可能参与了高糖引起的hRPE细胞VEGF的表达。]]> 2014/7/22 8:27:34 236true ELOVL4是常染色体显性Stargardt氏黄斑变性的致病基因，ELOVL4蛋白酶参与n3和n6超长链多不饱和脂肪酸(very long chain polyunsaturated fatty acid，VLC-PUFA)的合成，比较两者的生物合成效率，对治疗Stargardt氏黄斑变性有指导意义。

方法：构建携带ELOVL4基因和绿色荧光蛋白的重组腺病毒，转入培养的PC12细胞，将细胞分成三组：PC12、PC12+Ad-GFP和PC12+Ad-ELOVL4，前两组为对照组，通过qRT-PCR定量分析ELOVL4基因的表达量，Western Blot检测ELOVL4蛋白的表达； 等浓度(1：1)加入EPA(n3 PUFA)和AA(n6 PUFA)，孵育48h之后进行脂肪酸提取，通过气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry， GC-MS)分析超长链脂肪酸的成分。

结果：GC-MS检测到分别用EPA和AA处理后的PC12+Ad-ELOVL4的细胞中有n3 VLC-PUFA的表达，34：5n3和 36：5n3是20：5n3/EPA的主要产物，分别为0.71%和1.6%； 34：4n6 和 36：4n6是20：4n6/AA的主要产物，分别为0.46%和0.61%； EPA所产生的n3 VLC-PUFAs总和是AA所产生的n6 VLC-PUFAs总和的2倍。

结论：在ELOVL4蛋白作用下，EPA合成VLC-PUFAs的效率高于AA，饮食中给予适当比例的n3/n6 PUFAs，可能是治疗STGD3疾病的方式之一。]]> 2014/7/22 8:27:35 235true 方法：采用角膜微囊袋法建立以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的大鼠CNV模型，采用眼前段照相，免疫组化染色、彩色图像分析系统分别计算1，4，7，10，14d共5个时间点的CNV面积和Slit3， Robo4的平均光密度值。

结果：Slit3及Robo4在新生血管化角膜中表达增加，在第7d达到最高，且二者的表达水平与CNV的面积除第1d外，在其他各时间点均呈正相关(r=0.84～0.91，P<0.05)。

结论：Slit3/Robo4与CNV形成明显相关，其可能成为抑制CNV的重要靶点。]]> 2014/6/19 9:55:00 234true 方法：新西兰大白兔45只，随机分为(A，B，C，D，E)五组恒温烧灼器诱导实验性CNV模型，除E组为5只，其他组均为10只。A组：100℃，B组：200℃，C组：300℃，D组：400℃，E组：空白对照。以左眼为实验眼，比较建模后第4，7，14，30d在裂隙灯显微镜下观察各组角膜新生血管的生长情况并计算角膜新生血管生长面积。采用SPSS 19.0统计软件包对数据进行分析，计算资料用(-overx)±s表示，各时间点各自新生血管面积的比较采用重复测量数据的方差分析； 显著性标准为α=0.05。

结果： 制模后第4，7，14，30d，A组角膜热烧伤后无明显新生血管生长，仅少量留有角膜云翳(n=2)。B组新生血管面积分别为：9.16±1.45，37.73±5.49，62.44±7.54，40.28±7.39mm²； C组新生血管面积分别为：11.45±1.04，44.51±4.64，66.13±4.13，43.04±2.33mm²； D组新生血管面积分别为：13.23±0.86，47.26±4.59，67.57±4.56，45.59±4.44mm²； D组部分角膜局部出现焦化(n=4)，3d内出现穿孔(n=6)。E组未见新生血管生长。各时间点的CNV面积比较，差异有显著性(P<0.05)，B，C，D分组之间有统计学差异(P<0.05)。

结论：角膜热烧伤4～7d时，制模温度越高，新生血管生长越快，面积越大； 14～30d新生血管面积无明显差别，但400℃角膜制模失败率高，200℃～300℃制作的兔角膜新生血管模型均一性及重复性高。]]> 2014/6/19 9:55:00 233true 方法：设计合成3对针对大鼠IκBα基因的siRNA，体外转染表达IκBα基因的大鼠A7r5细胞，通过流式细胞仪检测转染效率，并经Real Time-PCR及western blot在mRNA及蛋白水平筛选对IκBα表达抑制率最高的序列。通过前房注射选出的siRNA进行大鼠体内转染，荧光显微镜下观察其在大鼠睫状肌的分布并利用Real Time-PCR及免疫荧光验证其对该部位IκBα基因沉默的有效性。

结果：体外筛选证明针对大鼠IκBα基因CTACGATG ACTGTGTGTTT靶序列的siRNA对IκBα的表达抑制效果最明显，大鼠前房注射该siRNA可到达睫状肌，并能有效抑制该部位IκBα基因的表达，IκBα mRNA水平在转染后24h降低最明显，抑制率达59.0%，而蛋白水平则在72h达最低，抑制率为52.3%(P<0.01)。

结论：针对大鼠IκBα基因CTACGATGACTGTGTGTTT靶序列的siRNA是对大鼠睫状肌IκBα基因进行体内RNA干扰的有效序列。]]> 2014/5/22 9:13:00 232true 方法：SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、正常波动组(NF)、糖尿病模型组(DM)和糖尿病波动组(DF)。腹腔注射STZ诱导糖尿病，NF和DF两组大鼠每天三次腹腔注射葡萄糖造成血糖波动，第8wk取视网膜，采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测DNA损伤程度。

结果：NF和DF两组大鼠血糖变化明显而且规律，波动曲线稳定，评价血糖稳定性的各项指标较NC组均有明显的增高，DF组升高更显著，差异有统计学意义(P<0.01)。SCGE显示NF，DM和DF三组细胞均有不同程度的DNA损伤，彗星尾长(TL)、尾部DNA含量(TDNA%)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)四指标均高于NC组，多组及两组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。

结论：糖尿病大鼠视网膜组织存在DNA损伤，血糖波动可加重损伤，表明高血糖和血糖波动可能参与了视网膜组织DNA损伤的机制，可能是DR发生的早期事件之一，在DR的发生发展中起了重要的作用。]]> 2014/5/22 9:13:00 231true 方法：采用532nm激光光凝建立小鼠脉络膜新生血管模型，2wk后进行病理组织学检查，观察CNV的形成情况。取40只成功造模的小鼠，随机分成空白对照组(1组，10只)、生理盐水组(2组，10只)、内皮抑素组(3组，10只)和avastin组(4组，10只)，光凝后2wk玻璃体腔给药1次，1wk后取材行HE、免疫组化染色观察结果。统计分析采用SPSS 16.0，方法为方差分析，多个样本两两比较用LSD-t检验，取P<0.05作为检验水准。

结果：2wk后HE病理组织学检查，光镜下可见大量新生血管形成，CNV阳性检出率为72.8%。生理盐水组与对照组比较，P>0.05，对CNV无抑制作用； 内皮抑素组与空白对照组比较，P<0.05，具有一定的抑制效应； avastin组与空白对照组比较，P<0.05，对CNV有明显的抑制效应； 对avastin和内皮抑素组进行LSD-t检验，得出P<0.05，差别有统计学意义，可以认为两者抑制CNV的效应是不相等的，由于(-overx)_avastin =26.90，(-overx)_内皮抑素=29.13，(-overx)_avastin<(-overx)_内皮抑素，我们可推测，内皮抑素的抗CNV作用弱于avastin。

结论：激光诱导有色小鼠C57BL/6J的CNV动物模型，成模时间短，成模率高，是进行CNV研究的理想模型。内皮抑素对CNV具有一定的抑制作用，未来很有可能成为眼科临床抗击CNV相关疾病的重要药物。]]> 2014/5/22 9:13:00 230true 方法：免疫组织化学方法(PV)检测翼状胬肉(72眼)及胬肉旁结膜组织(30眼)中TNF-α及其受体P55的表达，分析与翼状胬肉临床病理特征的关系。

结果：TNF-α在翼状胬肉和胬肉旁结膜组织中的阳性表达率分别为65.3%(47/72)，26.7%(8/30)，差异有显著统计学意义(χ²=12.706，P<0.01)。P55在翼状胬肉和胬肉旁结膜组织中的阳性表达率分别为56.9%(41/72)及16.7%(5/30)，差异有显著意义(χ²=13.875，P<0.01)。TNF-α在复发性胬肉的阳性表达率高于初发性胬肉(χ²=6.547，P=0.011)，表达强度差异比较无统计学意义(F=1.288，P=0.393)； 进展期胬肉阳性表达率高于静止期胬肉(χ²=4.082，P=0.043)，表达强度比较无统计学意义(F=0.489，P=0.708)。P55在复发性胬肉的阳性表达率高于初发性胬肉(χ²=9.907，P=0.002)，表达强度比较无统计学意义(F=1.175，P=0.424)； 进展期胬肉的阳性表达率明显高于静止期胬肉(χ²=11.140，P=0.001)，表达强度比较无统计学意义(F=0.665，P=0.621)。

结论：TNF-α及P55在翼状胬肉中的阳性表达率随着发病状态和临床分期的进展而变化。TNF-α及P55表达与临床分类、临床分期、患者工作生存状况相关。TNF-α及P55在翼状胬肉不同发病状态及临床分期的表达强度无明显差异。]]> 2014/5/22 9:13:00 229true 方法：小鼠54只随机分为两组，高脂饲料喂养19wk，其中一组同时每天按80mg/kg给予LOM灌胃。筛选出肥胖组(DIO)和肥胖+洛美利嗪组(DIO+LOM)，对照组(CON)小鼠给予基础饲料。至第19wk末，应用透射电镜观察各组小鼠RGCs的超微结构改变，采用TUNEL法检测各组小鼠RGCs的凋亡情况，并应用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子的浓度。

结果：透射电镜结果显示，与CON组比较，DIO组小鼠RGCs体积变小，细胞质分布紊乱，核染色质发生固缩，而DIO+LOM组小鼠RGCs的形态学改变较DIO组明显减轻。TUNEL法检测结果显示，与CON组比较，DIO组小鼠GCL层可见较多的凋亡细胞，其细胞凋亡率显著升高(P<0.01)，DIO+LOM组RGCs的凋亡率与DIO组比较显著降低(P<0.05)。激光共聚焦结果显示，与CON组比较，DIO组小鼠RGCs内Ca²⁺荧光染色明显增强，其荧光染色强度比值显著升高(P<0.01)，而DIO+LOM组RGCs内Ca²⁺荧光染色强度较DIO组有明显下降(P<0.01)。

结论：洛美利嗪对肥胖引起的RGCs的损伤和凋亡具有保护作用，其机制可能与减轻细胞内Ca²⁺超载有关。]]> 2014/3/24 14:01:48 228true 方法：Wistar大鼠140只，随机分为正常对照组(A组)20只、高眼压对照组(B组)60只、高眼压孕酮干预组(C组)60只。应用生理盐水前房灌注的方法建立大鼠急性高眼压模型，C组在高眼压后即刻予腹腔注射孕酮4.0mg/kg，以后于6，24h以及隔日行皮下注射，B组于相同时间注射等量的生理盐水。于高眼压后1，3，7d分别获取各组大鼠的视网膜组织。HE染色观察视网膜病理学的变化，用免疫组化染色、Western blot检测视网膜细胞凋亡基因Caspase-3蛋白的表达情况，TUNEL法检测细胞的凋亡程度，并对各组数据进行统计学分析。

结果：B组和C组的大鼠视网膜均发生水肿， C组水肿程度明显低于B组。免疫组化染色及Western blot相对定量检测，C组Caspase-3表达程度低于B组。Caspase-3蛋白主要表达于视网膜神经节细胞层和内核层，于高眼压后第1d强度最大，以后随时间的推移逐渐减少。TUNEL检测细胞凋亡，B组和C组均出现阳性细胞，主要位于视网膜的节细胞层和内核层，C组细胞凋亡数量明显低于B组。

结论：孕酮对大鼠视网膜急性高眼压损伤有保护作用。]]> 2014/3/24 14:01:48 227true 方法： SD大鼠随机分为对照组(CON)、糖尿病组(DM)及洛美利嗪组(LOM)，每组40只大鼠。DM和LOM组链脲佐菌素(STZ)按60mg/kg一次性腹腔注射诱导糖尿病模型，CON组给予等量无菌柠檬酸钠溶液腹腔注射。LOM组于糖尿病鼠模型成模后，每日予LOM 60mg/kg灌胃，CON组和DM组采用等量生理盐水灌胃。于第4，8，12wk分别行HE、透射电镜、TUNEL检测RGCs的凋亡情况，同时采用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子的浓度。

结果：(1)形态学观察：随病程延长，逐渐出现RGCs数量减少、细胞排列紊乱的病理改变。透射电镜下可见DM组RGCs出现不同阶段的凋亡征象，且随病程延长逐渐加重。LOM组与同期DM组对比，在第8，12wk时RGCs凋亡征象减弱。(2)TUNEL检测：CON组大鼠视网膜神经节细胞层未见凋亡细胞。DM组4wk时视网膜神经节细胞层偶见TUNEL 阳性细胞，并随病程延长逐渐增多，凋亡指数与同期CON组比较明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。LOM 组8，12wk时，与同期DM组比较，染色阳性的RGCs明显减少，凋亡指数明显下降，差异显著(P<0.01)。(3)激光共聚焦显微镜钙离子浓度检测：DM组与同期CON组比较：DM组8，12wk 的RGCs内钙离子荧光染色强度明显升高，有显著差异(P<0.01)。LOM组与同期DM组比较：LOM 组8，12wk的RGCs内钙离子荧光染色强度明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)。

结论：LOM对糖尿病大鼠早期RGCs的凋亡具有保护作用。]]> 2014/3/24 14:01:48 226true 方法：视网膜色素上皮细胞经紫外线A照射、高渗和低渗培养后不同时间点，通过定量PCR方法测定甜菜碱/γ-氨基丁酸转运蛋白，钠依赖式肌醇转运蛋白和牛磺酸转运蛋白mRNA的表达水平，通过放射性同位素标识的渗透压小分子物质测量渗透压小分子物质在不同实验条件下的细胞内外转运过程。

结果：本研究证明视网膜色素上皮细胞表达甜菜碱/γ-氨基丁酸转运蛋白，钠依赖式肌醇转运蛋白和牛磺酸转运蛋白mRNA。高渗(400mosmol/L)相对于等渗(300mosmol/L)引发甜菜碱/γ-氨基丁酸转运蛋白、钠依赖式肌醇转运蛋白和牛磺酸转运蛋白的mRNA升高约3～5倍。高渗同时引发放射性同位素标记的渗透压小分子物质细胞内积聚。相反，低渗(200mosmol/L)引发渗透压小分子物质外流至细胞外。紫外线A照射明显引发渗透压小分子物质向细胞内摄入。与此同时，紫外线A照射还引发细胞膜相应转运蛋白的mRNA的上调。

结论：本实验表明紫外线A可以引发与高渗相类似的渗透压小分子物质的细胞内积聚效应，这种效应对保持细胞内稳态有重要作用。]]> 2014/3/24 14:01:48 225true 方法：贴壁筛选法分离、培养大鼠MSCs，流式细胞仪对其细胞纯度鉴定。取材大鼠视网膜神经上皮层作为视网膜片，常规石蜡切片HE染色鉴定各层组织完整性。电镜观察大鼠视网膜片光损伤程度。制备3种诱导分化大鼠MSCs的条件培养液。3种条件培养液均培养诱导至第3代大鼠MSCs 7～8d，用RT-PCR检测视紫红质(Rhodopsin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)等视网膜细胞标志物在诱导后细胞中的表达情况。

结果：HE染色显示大鼠视网膜片取材结构完整，电镜显示大鼠视网膜片光损伤后结构损伤严重。RT-PCR鉴定：条件培养液诱导大鼠MSCs 7～8d，条件培养液Ⅰ组Rhodopsin(0.3915±0.00644)、NSE(0.2019±0.00682)、GFAP(0.1972±0.00211)，条件培养液Ⅱ组Rhodopsin(0.0983±0.00319)、NSE(0.1048±0.00323)、GFAP(0.1040±0.00254)，条件培养液Ⅲ组Rhodopsin(0.0044±0.00126)、NSE(0.0498±0.00149)、GFAP(0.0467±0.00333)，组间差异有统计学意义。

结论：光损伤大鼠视网膜片培养上清液可诱导大鼠MSCs分化为视网膜样细胞，为干细胞治疗视网膜变性疾病提供新思路。]]> 2014/2/27 9:12:34 224true 方法：高脂饲料喂养19wk后，小鼠分为肥胖抵抗(DIO-R)组和肥胖倾向(DIO)组，同时对照组(CON)小鼠给予基础饲料。TUNEL法检测各组小鼠RGCs的凋亡情况，并应用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子的浓度。

结果：TUNEL法凋亡检测结果显示，DIO组小鼠视网膜神经节细胞层可见较多黄色着染的凋亡细胞，其凋亡指数为(6.7±1.2)%，显著高于对照组和DIO-R组(P<0.01，P<0.05)； 对照组和DIO-R组间比较无显著差异(P>0.05)。激光共聚焦结果显示，与对照组和DIO-R组比较，DIO组小鼠视网膜神经节细胞内Ca²⁺荧光染色明显增强，其荧光染色强度比值显著升高(均P<0.01)； 对照组和DIO-R组视网膜神经节细胞内Ca²⁺荧光染色强度无明显差异(P>0.05)。

结论：细胞内钙离子超载可能介导了肥胖型C57BL/6小鼠视网膜神经节细胞的凋亡过程。]]> 2014/2/27 9:12:34 223true 方法：SD大鼠60只，随机分为对照组(CON)及糖尿病组(DM)，糖尿病组一次性腹腔注射1% STZ诱发糖尿病鼠模型，两组于第4，8，12wk分别行HE、透射电镜及TUNEL法检测RGCs的凋亡情况，并应用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子浓度的变化。

结果：糖尿病组第8wk开始出现RGCs数量减少、细胞排列紊乱的病理改变，第12wk更为明显。糖尿病组透射电镜下可见第4wk时RGCs出现线粒体肿胀； 第8wk时RGCs内肿胀的线粒体更为明显、数目增多，染色质边集于核膜周边，部分细胞体积缩小、细胞器减少； 第12wk时出现RGCs体积变小，甚至出现细胞核断裂。TUNEL阳性RGCs最早于糖尿病组第4wk时出现，随病程延长凋亡的阳性细胞逐渐增多，凋亡指数与同期对照组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。糖尿病组第8，12wk时RGCs内钙离子浓度明显高于同期对照组，差异显著(P<0.01)； 糖尿病组第8wk与第12wk比较，升高差异亦有统计学意义(P<0.05)。

结论：糖尿病早期出现了视网膜神经节细胞的凋亡，其机制可能与细胞内钙离子浓度升高有关。]]> 2014/2/27 9:12:34 222true 方法：选取7日龄SD大鼠80只随机分为正常对照组、单纯高氧组、雌二醇干预组以及溶媒干预组，单纯高氧组于氧浓度75%的容器内饲养5d，再置正常空气下饲养至17日龄，雌二醇干预组饲养方法同单纯高氧组，在大鼠7～17日龄间每日皮下注射17β-雌二醇(E₂，植物油稀释，配制浓度为2μg/μL)，每只大鼠0.5μL/d，溶媒干预组饲养方法与雌二醇组相同，药物改为相同体积植物油。通过HE染色、视网膜铺片观测血管改变和增生情况，免疫组化及RT-PCR检测VEGF的表达。

结果：雌二醇干预组突破内界膜的内皮细胞较单纯高氧组及溶媒干预组明显减少(P<0.05)； 视网膜铺片可见雌二醇干预组较之单纯高氧组血管网有不同程度的改善，血管结构清晰，形态基本正常； 免疫组织化学染色以及RT-PCR结果显示： VEGF在雌二醇干预组的表达较之单纯高氧组及溶媒干预组降低，但仍高于正常组。

结论：17β-雌二醇可在一定程度上预防ROP新生血管的产生，机制可能与抑制VEGF的表达相关。]]> 2014/2/27 9:12:34 221true 方法：体外常氧培养及缺氧培养OCM-1细胞。其中，缺氧培养是通过在培养基中加入浓度为100μmol/L的氯化钴(CoCl₂)模拟肿瘤内部缺氧微环境，并将缺氧培养细胞分为单纯缺氧组、HIF-1α干扰组、β-actin阳性对照组、无义寡核苷酸阴性对照组及空载脂质体对照组。体外设计合成siRNA(包括HIF-1α-siRNA、β-actin-siRNA及阴性对照)，以Lipofectamine^TM 2000为载体介导siRNA转染缺氧培养的OCM-1细胞，以RT-PCR和Western blot检测缺氧培养前后及转染前后HIF-1α、Vimentin基因和蛋白的表达。

结果：单纯缺氧组与常氧组相比，HIF-1αmRNA表达无明显差异(P>0.05)，蛋白表达显著升高(P<0.01)，而Vimentin mRNA和蛋白的表达均显著升高(P<0.01)。缺氧培养的各组之间相比，阳性对照组β-actin mRNA表达下降(P<0.01)，证实转染成功； 干扰组HIF-1α、Vimentin mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.01)，阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别(P>0.05)。

结论：缺氧可促使OCM-1细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并可通过转录激活下游靶基因Vimentin，使其在mRNA和蛋白水平表达均升高，提示HIF-1α可能参与调控葡萄膜黑色瘤的EMT，进而促进肿瘤侵袭、转移； HIF-1α-siRNA转染OCM-1细胞可成功下调HIF-1α及Vimentin的表达，说明从分子水平抑制HIF-1α的表达，可能抑制肿瘤侵袭、转移，从而为肿瘤治疗提供新方向。]]> 2014/2/27 9:12:34 220true 方法：实验分4组：对照组、高糖组、SiNgR组(高糖培养基中加入AAV2-siNgR病毒)和SiRNA空白组(高糖培养基中加入阴性核甘酸序列)。在培养的第3d观察细胞生长状态； Western blot检测NgR、Rock及F-actin的表达； MTT法检测细胞活力； 利用F-actin免疫组织化学染色显示细胞形态。

结果：与对照组相比，高糖组及SiRNA空白组细胞体积缩小，突起较少，细胞折光性增强； NgR及Rock的表达明显上调，F-actin表达减少，细胞活力下降(P<0.05)； 而SiNgR组与对照组相比NgR、Rock及F-actin的表达，细胞活力无明显改变(P>0.05)。

结论：NgR-Rock信号通路激活可能是导致高糖环境中RGC损伤的重要机制之一。]]> 2014/1/20 9:29:53 219true 方法：选择新鲜猪角膜，以13mm直径环钻制取角膜标本，依次放入四种冷冻保护液中冷平衡，“简化四步法”程序降温后放入液氮中保存，使用前40℃水浴复温。地塞米松作用组以同法制备植片，前三步冷平衡同前，最后分别放入含0.01，0.03，0.05mg/mL地塞米松保护液中4℃孵育18h，再程序降温液氮冻存。BALB/c小鼠50只，随机分为阳性对照组(新鲜组)、程序冻存组、地塞米松程序冻存组Ⅰ、地塞米松程序冻存组Ⅱ和地塞米松程序冻存组Ⅲ，每组10只。各组角膜植入到BALB/c小鼠背部皮下，术后14d取出，做石蜡包埋，HE染色、CD25和FasL免疫组化染色，光镜观察。

结果：术后14d剖取角膜植片，见植片与周围组织粘连，植片明显肿胀，半透明，色微黄。HE染色结果：新鲜组角膜植片全层有大量淋巴细胞浸润； 程序冻存组角膜浸润细胞较新鲜组减少，多位于内皮和上皮层分布； 地塞米松作用各组细胞浸润数最少。免疫组化显示：新鲜组植片CD25⁺和FasL⁺浸润细胞数最多，与程序冻存组、各地塞米松作用组比较有明显统计学差异。程序冻存组CD25⁺和FasL⁺浸润细胞数多于各地塞米松作用组，比较有显著性差异。各地塞米松作用组CD25⁺和FasL⁺浸润细胞数差异比较无统计学意义。

结论：地塞米松作用组角膜免疫原性最低。各地塞米松作用组角膜免疫原性在0.01～0.05mg/mL范围内无浓度依赖效应。]]> 2014/1/20 9:29:54 218true 方法：取本院眼库新鲜眼球(<6h)的Tenon's囊组织，用组织块培养法进行成纤维细胞体外培养； 流式细胞仪测定HCPT和丝裂霉素C(MMC)对HTFs细胞周期的影响； 台盼蓝染色法鉴定HCPT和MMC对HTFs的抑制作用是否由药物的细胞毒性引起； RT-PCR检测HCPT、MMC作用24h后HTFs的Smad7 mRNA基因表达。

结果：HTFs 体外生长良好，可用于实验研究。不同浓度HCPT(0，0.25，1，4mg/L)作用后的HTFs细胞周期与对照组相比，G2期细胞百分数的组间差异均有统计学意义(P<0.05)； 不同浓度MMC(0，0.025，0.1，0.4mg/L)作用后的HTFs细胞周期与对照组相比，G1期细胞百分数的组间差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度HCPT和MMC作用后的HTFs活细胞率和空白对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。4mg/L HCPT，0.4mg/L MMC作用HTFs 24h后，Smad7 mRNA表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：HCPT将HTFs阻滞于G2期，MMC将HTFs阻滞于G1期； HCPT，MMC抑制HTFs的作用和药物的细胞毒性无关； HCPT抑制HTFs的增殖可能是通过上调Smad7 mRNA的表达阻断TGF-β信号通路实现的。]]> 2014/1/20 9:29:54 217true +T细胞钙支架蛋白AHNAK1的短发夹RNA(short hairpin RNA ，shRNA)慢病毒载体，并研究其对小鼠甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy，TAO)的抑制效应。

方法：设计并筛选对AHNAK1具有良好干扰效力的shRNA序列，慢病毒载体包装干扰序列，感染小鼠CD4⁺T细胞，检测AHNAK1静默对T细胞功能的抑制作用，采用实验动物模型观察AHNAK1体内抑制甲状腺相关性眼病的效果。

结果：成功筛选出具有良好干扰效力的shRNA，并包装入慢病毒。病毒滴度为1.0×10⁶TU/mL，转染慢病毒的CD4⁺T细胞展现出失能倾向，抑制炎症免疫反应； 在动物模型中抑制T细胞中AHNAK1表达可以有效控制甲状腺眼病的发生发展， 显著降低治疗组T细胞中IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达。

结论：成功构建了表达小鼠AHNAK1 shRNA的慢病毒，具有抑制T细胞分泌IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达效应，能够有效抑制甲状腺眼病的发生发展。]]> 2014/1/20 9:29:54 216true 方法：根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则，针对转化生长因子β-受体2基因序列特征构建特异性shRNA(RNAi)载体，与TGFβ-R2过表达载体共转染293T细胞，经Western blot筛选出有效RNAi载体后，进行扩增、纯化、滴度测定，并转染培养的人LECs，qPCR检测TGFβ-R2 siRNA慢病毒载体对TGFβ-R2 mRNA表达的影响。

结果：经Western blot筛选，TGFβ-R2/GV115RNAi#1对目的基因的表达敲减效果最明显，慢病毒包装，滴度为8E+8 TU/mL，感染人LECs细胞后，对TGFβ-R2基因有显著的敲减效果，达到78.1%(P<0.05)。

结论：TGFβ-R2 RNAi载体构建成功，并且能抑制人晶状体上皮细胞TGFβ-R2 mRNA的表达。]]> 2013/12/23 10:55:36 215true 方法：20对配对兔角膜，一半于含10% HES 130/0.4的ACF培养液中保存28d作为实验组，不再单独脱水； 另一半于ACF培养液中保存28d后再葡聚糖T500脱水48h作为对照组。内皮细胞活性和植片质量评估指标包括：内皮细胞计数、角膜厚度和含水量、角膜透明度和后弹力层皱褶程度、内皮层中肌动蛋白微丝(filament actin，F-actin)的表达，及透射电镜下内皮细胞超微结构的变化。

结果：保存结束时，实验组植片明显较薄，角膜透明度和皱褶程度也优于对照组，内皮细胞密度为2371±159个/mm²。对照组继续脱水后，角膜厚度、含水量和透明度与实验组间差别变小，内皮细胞密度却降至2138±182个/mm²。免疫印迹法证实F-actin在两组内皮层都有表达，实验组的F-actin表达水平更高。电镜下实验组的细胞超微结构改变较小。

结论：HES 130/0.4的细胞毒性小，可成为器官保存液中的持续添加组分，不仅避免角膜过度水肿，还简化了保存程序，减轻了感染风险，有希望成为新型角膜脱水剂。]]> 2013/12/23 10:55:36 214true 方法：通过PAX6启动子驱动的Cre转基因小鼠(Le-Cre)作为介导敲除的工具鼠，将其与Smad4条件基因小鼠(Smad4fl/fl)结合获得Le-Cre特异性Smad4基因敲除小鼠或变异小鼠(Le-Cre； Smad4fl/fl)。为了证实条件性基因敲除的特异性及有效性，通过PCR技术对小鼠或鼠胚进行了相关基因分析，特定组织绿色荧光蛋白(GFP)的表达及Smad4蛋白的检测，同时利用ROSA26报导基因小鼠藉LacZ染色显示Le-Cre在眼组织的表达； 并对Smad4变异小鼠的表型进行了观察。

结果：早在E10.0左右，鼠胚晶状体位置及眼周外胚层发现强荧光的GFP表达，表明Le-Cre明确出现在特定的靶组织。通过小鼠基因型分析，确定了小鼠或鼠胚是否携带Cre重组酶基因、Smad4条件性等位基因和/或Rosa报导基因，对小鼠晶体DNA的基因分析也证实Smad4基因在某些特异性眼组织内得到剔除。通过在Cre转基因小鼠导入报导基因，并籍LacZ染色对Cre重组酶的表达进行检测，显示了Cre重组酶的时空表达及其表达的组织特异性。Smad4免疫组化染色显示，在正常发育胚鼠眼可见广泛的Smad4表达，早期主要存在于胞浆，随着胚眼发育向核内转移； 而在Smad4变异鼠胚眼，结果表明Smad4在Cre重组酶所表达的组织内缺乏表达。观察发现Smad4变异鼠可以顺利存活，但表现出眼球缩小、眼窝凹陷、眼睑畸形开放、闭合不能及眼周毛发脱失的外观。

结论：通过基因和蛋白水平的检测证实了Le-Cre； Smad4基因敲除鼠的建立及Smad4在变异小鼠中表达的缺乏。Smad4在眼组织的敲除导致了眼及附属器的明显异常，为深入了解眼球发育及Smad4对其影响的机制提供了一个可信的动物模型。]]> 2013/12/23 10:55:36 213true 方法：选取雄性Brown-Norway大鼠24只，其中18只建立大鼠脉络膜新生血管模型，6只12眼作正常对照。动物模型随机分为模型对照组和2个不同给药实验组，每组6只。模型建立后，实验组大鼠腹腔注射同等剂量的柚皮素、柚皮铜配合物\〖20mg/(kg·d)\〗，对照组不给药。于造模后30d取各组视网膜-脉络膜-巩膜复合体标本，在荧光显微镜下观察脉络膜新生血管的面积，采集各组大鼠的脉络膜标本，采用RT-PCR及Western blot方法检测各组大鼠脉络膜组织中VEGF、COX-2、PI3K、MAPK、MMP-2、MMP-9mRNA与蛋白的表达。

结果：与模型对照组相比，各实验组大鼠新生血管面积均减少，但柚皮铜配合物组较柚皮素组更明显，差异均具有显著统计学意义(P<0.01)； 模型组基因和蛋白表达水平均高于正常对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)； 各实验组基因及蛋白表达水平与模型组相比均有所下降，除PI3K，MMP-9外，柚皮铜配合物组下降幅度大于柚皮素组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：相较于柚皮素，柚皮铜配合物有更好的生物活性，对激光诱发大鼠脉络膜新生血管的形成有更显著的抑制作用。]]> 2013/12/23 10:55:36 212true 方法：低糖(5.5mmol/L)DMEM培养液体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01/04。高糖(30.5mmol/L)处理细胞，按照是否加入AG490及其浓度的不同分为实验组和对照组。CCK-8试剂盒检测晶状体上皮细胞的活性，选择实验组AG490浓度为10μmol/L和50μmol/L，处理时间分别为6，12，24和48h； 细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化； RT-PCR方法半定量检测TGF-β₁，FN和α-SMA的mRNA表达量变化。

结果：在不同的处理时间(6，12，24，48h)，高糖组(HG组)与低糖组相比，细胞的迁移能力增加(P<0.05)，TGF-β₁，FN和α-SMA表达量增高(P<0.05)； AG490组与HG组相比，细胞的迁移能力降低(P<0.05)，TGF-β₁，FN和α-SMA的mRNA表达量下降。

结论：JAK-STAT通路通过影响TGF-β₁和细胞外基质转录表达参与了高糖诱导的人晶状体上皮细胞向间充质转化的过程。JAK抑制剂AG490对此过程有抑制作用，且随着AG490浓度的增加其抑制作用增强。]]> 2014/12/2 9:06:28 211true 方法：采用高氧诱导的方法制作鼠视网膜新生血管模型，运用荧光造影视网膜铺片及视网膜切片苏木精-伊红染色观察视网膜新生血管的形态。于小鼠出生后第7，12，14，17，26d取视网膜组织，采用Real-time PCR及Western blot技术测定视网膜组织中Islet-1的表达水平。

结果：模型组视网膜铺片及组织切片可见大量视网膜新生血管形成。小鼠出生后第7d，模型组与正常组视网膜组织中Islet-1表达水平无明显差异； 小鼠出生后第12～14d，模型组视网膜组织中Islet-1表达水平明显上调； 出生后17d，模型组视网膜组织中Islet-1表达水平仍高于正常组； 出生后26d，随着视网膜新生血管消退，视网膜组织中Islet-1表达水平降至正常水平。

结论：模型鼠视网膜新生血管发生过程中，持续缺氧的视网膜组织通过增加转录因子Islet-1的表达，从而诱导视网膜新生血管的发生。]]> 2014/12/2 9:06:28 210true 方法：取C57BL/6J小鼠200只，随机分为对照组、高氧组、高氧对照组和CCN1治疗组，每组各50只。高氧对照组和CCN1治疗组分别玻璃体腔内注射空载体质粒和CCN1 siRNA表达质粒。ADP酶视网膜铺片观察视网膜血管形态，HE染色计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数，免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法检测CCN1蛋白及mRNA的表达情况。

结果：高氧组和高氧对照组视网膜可见大片无灌注区和大量突破内界膜的新生血管内皮细胞核(25.25±1.26个； 23.12±1.16个)，CCN1治疗组较高氧组和高氧对照组的无灌注区及新生血管内皮细胞核数(8.47±1.15个)明显减少。高氧组和高氧对照组较对照组相比，CCN1蛋白及mRNA表达显著增高，CCN1治疗组较高氧组和高氧对照组显著减弱，均有统计学意义(均为P<0.05)。

结论：CCN1的异常表达可能与RNV形成密切相关，特异性抑制CCN1 能有效抑制RNV的形成，为预防和治疗ROP提供新的思路及对策。]]> 2014/12/2 9:06:28 209true 方法：将健康白色家兔30只60眼，行双眼透明晶状体皮质吸除术，右眼为治疗组，左眼为对照组。 术后第1d起，对照组眼用生理盐水点眼6次，而治疗组眼应用1%环孢素A(cyclosporine A， CsA)眼药水点眼6次。分别在术后第1d未点药前、术后1wk，2wk，1mo和2mo各处死随机选择的6只兔，摘取双眼球。应用免疫组织化学、原位杂交方法检测赤道部晶状体上皮细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及张力蛋白同源的28号染色体缺失磷酸酯酶mRNA(PTEN mRNA)和Ser473-R的表达。

结果：术后两组PCNA和Ser473-R的表达均逐渐降低，其中1wk(0.690±0.035 vs 0.785±0.015，t=6.099，P<0.01)和2wk(0.571±0.038 vs 0.670±0.037，t=4.585，P<0.01)时治疗组PCNA表达均显著低于对照组。另外，1wk(0.374±0.031 vs 0.435±0.030，t=3.486，P=0.006 )和2wk(0.220±0.022 vs 0.251±0.020，t=2.516，P=0.031)时治疗组Ser473-R的表达均显著低于对照组。术后1wk～1mo时，两组PTEN mRNA均逐渐回升。术后1wk，治疗组A值显著高于对照组(0.302±0.027 vs 0.255±0.038，t=2.474，P=0.033)。

结论：环孢素A对兔眼白内障术后晶状体上皮细胞增殖过程中PI-3k途径有显著抑制作用，为研究CsA抑制后发性白内障提供实验依据。]]> 2014/12/2 9:06:28 208true 方法：健康3月龄SD大鼠，随机分为实验组和对照组，碱烧伤法建立CNV模型，分别于造模成功后1，3，5，7，14d测量CNV的长度并计算面积，同时取角膜组织以免疫组织化学检测HIF-1α及EPO的表达部位，并以RT-PCR法检测其mRNA的表达情况，实验数据采用SPSS 20.0处理。

结果：碱烧伤后1，3，5，7，14d，CNV的面积随时间逐渐增加，7d生长最为旺盛，14d后生长减慢。免疫组织化学提示：正常角膜各层未见HIF-1α的表达，可见微量EPO，碱烧伤后1d时HIF-1α及EPO免疫活性增强，主要表达于角膜上皮及内皮层。RT-PCR结果显示HIF-1α及EPO mRNA的表达在正常大鼠角膜组织中表达极少，在角膜碱烧伤后3d表达增强，7d达到高峰，14d后明显下降； 不同时间点组间比较存在统计学差异(P<0.05)。

结论：HIF-1α和EPO与CNV的形成密切相关。]]> 2014/12/2 9:06:28 207true 方法：用不同浓度葡萄糖(35.5，65.5，95.5mmol/L葡萄糖组以及相应的甘露醇等渗对照组)体外培养大鼠晶状体7d，动态观察晶状体的混浊情况。测定各组晶状体中TTase、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性，以及氧化型谷胱甘肽(GSSG)与总谷胱甘肽(T-GSH)的比值。

结果：高糖组晶状体早期就已出现雾状混浊，而对照组保持相对透明； 在高糖刺激下，TTase活性增加较正常对照组增加，并在含35.5mmol/L葡萄糖的高糖组中最高(1.743±0.20mU/mg protein，P<0.01)。高糖组GSSG/T-GSH比值均较正常对照组增加，分别增加2.89倍、2.57倍和2.42倍，其组间互相比较无明显差异，相应等渗对照组和正常对照组比较差异不明显； 高糖处理组的SOD和CAT较正常对照组降低，其中SOD分别为正常对照的0.71倍、0.52倍和0.49倍(P<0.05)，CAT分别为正常对照的0.47倍、0.56倍、0.50倍(P<0.05)，不同葡萄糖浓度处理组间差异无显著性。

结论：高糖环境激活晶状体内的抗氧化系统，诱导TTase活性增加，GSSG/T-GSH比例增高，CAT， SOD活性下降，晶状体抗氧化能力降低是糖尿病性白内障形成的重要机制。]]> 2014/10/31 11:03:29 206true 方法：清洁级Wistar孕鼠30只，分为6组，分别为胚胎第10，12，14，16，18，20d，每只孕鼠剖腹随机取2只胚鼠，每只胚鼠的一只眼以平行于视神经矢状轴的方向连续切片，常规HE染色，光镜下观察，采用免疫组织化学方法检测HIF-1α的阳性表达； 另一只眼采用实时定量PCR方法检测晶状体组织中HIF-1α mRNA的阳性表达。

结果：大鼠胚胎10d(E10)，晶状体泡形成； 胚胎12d(E12)，前壁、后壁细胞分化，前壁细胞发育成上皮细胞； 胚胎14d(E14)，由后壁细胞发育来的原始纤维形成； 胚胎16d(E16)，上皮细胞增生活跃，次级纤维形成； 胚胎20d(E20)，晶状体基本发育成熟。免疫组织化学染色检测到HIF-1α在胚胎期晶状体中高表达，上皮细胞较纤维细胞表达强烈。E10至E16表达量升高，E16达到峰值，生发区、过渡区染色最强。E18之后表达量降低，E20最低。6组比较，P<0.01，差异有统计学意义。组与组间两两比较，除E10与E12 之间，E14与E16之间，P>0.05，差异无统计学意义外，余各组间比较，P<0.05，差异有统计学意义。实时定量PCR显示，HIF-1α mRNA在胚胎期晶状体中持续表达，且随着胎龄不同变化，E10至E16，HIF-1α mRNA表达量升高，E16达到峰值，E18、E20下降。6组比较，P<0.01，差异有统计学意义。组与组间两两比较，除E10与E12之间比较，P>0.05，差异无统计学意义外，余各组间比较，P<0.05，差异有统计学意义。

结论：在大鼠胚胎10d时，晶状体泡形成，发育开始，至出生前基本成熟。HIF-1α在晶状体胚胎发育过程中的阳性表达呈现时空变化。HIF-1α参与了晶状体的胚胎发育，且在此过程中起重要作用。]]> 2014/10/31 11:03:29 205true 方法：三代体外培养老年牛RPE中分别加入培养液、含200μg/mL感光细胞外节段(photoreceptor outer segment，POS)的培养液、400μg/mL POS培养液，分别于24，48h和96h用流式细胞仪(AnnexinⅤ/PI双染法)检测细胞的凋亡水平。

结果：在各个时间点，空白对照组的RPE凋亡比例极低，200μg/mL POS组24h凋亡比例(包括早期凋亡和晚期凋亡)为1.73%； 随着时间延长，凋亡比例增加明显，到96h时达到65.92%。而400μg/mL POS组24h凋亡比例为4.02%，到96h时则高达91.34%。

结论：吞噬负荷量的感光细胞外节段可以诱导体外培养老年牛RPE的凋亡，并且呈现剂量和时间依赖方式。]]> 2014/10/31 11:03:29 204true 方法：选取60只2周龄健康SD大鼠随机分为4组，正常组15只，另外45只行单侧眼睑缝合制作单眼形觉剥夺动物模型，制模成功后随机分为单眼形觉剥夺组(MD组)，生理盐水组(NS组)，左旋多巴组(LD组)，每组各15只。各组大鼠均在正常日光照射条件下饲养至45日龄。处死MD组及正常组大鼠，分别用免疫组化，蛋白免疫印记，实时荧光定量PCR的方法检测这两组大鼠视皮质中NMDAR1的表达情况。LD组和NS组在46日龄时分别给予左旋多巴(40mg/kg)和生理盐水灌胃，连续28d，分别用前述方法检测视皮质中NMDAR1的表达。

结果：MD组大鼠视皮质中NMDAR1的蛋白及mRNA表达均低于对照组； LD组大鼠视皮质中NMDAR1的蛋白及mRNA表达均高于NS组。

结论：NMDAR1与视觉发育的可塑性有关，左旋多巴能够逆转因形觉剥夺引起的NMDAR1表达下降。这一机制可能与其能够改善视功能的作用有关，其作用部位可能在于视皮质。]]> 2014/10/31 11:03:29 203true 方法：将150只雄性日本大耳白兔随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、雄激素对照治疗组(D组)和菊花总黄酮治疗组(E组)。C组、D组、E组行双侧去势术建立白兔干眼症模型。E组白兔用菊花总黄酮灌胃治疗，D组用雄激素肌肉注射，A组、B组、C组用生理盐水灌胃。分别于治疗后1，3，5mo每组处死10只，取材用与相关指标检测。全部白兔行SchirmerⅠ试验，并检测泪膜破裂时间，处死后取泪腺组织，采用免疫组织化学法检测泪腺组织中凋亡相关基因蛋白Fas、FasL的表达，并计数凋亡细胞数量。

结果：E组SchirmerⅠ试验测量所得滤纸湿长明显高于C组(P<0.01)，泪膜破裂时间明显长于C组(P<0.01)。E组治疗1，3，5mo后，泪腺导管及腺泡上皮细胞中Fas阳性表达的细胞数均明显低于C组，FasL阳性表达的细胞数均明显高于C组，细胞凋亡数量均明显低于C组(P<0.01)。

结论：菊花总黄酮中主要成分为黄酮类物质，可显著抑制雄激素水平降低后白兔干眼症的发生，抑制泪腺细胞凋亡，维持泪腺基础分泌量和泪膜的稳定性。]]> 2014/9/22 14:18:21 202true 方法：将36只SPF级7周龄大鼠随机分为正常对照组，MNU模型组(6h组，12h组，24h组，3d组，7d组)，每组各6只。模型组一次性腹腔注射60mg/kg MNU，正常对照组腹腔注射等量PBS。右眼行HE，TUNEL，透射电镜评估视网膜组织损伤的超微结构变化及细胞凋亡程度，左眼取视网膜组织通过Western blot和免疫荧光观察视网膜组织中Rhodopsin和recoverin的mRNA表达变化。

结果：透射电镜观察到MNU注射12h后出现凋亡小体，24h后外核层大部分细胞呈阳性反应； TUNEL检测发现MNU注射24h光感受器细胞凋亡指数最高，达(29.7±2.3)%，与电镜结果吻合。Western blot结果表明，MNU注射12h后表达有极显著性差异(P<0.01)，而Recoverin的表达从注射后24h有极显著性差异(P<0.01)。

结论：一次性腹腔注射60mg/kg MNU能特异性诱导SD大鼠视网膜光感受器细胞凋亡，Rhodopsin和recoverin表达下调与MNU诱导光感受器细胞的选择性凋亡有关。]]> 2014/9/22 14:18:21 201true 方法：制备视神经损伤的大鼠模型，随机数字法将70只大鼠分为正常组10只， 白黎芦醇治疗组(实验组)30只和PBS缓冲液对照组(对照组)30只； 再将实验组和对照组分别分为三组， 每组各10只； 将白黎芦醇或PBS分别注射实验组和对照组大鼠， 观察视神经损伤后第7，14，21d处死大鼠。分离视网膜，观察各组大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell ，RGCs)的存活数量。分离术眼视神经，检测其胆固醇含量； RT-PCR法检测SIRT1、SREBP2和HMGCR的mRNA表达水平； Western blot法检测SIRT1、SREBP2和HMGCR蛋白表达水平。

结果：损伤模型大鼠的视网膜RGCs的存活数量以及视神经胆固醇含量均明显减少(P<0.01)； SIRT1、SREBP2和HMGCR的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05)，并呈时间依赖关系。三组分三个时间点，随时间延长损伤均加重，而治疗组损伤程度较对照组明显减弱。而白黎芦醇治疗组的视神经胆固醇含量以及SIRT1、SREBP2、HMGCR的mRNA和蛋白表达水平，RGCs存活数量均明显回升(P<0.01)，且呈时间依赖关系。

结论：白黎芦醇通过上调SIRT1、SREBP-2及其下游调控基因HMGCR的表达，从而进一步促进神经元细胞的胆固醇合成以及视网膜神经节细胞的损伤后修复过程。]]> 2014/9/22 14:18:22 200true 方法：设计并构建小鼠B7-H1的腺病毒表达载体，转染小鼠骨髓来源的树突状细胞，检测该树突状细胞的表型和功能，鉴定其对免疫应答的负向调控能力，采用实验动物模型观察B7-H1基因修饰的树突状细胞在体内治疗TAO的效果。

结果：成功构建出具有良好B7-H1表达效力的腺病毒载体，病毒滴度为1.8 ×10⁹ PFU/mL，转染腺病毒的小鼠骨髓来源的树突状细胞表现出调节性树突状细胞性能，能够负向抑制免疫应答； 在动物模型中使用该型树突状细胞可以有效控制甲状腺眼病的发生发展。

结论：成功构建了表达小鼠B7-H1基因的腺病毒表达载体，转染了该载体的树突状细胞具有调节性树突状细胞的性能，抑制正向免疫应答，能够有效抑制甲状腺眼病的发生发展，揭示基因修饰的树突状细胞可能成为治疗甲状腺眼病的潜在生物制剂。]]> 2014/9/22 14:18:22 199true 方法：健康雌性SD大鼠36只随机分为4组，实验组为三组，分别给予右侧泪腺注射0.1mL 1.25、5、10mU的BTX-B溶液，对照组右侧泪腺注射0.1mL生理盐水，分别在第3、7、14、28d行泪液实验Ⅰ(SⅠt)、角膜荧光素染色(FL)检查。另选取32只大鼠，随机分为两组，实验组大鼠右侧泪腺注射0.1mL 1.25mU的BTX-B溶液，分别于第3、7、14、21、42d时选取5只实验大鼠摘除泪腺组织，采用免疫荧光法和Western-blot 法对Lacritin蛋白进行定性和定量检测，组织病理学检测采用常规HE染色。

结果：模型制备中三个实验组均在第3d开始出现泪液分泌减少和角膜上皮损害，但两两之间差异无统计学意义(P>0.05)，7d时达到高峰，14d时好转，28d时泪液分泌恢复正常，但角膜上皮仍见损伤。实验组和对照组大鼠泪腺组织中均仅见腺泡细胞表达Lacritin蛋白，实验组大鼠Lacritin蛋白含量明显下降，自第3d开始出现，7d时达到高峰，14d时好转，28d时开始恢复，42d时达到正常。

结论：泪腺注射1.25mU的BTX-B溶液可成功建立SD大鼠干眼模型，可见泪液分泌减少、角膜上皮损伤等干眼体征，可为干眼的发病机制和实验性治疗研究提供实验依据和基础； Lacritin蛋白仅在泪腺腺泡细胞中表达，其含量与泪液分泌量和干眼程度呈同步变化，可为干眼程度评价标准的完善提供新的依据。]]> 2015/8/27 11:19:42 198true 2O₃)对腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)中ACC-2细胞增殖、凋亡的影响，并从基因和蛋白水平分析其对ACC-2细胞中MDM2基因表达的影响， 从而探讨As₂O₃诱导ACC-2细胞凋亡的具体机制。

方法：体外培养ACC-2细胞，分为实验组和对照组，向培养至指数生长期的ACC-2细胞加入不同浓度(2、4、6、8μmol/L)的含As₂O₃的细胞培养液作为实验组，对照组给予等量的细胞培养液，加入As₂O₃后分别培养不同时间。倒置显微镜下密切观察各时间点不同浓度As₂O₃对ACC-2细胞的生长抑制作用和细胞凋亡的形态变化，应用荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学技术检测MDM2基因(24、48h)和蛋白(24、48、72h)的表达变化。

结果：经As₂O₃处理后ACC-2细胞体积缩小变圆，核质固缩，悬浮凋亡细胞增多，存活细胞数量明显减少。RT-PCR及免疫细胞化学结果一致显示，ACC-2细胞随着药物浓度的增加及作用时间的延长，MDM2表达明显减少，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，不同浓度不同时间各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05)，MDM2蛋白表达量与浓度及时间呈显著负相关性(r<-0.7，P<0.05)，即呈浓度和时间依赖性。

结论：As₂O₃对ACC-2细胞具有生长抑制和诱导凋亡的作用，且As₂O₃能够下调腺样囊性癌ACC-2细胞中癌基因MDM2 mRNA及蛋白的表达，可能是其诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡的机制。]]> 2015/8/27 11:19:42 197true 方法：利用链脲佐菌素诱导大鼠DM模型，玻璃体内注射腺病毒(DM组)或腺病毒包装的糖皮质激素受体反义寡核苷酸(siGR组)、阴性核苷酸序列(scRNA组)。另取正常SD大鼠，玻璃体腔注射腺病毒为对照组(CON组)。12wk后，HE染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)密度，测量大鼠视网膜厚度，免疫组织化学和Western-blot检测ROCK表达变化。

结果：与CON组相比，DM组、siGR组及scRNA组糖皮质激素浓度均明显升高(均P<0.01)。HE染色显示，与CON组相比，DM组及scRNA组RGC密度明显降低，视网膜厚度下降，ROCK的蛋白表达增加(均P<0.01)，而siGR组无明显变化(均P>0.05)。

结论：抑制糖皮质激素能下调糖尿病大鼠视网膜ROCK表达，恢复视网膜RGC密度降低及视网膜厚度。]]> 2015/8/5 15:43:41 196true 方法：分别采用MTT法和划痕法观察不同浓度FTY720对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增生和S1P诱导下的细胞迁移的影响。应用大鼠角膜微囊袋模型，检测FTY720对S1P诱导的CNV的作用。将30只SD大鼠按随机数字表法分成A、B和C组，每组10只，在各组角膜基质层内植入S1P的同时依次植入0，5，20μg FTY720缓释颗粒。术后对CNV生长情况观察，并在12d行组织病理学检查。实验结果采用单因素方差分析。

结果：10 ，10² ，10³，10⁴ nmol/L FTY720与HUVECs共孵育72h可抑制细胞增生(P<0.01)，10，100nmol/L FTY720作用24h后，可抑制由S1P诱导的细胞迁移，随FTY720浓度增加其抑制细胞增生和迁移的作用均增强，A、B、C组大鼠角膜微囊袋缓释微粒体植入后12d，CNV面积分别为10.05±1.19，6.59±0.95，2.70±0.68mm²(F=145.155，P<0.01)，A与B组、B与C组间均有统计学差异(P<0.01)。

结论：FTY720能抑制S1P诱导的角膜新生血管生成。]]> 2015/7/1 9:46:00 195true 方法：将脉络膜黑色素瘤细胞分为正常组与缺氧组，其中将缺氧组再分成单纯缺氧组、干扰组、脂质体对照组、阳性对照组和阴性对照组； 对正常组细胞用含有浓度为10%的胎牛血清和1%的双抗(青-链霉素混合液)的DMEM高糖培养基进行培养。在缺氧组人眼OCM-1细胞的培养瓶中加入100μmol/L CoCl₂以构建肿瘤细胞内部的缺氧微环境。干扰组转染HIF-1α siRNA，阴性对照组转染无义siRNA，阳性对照组转染β-actin siRNA，脂质体对照组转染空脂质体。RT-PCR检测细胞中HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达，行Western-blot检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达。

结果：与正常组相比，单纯缺氧组HIF-1α蛋白的表达增高(P<0.05)，而其mRNA表达量无明显变化(P>0.05)； MMP-2 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05)。缺氧培养的各组之间相比，阳性对照组β-actin mRNA表达下降(P<0.05)，证实转染成功； 干扰组HIF-1αmRNA和MMP-2 mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05)，阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别(P>0.05)。

结论：缺氧条件下可以提高人眼脉络膜黑色素瘤细胞中HIF-1α蛋白的表达，而且HIF-1α蛋白的表达水平可以影响MMP-2的转录与翻译，从而可能进一步影响人眼脉络膜瘤细胞的外周浸润和远处转移能力。]]> 2015/7/1 9:46:01 194true 2O₂)诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19氧化损伤的保护作用。

方法：分别用不同浓度的α-倒捻子素和H₂O₂处理ARPE-19，CCK8法检测α-倒捻子素和H₂O₂对ARPE-19细胞毒性作用。不同浓度的α-倒捻子素预处理ARPE-19，再用200μmol/L H₂O₂处理24h，观察细胞活性变化。流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species， ROS)水平变化，免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB蛋白表达变化。

结果：CCK8法检测结果显示：当α-倒捻子素浓度在0～12μmol/L时，ARPE-19活性无明显变化； 当浓度达到16μmol/L时，细胞活性开始下降(P<0.05)。H₂O₂诱导后，当α-倒捻子素浓度在0～16μmol/L之内时，α-倒捻子素预处理均可提高ARPE-19细胞活性。ROS结果表示：H₂O₂诱导后，ROS表达量增高(P<0.05)； 8和12μmol/L α-倒捻子素预处理，均可有效清除H₂O₂诱导产生的ROS(P<0.05)。Western blot结果显示：H₂O₂诱导后NF-κB蛋白表达增高(P<0.05)，12μmol/Lα-倒捻子素预处理可以继续上调H₂O₂诱导后ARPE-19的NF-κB蛋白表达(P<0.05)。

结论：H₂O₂诱导ARPE-19细胞氧化损伤，造成细胞活性下降，ROS表达量增加，经过α-倒捻子素预处理后，可有效提高细胞活性，清除ROS，活化NF-κB。]]> 2015/6/1 16:06:21 193true 方法：提取龟分枝杆菌细菌壁内脂葡聚糖作用于原代培养人角膜上皮细胞(human corneal epithelia，HCE)。实验分为实验组(脂葡聚糖样品处理组)、阳性对照组(LPS处理组)和空白组。脂葡聚糖处理后的0，6，12h各时间点采用RT-PCR法在mRNA水平检测实验组中IL-6和IL-8的表达水平； 脂葡聚糖处理后的0，6，12，24h各时间点采用ELISA法在蛋白水平检测实验组、阳性对照组和空白组中IL-6和IL-8的表达。免疫细胞化学法检测空白组与实验组(时间点24h)HCE细胞内NF-κB的表达与定位。

结果：实验组中，12h内IL-6和IL-8在mRNA水平明显增加，6h时即达到峰值(IL-6是空白组的32.7倍，IL-8是对照组的36.8倍)； 在蛋白质水平，培养上清内IL-6和IL-8含量在24h内呈现时间依赖性上升(6，12，24h各时间点与对照组之间均有统计学差异，P<0.05)，与阳性对照组变化一致。空白组NF-κB定位于细胞浆内，实验组NF-κB被激活，移位至细胞核内。

结论：龟分枝杆菌来源的脂葡聚糖可以促使人角膜上皮细胞过表达IL-6和IL-8，其信号转导通路可能是通过核转录因子NF-κB进行的。]]> 2015/6/1 16:06:21 192true 方法：利用Real time q-PCR方法，检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和人晶状体上皮细胞凋亡模型中miR-181的表达情况； 利用Lipofectamine 2 000瞬时转染miR-181 mimic和inhibitor调节人晶状体上皮细胞中miR-181的表达，利用Real time q-PCR方法验证转染效率，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。

结果：与对照组相比，年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组和人晶状体上皮细胞凋亡模型组，miR-181的表达显著升高； miR-181 mimic转染组，miR-181的表达显著升高，细胞凋亡率显著升高； miR-181 inhibitor转染组，miR-181的表达显著降低，细胞凋亡率显著降低，差异均有统计学意义(P<0.01)。

结论：miR-181在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达，miR-181能够促进人晶状体上皮细胞凋亡，从而可能在年龄相关性白内障的发病过程中发挥一定作用，miR-181可能成为白内障非手术治疗的一种新途径，但具体机制有待进一步研究。]]> 2015/5/5 16:34:50 191true 方法：晶状体上皮细胞传代培养后，分别加入不同浓度褪黑素预处理12h后，加入100 μmol/L H₂O₂继续孵育24h，MTT比色法检测褪黑素对H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞活力的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测凋亡相关因子Caspase-3及Caspase-9的活性。

结果：MTT结果显示褪黑素对晶状体上皮细胞活性无影响，该药物可以抑制过氧化氢诱导的细胞活性的下降，流式细胞计数结果显示褪黑素可以抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡，此外，褪黑素还可以减少过氧化氢所致晶状体上皮细胞内Caspase-3及Caspase-9的活性，并且，伴随褪黑素作用时间的延长其活性呈下降趋势。

结论：褪黑素可以明显抑制过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞的凋亡，从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。]]> 2015/5/5 16:34:50 190true 方法：使用Transwell间接共培养模型。将共培养模型按照培养氧浓度及糖浓度培养基类型分为4组：常氧常糖组(21% O₂加5.56mmol/L葡萄糖培养液，A组)、常氧高糖组(21% O₂加30mmol/L葡萄糖培养液，B组)、低氧常糖组(5% O₂加5.56mmol/L葡萄糖培养液，C组)和低氧高糖组(5% O₂加30mmol/L葡萄糖培养液，D组)。通过CCK-8检测间接共培养模型在12，24，48h时RPE细胞的增殖能力、Transwell检测间接共培养模型在24h时RPE细胞的移行情况、流式细胞仪检测间接共培养模型中24h时RPE细胞的凋亡情况。

结果：与对照组相比，12，24和48h时，B组(1.61±0.41，1.80±0.34，1.91±0.35)、C组(1.34±0.46，1.94±0.40，2.14±0.41)及D组(1.98±0.47，2.26±0.42，2.55±0.40)中的细胞增殖能力均较对照组(0.92±0.45，1.27±0.32，1.59±0.41)增强(P<0.05)，并且低氧高糖联合作用组增殖能力最强。在24h时，B组(149.5±9.19)、C组(140±9.90)、D组(170.5±7.78)较对照组(114.5±7.78)的RPE细胞移行能力增强(P<0.05)。而在24h时各组间的凋亡情况无明显差异(P>0.05)。

结论：与hMSCs共培养条件下，低氧及高糖环境促进RPE细胞的增殖和移行，而对其凋亡并无影响。]]> 2015/4/8 9:56:56 189true 方法：将体外人晶状体上皮细胞用AGEs-BSA浓度为1.5mg/mL，胎牛血清体积分数为10%的DMEM培养液培养，同时设定相同浓度的BSA对照组及空白对照组，分别于0，1，2，3，4d收集细胞，测定晶状体上皮细胞内ROS含量、TTase活性，qRT-PCR检测TTase mRNA表达情况，Western blot检测TTase蛋白质表达。

结果：与对照组相比，AGEs-BSA干预后，细胞内ROS含量呈时间依赖性增高，差异有显著统计学意义(P<0.01)，BSA干预后ROS的表达与对照组无显著差异。AGEs可诱导TTase的 mRNA表达逐渐增高，2d时达到峰值，约为正常对照组的5.06倍(P<0.01)； 而BSA处理组和对照组TTase的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。与TTase的mRNA表达类似，TTase活性升高，在3d达到峰值，为正常对照组的2.01倍(P<0.01)。Western blot检测发现，TTase蛋白质表达逐渐增加，从3d开始TTase表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：AGEs可能是通过诱导人晶状体上皮细胞发生氧化应激，致使TTase表达上调，活性增强。]]> 2015/4/8 9:56:56 188true 方法：将20只出生14d的健康SD大鼠随机分为实验组和对照组，每组10只，均选取左眼为干预眼，右眼作为对照眼。实验组1%硫酸阿托品眼用凝胶点左眼，每日3次，右眼生理盐水点眼，每日3次。对照组大鼠给予生理盐水点双眼，每日3次。在点眼前及点眼后的7，14，21，28d分别行闪光视觉诱发电位检查及带状检影法测量屈光度。在点药后28d，从实验组和对照组中各随机选取3只大鼠，检测c-fos mRNA的表达； 后在实验组与对照组中再各随机选取3只大鼠，放入暗室2d后给予2h正常饲养环境光线刺激，再次检测c-fos mRNA的表达。

结果：实验组点药后14d产生屈光参差，两眼相差3.9D(P<0.05)，实验组大鼠左眼F-VEP的P1波在点药后21d峰时值延长为88.9±1.889ms，与右眼相比差异有统计学意义(P<0.05)。点药后28d，实验组大鼠左侧视皮层中c-fos mRNA表达较右侧视皮层高，但无显著差异； 但在放入暗室2d后再给予2h光线刺激，实验组大鼠左侧视皮层中c-fos mRNA表达为右侧视皮层的5倍，有显著统计学差异(P<0.05)。

结论：在视觉发育关键期内大鼠的单眼慢性阿托品化可形成屈光参差，使视传导发生延迟，阻碍了视皮层的正常发育。大鼠的单眼慢性阿托品化可作为制作屈光参差的研究模型。]]> 2015/4/8 9:56:56 187true + CD25⁺ T细胞及相关基因FOXP3表达变化意义，观察其在PDR发病中的临床意义。

方法：采用流式细胞术检测PDR患者及正常对照外周血CD4⁺CD25⁺T细胞比例，Q-PCR测PDR患者、糖尿病和正常人中FOXP3，IL-17和CTLA-4的mRNA表达，并用Wilcoxon秩和检验和直线相关分析法分析PDR患者糖化血红蛋白、年龄、血脂、肾功能的临床资料及它们之间相关度。

结果：PDR患者CD4⁺T细胞降低，CD4⁺CD25⁺T无显著差异，FOXP3和CTLA-4在PDR中下降，IL-17增高。CD4⁺T细胞与年龄相关，CD4⁺CD25⁺T与患者的血肌酐存在正相关性，CD4⁺CD25⁺T细胞水平与年龄、糖化血红蛋白、血脂、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)均无明显相关性。PDR患者糖化血红蛋白、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白均高于正常值。

结论：CD4⁺CD25⁺T细胞可能参与PDR的发病机制，并且血脂异常提示PDR可能与血脂相关。]]> 2015/3/9 10:14:41 186true 方法：恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)分别在常氧和低氧环境中培养，分为正常对照组、低氧对照组和治疗组。低氧对照组和治疗组分别采用脂质体Lipofectamine^TM2000(LF2000)介导转染空载体质粒和CCR7siRNA表达质粒。CCK8法检测细胞增殖情况； 流式细胞术检测细胞凋亡情况； Western blot和RT-PCR法检测三组RF/6A内CCR7、VEGF蛋白及mRNA的表达情况。

结果：低氧对照组较正常对照组比较及治疗组较正常对照组和低氧对照组比较细胞生长速度明显减慢，增殖能力减弱，细胞凋亡率显著增加(均为P<0.05)； 低氧对照组与正常对照组比较， RF/6A内CCR7、VEGF蛋白及mRNA表达显著增高，均有统计学意义(t_CCR7蛋白=3.38，t_VEGF蛋白=4.75，t _CCR7mRNA=4.27，t_VEGFmRNA=5.34， 均为P<0.05)，且二者表达呈正相关(r_蛋白=0.71， r _mRNA =0.83， 均为P<0.05)。治疗组CCR7和VEGF的蛋白及mRNA表达较正常对照组和低氧对照组明显下降(均为P<0.05)。

结论：缺氧时REC中CCR7可上调VEGF的表达，CCR7-VEGF信号途径在视网膜新生血管(retinal neovascularization，RNV)形成的过程中可能具有潜在功能，CCR7siRNA有望成为防治RNV的一种有效方法。]]> 2015/3/9 10:14:41 185true 方法：选取40只SD大鼠行腹腔注射碘酸钠(NaIO₃，30g/L，100mg/kg)造视网膜变性模型，分为A组不干预组，B组BMSCs注射组，C组BMSCs+ChABC注射组，D组PBS注射组。造模后28d将ChABC处理或未处理的BMSCs注射入大鼠视网膜下腔，对照组注射PBS液，21d后处死大鼠并取出眼球，行视网膜HE染色、视网膜细胞凋亡及免疫组化检测。

结果：B组凋亡率、外核层细胞数与A组、D组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。C组凋亡率、外核层细胞数与A组、D组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。B组凋亡率、外核层细胞数与C组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化显示BMSCs在眼内表达GFAP抗原。

结论：BMSCs联合ChABC行视网膜下腔注射可缓解视网膜变性大鼠光感受器细胞的凋亡，延缓细胞数目的减少，从而保护视网膜光感受器细胞。]]> 2015/3/9 10:14:41 184true 方法：HRVEC加入重组PGC-1α蛋白，未加入重组蛋白的细胞作为对照组。加入重组蛋白24h后，将两组细胞分别置于常氧(20% O₂)和低氧(1% O₂)环境下继续培养16h，采用real-time PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫荧光细胞化学法分别检测VEGF mRNA和蛋白的表达变化。

结果：real-time PCR，ELISA和免疫荧光细胞化学法检测发现，常氧和低氧环境下HRVEC加入重组PGC-1α蛋白后，VEGF mRNA和蛋白的表达均较对照组上调，差异有统计学意义(P<0.01)。

结论：PGC-1α在常氧和低氧环境中均能上调HRVEC中VEGF的表达。]]> 2015/1/30 15:09:34 183true 1(transforming growth factor-β₁，TGF-β₁)表达的影响。

方法：分离培养大鼠角膜基质细胞，根据PFD用药的不同浓度分为对照组(0mg/mL)、实验组Ⅰ(0.15mg/mL)、实验组Ⅱ(0.3mg/mL)、实验组Ⅲ(1mg/mL)，加药48h后应用CCK-8法检测其对角膜基质细胞增殖能力的影响，免疫细胞化学和Western-blot分别检测ki-67和TGF-β₁表达的变化。

结果：CCK-8结果显示，相比对照组，各实验组对角膜基质细胞的增殖均有明显的抑制作用，且随浓度的增大其抑制作用明显增强(均P<0.05)； 免疫细胞化学显示PFD能明显降低ki-67阳性指数(P<0.05)； Western-blot结果显示，PFD能降低TGF-β₁的表达，且呈剂量依赖关系(P<0.05)。

结论：PFD对大鼠角膜基质细胞的增殖具有明显抑制作用，抑制机制与下调TGF-β₁表达密切相关，在减轻角膜创伤愈合方面具有潜在的运用前景。]]> 2015/1/30 15:09:35 182true 方法：将青光安4种有效组份与青光安颗粒剂中药混悬液作用于滤过手术后D、E、F、G、H组，通过与A组空白对照组、B组模型组和C组丝裂霉素C组进行比较，观察青光安4种有效组份与青光安中药混悬液对青光眼术后滤过道瘢痕组织中弹性纤维、MMP-7、TIMP-1的影响。

结果：C组、E组和H组术前基础眼压与术后第2d； 1，2，4wk的眼压比较，现眼压较其他组回升缓慢，第28d时仍然是最小值，与其余A、B、D、F、G组比较差异具有统计学意义。弹性纤维面积密度比较：手术组与空白对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，C组与H组、C组与E组比较，差异无明显统计学意义(P>0.05)，H组与E组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。其他各组间比较，差异有显著统计学意义(P<0.01)。

结论：青光眼术后滤过道瘢痕化，是导致滤过性手术失败的重要原因； 青光安有效组份2、青光安混悬液和丝裂霉素C可通过增加MMP-7的表达和抑制弹性纤维、TIMP-1的表达而减少瘢痕组织增生，具有明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用； 通过实验观察可初步说明青光安有效组份2与青光安混悬液都具有明显的抑制滤过道瘢痕化的作用，且二者效果持平，青光安中药组略优于青光安有效组份2组。]]> 2014/12/30 15:26:03 181true 方法：体外培养胎儿晶状体组织HLE B-3永生细胞，分为6个组，分别给予游离Zeb 50μmol/L(ZebF1组)、100μmol/L(ZebF2组)、荷载Zeb的MePEG-PCL NPs 50μmol/L(ZebNP1组)、100μmol/L(ZebNP2组)、MePEG-PCL空载颗粒(NPs组)、空白培养基(C组)，分别采用MTT比色法、改良MTT比色法观察细胞活性、黏附性，采用DNA ladder法研究细胞凋亡。

结果：MTT比色法显示：游离Zeb和荷载Zeb的MePEG-PCL NPs对细胞活性有抑制作用，均呈时间-剂量依赖性增强(P<0.05)，与游离组相比，相同剂量荷载Zeb的MePEG-PCL NPs组在给药12h时细胞活性无差异，而给药24，48，96h后载体组细胞活性降低(P<0.05)。改良MTT比色法显示：所有Zeb给药组细胞黏附率均降低，与游离组相比相同剂量荷载Zeb的MePEG-PCL NPs组黏附率降低(P<0.05)。DNA ladder显示：给药后96h C组、NPs组，ZebF1组未出现DNA碎片表达，ZebF2，ZebNP1，ZebNP2组出现DNA碎片表达，其表达强度依次为ZebNP2> ZebNP1>ZebF2(P<0.05)。

结论：荷载Zeb的MePEG-PCL NPs可有效地抑制体外培养的LECs活性、黏附性，造成细胞的凋亡，其效果优于同剂量的游离药物。]]> 2014/12/30 15:26:04 180true 方法：实时定量PCR检测miR-218在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达，并分析其与临床病理特征的关系。检测miR-218在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达，并用miR-218模拟物转染Y79细胞，MTT及流式细胞仪检测Y79细胞的增殖、凋亡情况，RT-PCR和Western-blot法检测Bmi-1 mRNA及蛋白的表达。

结果：miR-218在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织； miR-218低表达与神经浸润、分化程度密切相关； miR-218可显著抑制Y79细胞的增殖并促进其凋亡，并下调Bmi-1的mRNA及蛋白表达水平。

结论：miR-218在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调，并与临床病理相关，miR-218抑制Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bmi-1有关。]]> 2015/11/27 10:32:21 179true 方法：人视网膜血管内皮细胞培养于低糖或高糖环境，通过MTT法测定各组细胞增殖，研究白藜芦醇对高糖培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响。通过Western-blot及免疫共沉淀检测SIRT1表达及HMGB1的乙酰化。

结果：白藜芦醇对高糖环境下的视网膜血管内皮细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05)，且随白藜芦醇剂量增加，抑制作用增强。高糖抑制SIRT1表达，提高HMGB1的乙酰化，白藜芦醇能逆转上述改变。

结论：白藜芦醇可能通过SIRT1-HMGB1通路抑制高糖环境下的视网膜血管内皮细胞增殖。]]> 2015/11/27 10:32:21 178true 方法：两周龄豚鼠30只随机分为A组、B组、C组，每组10只，再随机选取5只10眼正常两周龄豚鼠不作任何干预，作为正常对照眼。选取任意眼戴一-10.00D凹透镜，分别饲养6、15、30d后除去镜片，验光及测眼轴长度确定近视形成后，采用细胞酶消化法培养豚鼠的前部及后极部RPE细胞，取3～6代RPE细胞进行免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western-blot蛋白印迹法检查前部及后极部RPE细胞中bFGF表达变化。

结果：bFGF的表达定位于细胞浆和细胞核。免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western-blot蛋白印迹法结果均表明：A、B、C三组实验眼和对照眼前部及后极部RPE细胞均有bFGF的表达，实验组前部及后极部与对照组相应前部及后极部比较，实验组中bFGF的阳性率低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)； 而且，随着诱导时间的推移，实验组的阳性率逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)，对照组的阳性率不变，差异无统计学意义(P>0.05)； 但实验组和对照组各组自身前部及后极部比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：实验组前部及后极部与对照组相应前部及后极部比较，bFGF的表达显著低于对照组。]]> 2015/10/30 17:17:32 177true -/-的成纤维细胞对甲状腺相关性眼病的治疗作用和机制。

方法：设计、构建、筛选小鼠眼眶成纤维细胞TLR4基因的最优干扰shRNA表达质粒，选择Gateway方法将质粒导入慢病毒表达载体中，使用重组慢病毒载体感染小鼠眼眶成纤维细胞，研究其对免疫炎性反应的负向调控能力，并在小鼠甲状腺眼病模型中采用沉默成纤维细胞TLR4基因的方法，观察其体内治疗效果。

结果：筛选出具有最好基因静默效果的shRNA序列，导入慢病毒载体，病毒滴度为1.5×10⁶TU/mL。转染慢病毒的Balb/c小鼠眼眶成纤维细胞能够负向调控免疫应答，抑制免疫炎症反应。在疾病动物模型中转染了干扰病毒载体实验组小鼠，其眼病发生发展情况均优于对照组。

结论：成功获得了小鼠成纤维细胞TLR4^-/-shRNA的慢病毒载体，转染了该载体的小鼠眼眶成纤维细胞能够抑制正向免疫应答，可以有效地抑制甲状腺眼病的发展，揭示干扰TLR4表达可能成为防治甲状腺眼病的生物诊疗措施。]]> 2015/10/30 17:17:32 176true 1诱导人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts， HTFs)增殖及Ⅰ型胶原纤维合成的影响。

方法：首先，将不同浓度(200、400、600、800nmol/L)TSA作用HTFs共24h后，MTT法检测其对细胞活力的影响； 然后，不同浓度(400、600nmol/L)TSA与5ng/mL TGF-β₁混合作用于HTFs共24h，MTT法检测其对细胞活力的影响； 最后，RT-PCR和Western-blot法分别检测不同浓度(400、600nmol/L)TSA与5ng/mL TGF-β₁混合以及600nmol/L TSA对HTFsⅠ型胶原纤维的mRNA及蛋白表达的影响。

结果：MTT证实，与对照组相比，400nmol/L及以上浓度TSA作用组，HTFs活力显著下降(P<0.05)； 两种浓度(400、600nmol/L)TSA均可减弱TGF-β₁促HTFs增殖的作用(P<0.05)； RT-PCR和Western-blot证实两种浓度(400、600nmol/L)TSA对TGF-β₁诱导上调的Ⅰ型胶原纤维在基因转录及蛋白表达水平有逆转作用。

结论：TSA能够抑制TGF-β₁诱导的HTFs增殖，并减弱Ⅰ型胶原纤维基因转录及蛋白表达水平。]]> 2015/9/25 17:05:18 175true 方法：将新生C57BL/6J小鼠随机分为3组，分别为常氧对照组、生理盐水注射氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy，OIR)组和脂联素注射OIR组。将后两组小鼠于生后第7d(P7)至P12置于体积分数75%±2%高氧氧箱中以诱导OIR模型。脂联素注射OIR模型组在P7～P15每天接受腹腔注射重组鼠脂联素蛋白(3.0μg/g)，生理盐水注射OIR组则于上述相同时间点注射同等剂量的生理盐水。三组小鼠均于P17时取右眼行视网膜铺片和Lectin染色，观察视网膜中央无血管区及病理性新生血管的情况； 取左眼行视网膜切片和HE染色，观察视网膜组织病理学变化； 应用Western-blot测定左眼视网膜组织中iNOS、nNOS、eNOS的表达； 取右眼视网膜组织定量检测ROS/RNS含量以及NO水平。

结果：脂联素注射OIR组小鼠视网膜中央无血管区面积较生理盐水注射OIR组明显减少(t=7.304，P<0.01)，病理性新生血管数目明显减少(t=2.654，P<0.01)； 脂联素注射OIR组小鼠视网膜组织ROS含量较生理盐水注射组明显降低(t=13.349，P<0.01)； 脂联素注射OIR组小鼠视网膜组织NO含量明显高于生理盐水注射组(t=3.023，P<0.01)，iNOS表达明显低于生理盐水注射组(t=5.112，P<0.01)，eNOS表达明显高于生理盐水注射组(t=7.421，P<0.01)，nNOS的表达无统计学差异(t=1.074，P>0.01)。

结论：脂联素可以通过激活内源性eNOS促进生理性NO生成，同时又能抑制ROS/RNS的产生，在OIR进程中发挥视网膜血管的保护作用。]]> 2015/9/25 17:05:18 174true 方法：将25只雄性Wistar大鼠随机均分为5组，即假手术组和视神经牵拉伤后1、3、7、14d组。模型组用横向张力计牵拉左眼视神经，假手术组仅暴露左眼视神经但不予牵拉，各组以右眼为正常对照。用荧光金逆行标记，并观察假手术组及视神经牵拉伤后1、3、7、14d组RGCs的密度。

结果：正常对照组RGCs形态多呈圆形或椭圆形，边界清楚，细胞外无明显荧光染料渗漏，部分可见明显细胞突起； 而视神经牵拉伤后RGCs随时间延长而不断减少，细胞分布不均匀，并可见大量荧光渗漏及小胶质细胞。与正常对照组相比，假手术组RGCs形态和密度无明显差异(P>0.05)； 视神经牵拉伤后第1、3、7、14d的RGCs数量进行性减少，且其密度均明显低于正常对照组(P<0.01)； 视神经牵拉伤后第1、3、7、14d的RGCs存活率分别为78.94%±0.92%、60.07%±0.90%、38.92%±1.42%和17.31%±0.97%。

结论：横向定量牵拉法可以建立易于量化的视神经损伤模型，为进一步研究视神经损伤后的治疗方法提供有力工具。]]> 2016/8/22 9:57:56 173true 方法：健康雄性SD大鼠25只，随机选取5只作为正常对照组； 其余20只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ，60mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型，建模成功(血糖>16.7mmol/L)后应用随机数字表法分为糖尿病对照组、0.01%丹酚酸B凝胶治疗组、0.05%丹酚酸B凝胶治疗组、0.1%丹酚酸B凝胶治疗组，丹酚酸B治疗组和糖尿病对照组每天分别给予自制相应浓度的丹酚酸B凝胶及空白凝胶点眼，每次1滴，每日3次； 检测大鼠的血糖和体质量，观察角膜知觉和透明度，每周1次； 造模成功后的第12wk取材，观察角膜组织结构改变，以及大鼠眼组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性情况。

结果：所有大鼠血糖处在高水平(>16.7mmol/L)，体质量早期上升后期有明显下降。在糖尿病对照组，角膜的知觉和透明度降低，各丹酚酸B凝胶治疗组与糖尿病对照组相比较，角膜知觉明显改善，各丹酚酸B治疗组角膜保持透明度与正常组无明显差异，角膜组织中的MDA含量明显减少，角膜组织中SOD的活性明显增加(P<0.05)。

结论：丹酚酸B可以减缓糖尿病大鼠角膜病变，其机制可能与丹酚酸B能清除超氧阴离子的抗氧化应激作用有关。]]> 2016/8/22 9:57:56 172true 方法：体外培养ARPE-19细胞，100nmol/L缓激肽(bradykinin，BK)刺激24h后，光镜下观察细胞形态变化，细胞免疫荧光检测BK受体定位； 共聚焦显微镜检测BK及其拮抗剂作用下Ca²⁺变化； Western blot检测对照组与100nmol/L BK处理24h后(BK组)COX-1、COX-2、eNOS、iNOS蛋白的表达量。

结果：BK刺激后，ARPE-19细胞形态无明显变化； ARPE-19细胞可检测到激肽B1、B2受体； 与对照组相比，BK组Ca²⁺浓度显著升高； B1R拮抗组及B2R拮抗组的Ca²⁺浓度较BK组升高幅度降低，B1R及B2R拮抗组Ca²⁺浓度较对照组无明显变化； BK作用ARPE-19细胞后，COX-2及iNOS蛋白含量显著增加(P<0.001)。

结论：BK通过与B1R及B2R结合促进体外培养的ARPE细胞COX-2及iNOS表达增加。]]> 2016/7/26 10:36:27 171true 方法：大鼠随机分为光照组及对照组，光照组大鼠经散瞳后进行10 000lx强光照射(12h光照，12h避光，连续1～14d)，对照组只接受自然光线照射。分别于强光照射后第1、3、7、14d摘除相应的光照组和对照组大鼠双侧眼球； 并用HE染色观察视网膜各层结构变化，用电镜观察视网膜超微结构变化，用伊凡思蓝(Evans blue，EB)灌注后激光共聚焦显微镜下微循环成像及分光光度法定量检测视网膜微循环通透性变化，来评估血-视网膜屏障变化。

结果：大鼠在强光照射1d后就出现视网膜光感受器细胞变性、外节膜盘脱落、外核层厚度变薄等超微结构改变，并随着强光照射持续而逐渐加重，3d后出现光感受器细胞凋亡，至14d时外核层厚度已明显变薄、细胞数也明显减少。大鼠在强光照射1d后视网膜血管就出现EB染料渗漏，至14d时EB染料渗漏最明显。

结论：强光照射可导致大鼠视网膜外核层光感受器细胞变性、凋亡，外核层厚度变薄、细胞数减少，血-视网膜屏障结构、功能破坏。]]> 2016/7/26 10:36:27 170true 方法：建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型，将受体SD大鼠随机分为：阳性对照组、GFP-DC组、8-DC组及IL-10-GFP-DC组，分别于角膜移植术前3d尾静脉注射等量的PBS、供体Wistar大鼠骨髓源8-DC(培养8d的DC)、转染48h的GFP-DC及IL-10-GFP-DC。术后每天在裂隙灯下观察角膜植片情况，记录排斥反应指数及角膜植片存活时间，在移植术后第14d行各组角膜组织的病理学检查及免疫组织化学检查。

结果：IL-10-GFP-DC组角膜植片存活时间较GFP-DC组、8-DC组比较显著延长(P<0.01)。术后第14d时IL-10-GFP-DC组角膜植片的混浊、水肿、新生血管及排斥指数均显著降低(P<0.01)。病理组织学检查结果显示各实验组角膜植片的炎症反应较阳性对照组轻，植片中央未见明显新生血管。免疫组织化学结果显示：IL-10-GFP-DC组的CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、IL-2⁺、NK⁺及NF-κB⁺阳性细胞数量较阳性对照组、GFP-DC组、8-DC组减少，差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。

结论：经过供体来源未成熟树突状细胞预处理的受体，角膜植片的存活时间显著延长，成功诱导角膜移植免疫耐受。CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、IL-2⁺、NK⁺及NF-κB⁺阳性细胞参与了同种异体角膜移植排斥反应的调控，IL-10-GFP-DC可降低CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、IL-2⁺、NK⁺及NF-κB⁺阳性细胞的浸润，抑制角膜移植排斥反应的发生。]]> 2016/7/26 10:36:27 169true 方法：选取清洁级雄性成年Wistar大鼠，随机分为正常对照组、糖尿病组、50mg/kg甘糖酯治疗组和100mg/kg甘糖酯治疗组。大鼠采用链脲佐菌素(STZ)60mg/kg一次性腹腔内注射制作糖尿病模型，甘糖酯治疗组的给药方法为甘糖酯溶液灌胃，持续12wk。给药12wk后处死各组大鼠并分离视网膜，取房水、血清，用ELISA法检测大鼠视网膜组织、房水及血清中TNF-α和IL-1β蛋白的表达变化，免疫组织化学检测大鼠视网膜TNF-α和IL-1β蛋白表达的变化。

结果：给药12wk后大鼠糖尿病视网膜病变模型中，甘糖酯对糖尿病大鼠的血糖没有影响； ELISA检测表明，糖尿病组大鼠血清与视网膜中的TNF-α和IL-1β含量增加，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)； 甘糖酯干预后血清及视网膜中TNF-α和IL-1β显著降低，与糖尿病组比较差异有统计学意义(P<0.05)，且甘糖酯浓度越高，降低越明显。但是甘糖酯干预组房水中TNF-α和IL-1β蛋白的产生无明显变化。免疫组织化学检测表明，正常对照组视网膜中几乎不表达TNF-α蛋白，糖尿病组TNF-α蛋白呈高表达状态，主要位于视网膜神经节细胞层内丛状层、外丛状层及色素上皮层； 50mg/kg甘糖酯干预组TNF-α弱表达，100mg/kg甘糖酯干预组TNF-α几乎不表达。而在正常对照组视网膜中IL-1β在外核层微量表达，糖尿病组IL-1β在内丛状层、外丛状层及色素上皮层高表达； 50mg/kg甘糖酯干预组及100mg/kg甘糖酯干预组IL-1β呈低表达。

结论：甘糖酯能抑制大鼠早期糖尿病视网膜病变中的炎性因子TNF-α和IL-1β的产生，提示其可能对糖尿病视网膜病变起着防治作用。]]> 2016/7/26 10:36:27 168true 方法：用不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0mg/mL)的贝伐单抗干预体外培养人视网膜色素上皮细胞ARPE-19，采用CCK-8法分别于24、48、72h检测细胞活性； 流式细胞仪检测细胞周期； 应用免疫蛋白印迹法(Western blotting)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ARPE-19中E-cadherin和fibronectin的蛋白及mRNA的表达变化。

结果：浓度为2.5、5.0mg/mL贝伐单抗能有效抑制ARPE-19细胞的增殖及细胞周期，差异有统计学意义(P<0.05)。2.5、5.0mg/mL贝伐单抗能抑制E-cadherin基因，促进fibronectin基因的转录及表达，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：高浓度的贝伐单抗能够抑制ARPE-19细胞的增殖，下调纤维化相关因子E-cadherin，同时上调fibronectin的表达，提示高浓度的贝伐单抗可以引起ARPE-19细胞纤维化。]]> 2016/7/26 10:36:27 167true 方法：通过双侧睾丸切除去势手术，改变体内雄激素水平，观察泪膜破裂时间的变化，同时在不同时间点采用RT-PCR法与Western-Blot法分别检测小鼠角膜上皮细胞中Muc1和Muc4的mRNA和蛋白水平的表达变化。

结果：去势1wk后小鼠睾酮质量浓度下降至0ng/μL； 正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8wk组小鼠BUT分别为68.33±12.86、62.47±3.75、58.67±10.03、47.17±7.64、39.51±3.39、32.67±3.88、31.00±2.36s，其中术后2、4、6、8wk组小鼠泪液BUT值较正常对照与伪手术组均明显缩短，差异均有统计学意义(均P<0.05)。Muc1与Muc4的mRNA与蛋白水平表达，随雄激素浓度下降，表达下调(P<0.05)，Muc1在去势后第2wk表达最低，而Muc4在去势后第1wk表达降至最低。

结论：在体内，雄激素可调控小鼠角膜上皮Mucins表达，并缩短泪膜破裂时间，参与泪膜稳定性的维持。]]> 2016/6/29 17:05:27 166true 方法：选择新西兰大白兔26只(26眼，均为右眼)，使用0.2%的苯扎氯铵制作兔干眼症模型，随机分为两组：对照组(A组，13眼)使用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)滴眼，实验组(B组，13眼)使用1%羊膜提取液(amniotic extraction)滴眼，4次/d。另选取2只兔作为正常对照。分别于治疗前和治疗1、2、4、8wk行Schirmer I试验(Schirmer Ⅰ test，SⅠt)、角膜荧光素染色(corneal fluorescein staining，FL)、泪液总蛋白含量、淀粉酶活性、乳铁蛋白、溶菌酶含量检测，并进行结膜印迹细胞检查。

结果：不同组间、不同时间点间SⅠt、FL、溶菌酶活性及结膜杯状细胞密度相比，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组SⅠt、FL、溶菌酶活性及结膜杯状细胞密度相比，差异无统计学意义(P>0.05)； 治疗1、2、4、8wk后，B组SⅠt、FL、溶菌酶活性较治疗前均有不同程度改善，差异有统计学意义(P<0.05)，B组结膜杯状细胞密度与治疗前相比有所增加，但差异无统计学意义(P>0.05)； 治疗1、2、4、8wk后，A组SⅠt、溶菌酶活性及结膜杯状细胞密度均有不同程度下降，差异有统计学意义(P<0.05)，A组FL评分与治疗前相比有不同程度增加，但差异均无统计学意义(P>0.05)。A、B两组各时间点SⅠt、FL、溶菌酶活性及结膜杯状细胞密度相比，差异均有统计学意义(P<0.05)。同一组内不同时间点，泪液中总蛋白量、乳铁蛋白、淀粉酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前A、B两组泪液中总蛋白量、乳铁蛋白、淀粉酶的活性相比，差异无统计学意义(P>0.05)； 治疗4、8wk后两组泪液中总蛋白量、乳铁蛋白、淀粉酶的活性相比，其差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：羊膜提取液能有效治疗兔干眼症，具有良好的临床应用前景。]]> 2016/6/29 17:05:28 165true 方法：培养RF/6A细胞，分为正常对照组(NC组)、高糖对照组(HG组)、高糖加不同浓度的虫草素组(HG+10μg/mL组、HG+50μg/mL组、HG+100μg/mL组)。采用CCK8法检测各组细胞的增殖活性； 采用Transwell实验检测各组细胞的迁移； 采用Matrigel检测各组管腔形成的情况； 采用Western-blot检测各组细胞中VEGF和VEGFR2蛋白表达的情况。

结果：与NC组相比，HG组RF/6A的增殖活性增加(P<0.05)。不同浓度的虫草素对RF/6A的增殖均有抑制作用，随着虫草素浓度增加，细胞活性下降。HG+10μg/mL组、HG+50μg/mL组、HG+100μg/mL组的增殖活性抑制率分别为(10.2±0.9)%、(23.4±1.5)%、(31.1±1.2)%，与HG组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。NC组、HG组、HG+10μg/mL组、HG+50μg/mL组、HG+100μg/mL组细胞迁移个数分别为55.6±2.70、87.4±2.40、65.4±2.7、57.8±2.38、62.4±2.77个。与NC组相比，HG组迁移细胞数量增加(P<0.05)； 不同浓度虫草素组细胞迁移数量随着虫草素浓度的增加而减少，与HG组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。NC组、HG组、HG+10μg/mL组、HG+50μg/mL组、HG+100μg/mL组的细胞管腔形成个数分别为18.7±2.08、25.7±1.52、19.9±1.57、16.3±2.51、5.7±1.72个。与NC组相比，HG组细胞管腔形成个数增加(P<0.05)； 不同浓度虫草素组细胞管腔形成个数随着虫草素浓度的增加而减少，与HG组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比，HG组VEGF和VEGFR2蛋白表达的量增加(P<0.05)； 不同浓度虫草素组中细胞内VEGF和VEGFR2蛋白表达的量均低于高糖对照组(P<0.05)。

结论：虫草素可能通过抑制高糖下VEGF和VEGFR2蛋白的表达，抑制RF/6A细胞增殖、迁移和管腔形成，进而抑制血管新生。]]> 2016/6/29 17:05:28 *,孙小凤^*,赖铭莹]]> 164true 方法：建立高糖诱导的HLEC氧化损伤模型，用不同浓度的EGCG干预，MTT检测细胞活力，倒置显微镜观察细胞形态，Hoechst-PI染色观察细胞凋亡，分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)的含量。

结果：MTT结果显示用10μmol/L EGCG和100μmol/L EGCG处理后，HLEC活性分别提高到50.33%±3.52%和63.33%±4.63%，与氧化损伤组(32.67%±3.10%)比较差异具有统计学意义(P<0.05)； EGCG干预的高糖条件下的HLEC较好地保持了细胞的形态，凋亡细胞数量减少，细胞内SOD、GSH-Px水平升高，MDA水平下降。

结论：EGCG可能通过提高细胞内SOD、GSH-Px含量，降低MDA含量发挥其较强的抗氧化作用，从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。]]> 2016/5/31 16:15:53 163true 方法：选取Balb/c雌性小鼠25只，随机分为五组：A组：模型组； B组：青蒿素滴眼组； C组：青蒿素灌胃组； D组：地塞米松磷酸钠滴眼组； E组：阴性对照组。初次诱导采用小鼠尾根部及足垫皮下注射豚草花粉粗浸液与弗氏佐剂的混合液，第7d和14d加强致敏采用腹腔注射。阴性对照组使用等量的弗氏佐剂与PBS混合液代替。在第21～27d进行治疗，青蒿素滴眼组给予1%青蒿素滴眼液滴眼，4次/d； 青蒿素灌胃组按600mg/kg的剂量进行灌胃，1次/d； 地塞米松磷酸钠滴眼组给予地塞米松磷酸钠滴眼液滴眼，4次/d； 模型组及阴性对照组给予青蒿素滴眼液基质液滴眼。治疗后采用豚草花粉变应原滴眼激发后1h内，取眼球用于组织病理学检测，取血清用于豚草花粉特异性IgE测定。

结果：模型组小鼠激发后过敏症状较其他各用药组明显严重； 地塞米松磷酸钠滴眼组、青蒿素滴眼组及灌胃组过敏症状评分、肥大细胞脱颗粒比率及血清中豚草花粉特异性IgE浓度均高于阴性对照组，而显著低于模型组。

结论：青蒿素滴眼及灌胃治疗均可明显抑制小鼠花粉过敏性结膜炎症状、早期反应相中肥大细胞脱颗粒比率和豚草花粉特异性IgE的产生，推测青蒿素对花粉过敏性结膜炎具有一定的治疗作用。]]> 2016/5/31 16:15:53 162true 方法：培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H₂O₂刺激。24h后，提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测，并采用生物信息学数据库DAVID对氧化刺激组相比对照组显著上调的基因进行Gene Ontology(GO)功能富集分析。RT-qPCR对上调的基因进行验证。通过MTT和流式细胞仪检测细胞凋亡水平。

结果：表达谱芯片结果显示，氧化刺激造成HLEC中367个基因上调，GO分析表明这些基因富集于310个功能类别中，主要包括p53信号通路、细胞凋亡通路、细胞程序性死亡通路等。RT-qPCR结果证实，6个主要参与促凋亡或抗凋亡调节的基因，包括BCL2A1、TP53I3、FAS、ZMAT3、DDB2和BCL2L1，在氧化刺激后表达水平明显上升。MTT实验和流式细胞仪检测结果显示，H₂O₂刺激后HLEC凋亡逐渐上升，是细胞氧化损伤的主要表现。

结论：氧化刺激可同时诱导HLEC中促凋亡基因和抗凋亡基因表达水平上调，但最终仍然导致了细胞凋亡。]]> 2016/5/3 15:55:03 161true 方法：HLEC传代培养，分为阴性对照组、氧化损伤组、番茄红素低剂量组和番茄红素高剂量组，MTT比色法检测细胞存活率，电子显微镜观察细胞形态学改变，DCFH-DA荧光探针检测胞内ROS变化，分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH)活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量。

结果：番茄红素能明显抑制紫外线诱导的细胞活性的下降，减少紫外线所致HLEC内ROS的生成，引起HLEC内SOD和GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。

结论：番茄红素通过提高细胞内SOD和GSH-Px含量，降低细胞内MDA含量，发挥其较强的抗氧化作用，从而为其用于白内障防治提供可靠的实验依据。]]> 2016/5/3 15:55:03 160true 方法：将SD大鼠60只随机分为糖尿病组和对照组。采用STZ腹腔注射制作糖尿病大鼠模型，糖尿病组大鼠腹腔注射STZ 60mg/kg，对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。分别于1、2和4mo时处死大鼠，摘取视网膜，HE染色观察视网膜结构变化，荧光血管造影观察视网膜血管变化，TUNEL染色观察视网膜细胞凋亡情况，Western Blot检测视网膜中HMGB1和NF-κB的表达。

结果：与对照组相比，糖尿病组大鼠视网膜各层细胞排列紊乱，细胞密度减低，可见微血管病变，以及内、外核层变薄和神经节细胞的凋亡； 荧光血管造影见周边毛细血管迂曲，可见血管闭塞及无灌注区； Western Blot检测HMGB1和NF-κB表达呈时间依赖性增高，且两者表达呈正相关(P<0.05)。

结论：HMGB1在糖尿病大鼠视网膜中表达增加，HMGB1可能通过NF-κB信号通路参与了糖尿病视网膜病变的发生。]]> 2016/5/3 15:55:04 159true 方法：将60只3周龄C57BL/6小鼠随机分为实验组和正常对照组(NC)，包括形觉剥夺3wk组(FDM 3W，n=20)，形觉剥夺4wk组(FDM 4W，n=20)，FDM3W正常对照组(FDM 3W-NC，n=10)和FDM4W正常对照组(FDM 4W-NC，n=10)，实验组右眼遮盖，左眼自然暴露作为自身对照，正常对照组不予任何处理。在实验3wk及4wk时检测所有小鼠屈光状态，HE染色观察巩膜及视网膜组织结构变化，免疫组织化学方法及实时荧光定量PCR观察Smad1在视网膜中的表达情况。

结果：(1)自身对照眼和正常对照组呈生理性远视化发展，FDM3W、FDM4W实验眼均呈相对近视化发展，差异具有统计学意义(P<0.05)；(2)与自身对照组及正常对照组比较，FDM3W、FDM4W实验眼巩膜及视网膜明显变薄； 实验眼视网膜中Smad1表达明显下降，差异具有显著统计学意义(P<0.01)。

结论：小鼠形觉剥夺性近视眼视网膜(尤其是内核层及内丛状层)中Smad1的表达呈下调趋势，Smad1极有可能通过转导视网膜信号参与了近视发生发展过程。]]> 2016/3/28 15:32:19 158true 7对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响。

方法：以小鼠视网膜神经节细胞株RGC-5为研究对象，按照不同处理因素将细胞随机分为4组：正常对照组(G1)、缺氧组(G2)、缺氧+激动剂(BzATP)组(G3)、缺氧+拮抗剂(BBG)组(G4)； 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率； 用Annxin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率； Western Blot检测细胞内cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白的表达。

结果：与正常对照组相比，RGC-5细胞经缺氧处理后，细胞存活率明显降低； 凋亡率显著升高； 细胞内cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白表达增加； P2X₇受体激动剂BzATP能明显加重缺氧诱发的细胞凋亡，而BBG预处理可以显著拮抗缺氧所致的细胞凋亡。

结论：缺氧能激活视网膜神经节细胞嘌呤受体P2X₇，并参与视网膜神经节细胞的凋亡。]]> 2016/3/28 15:32:19 157true 方法：采集10例VKH患者和10例正常对照组的血液样本，提取血浆中的总RNA，先进行RNA逆转录合成cDNA，然后在96孔板中利用miRNA实时定量PCR芯片进行Real-time PCR扩增和溶解曲线分析。获得原始的Ct值，应用Exiqon GenEx qPCR analysis software分析原始数据获得差异表达miRNA，并对差异表达miRNA进行生物信息学分析。

结果：miRCURY LNA^TM Universal RT microRNA PCR芯片一共有179个人类来源的miRNAs，共筛选出20个差异表达的miRNAs，其中在VKH组中高表达者有12个，低表达者有8个。差异表达miRNAs参与多种信号通路。

结论：Vogt-小柳原田综合征患者血浆中存在多个microRNA异常表达，异常表达的miRNAs可能通过某种信号通路参与VKH的发病。]]> 2016/3/28 15:32:19 156true 方法：选择3～4周龄的C57BL/6小鼠64只，以随机数字表法随机分为形觉剥夺21d组(16只)、同龄对照组(16只)； 形觉剥夺28d组(16只)、同龄对照组(16只)。形觉剥夺前后对所有小鼠进行带状光剪影验光检测小鼠眼球的屈光状态，游标卡尺测量小鼠的眼轴长度，造模后分别于21d和28d取小鼠的巩膜组织，苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠巩膜组织形态学变化，用荧光定量RT-PCR和免疫组织化学检测各组小鼠巩膜BMP-2 mRNA和其蛋白的表达水平。

结果：小鼠形觉剥夺21d和28d后，剥夺眼分别诱导出-1.60±1.03D和-3.10±1.19D的相对近视，眼轴分别拉长16±12μm和21±13μm，与自身对照组和正常对照相比较，差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色行巩膜形态学观察，可观察到剥夺眼巩膜变薄，胶原纤维排列紊乱。荧光定量RT-PCR和免疫组织化学结果显示实验眼BMP-2 mRNA和蛋白的表达明显下调，与自身对照和正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：C57BL/6小鼠形觉剥夺眼巩膜中BMP-2呈下调趋势，BMP-2可能参与了近视发展过程中的巩膜重塑作用，其具体机制有待进一步研究。]]> 2016/3/2 8:19:50 155true 方法：雄性SD大鼠100只随机被分为两组：糖尿病模型组80只(由STZ诱导造模)和空白对照组20只。再将糖尿病模型组随机分为4组，其中DM组(糖尿病对照组)20只，正常饲养，每日灌胃2mL生理盐水。PSP灌胃组三组，每组各20只，包括L组(低剂量PSP灌胃组，200mg/kg)、M组(中剂量PSP灌胃组，400mg/kg)、H组(高剂量PSP灌胃组，800mg/kg)，每次灌胃剂量2mL； BC组(空白对照组)20只，灌胃等剂量生理盐水作为对照。造模成功后5组在相同条件下饲养，每天灌胃，并在第2、4、6、8、10、12wk行前节照相、眼底荧光血管造影检查(FFA)，4、8、12wk行F-VEP、ERG检查。眼内眦静脉采血葡萄糖氧化酶法(强生血糖仪)测空腹血糖值。

结果：DM、L、M、H组与BC组相比：空腹血糖水平明显增高(P<0.05)。L、M、H组与DM组相比：空腹血糖水平增高(P<0.05)。L、M、H三组之间呈时间与剂量依赖关系。眼前节检查可观察到有6只DM组、3只L组、1只M组大鼠出现了不同程度的白内障症状，并随着时间推移愈发加重，而BC组眼前节照相并未发现异常。DM组大鼠在F-VEP检查表现为P100峰潜时延长，PSP灌胃组与DM组相比P100峰潜时延长时间缩短，BC组无明显改变。在ERG中表现为DM组大鼠Max-R a和b波振幅下降51.2%和59.8%，Cone-R a和b波振幅下降31.4%和41.2%，Ops-OS 值、30Hz Flicker N1-P1振幅下降，与BC组比较有显著统计学差异，PSP灌胃组情况好于DM组。在FFA检查中可发现DM组眼底与BC组相比出现背景荧光增强、大血管扭曲和毛细血管扩张、视网膜血管荧光素渗漏、视网膜内出血等典型糖尿病视网膜病变的表现，PSP灌胃组情况好于DM组。

结论：PSP既能有效降低糖尿病大鼠的血糖水平，又能延缓糖尿病大鼠眼部并发症的进程，减缓白内障和糖尿病视网膜病变的发生发展，可以对眼部病变起到明显的治疗作用。其机制有可能为通过抑制糖基化终产物，改善糖脂质代谢，提高糖耐量，而对糖尿病晶状体代谢和视网膜微小血管病变发挥保护作用。]]> 2016/3/2 8:19:50 154true 方法：BALB/c小鼠60只随机分为实验组A、实验B及对照组C，每组20只。采用1mol/L氢氧化钠溶液烧伤小鼠右眼角膜，建立炎症性角膜碱烧伤动物模型，分别予以A组、B组重组Canstatin蛋白3μg/mL、5μg/mL点右眼，4次/d，对照组C组予以生理眼水点右眼。在碱烧伤后第1、3、7、14d以形态学分析评价角膜上皮损伤面积及新生血管生长的情况，并于碱烧伤后第1、3、7、14d应用Western-blot检测角膜MMP-2和TIMP-2的表达，增强化学发光法(ECL)对结果进行分析。

结果：形态学分析显示，A组和B组小鼠在碱烧伤后第3d起各时间点角膜上皮缺损面积均小于对照组(P<0.01)，角膜新生血管均得到抑制，CNV面积明显小于对照组(P<0.01)。Western-blot结果显示，碱烧伤后各时间点MMP-2的表达，A组和B组均明显低于对照组(P<0.01)，TIMP-2的表达高于对照组(P<0.01)，且A组和B组间MMP-2的表达在第14d比较差异有统计学意义(P<0.05)，TIMP-2的表达在第7d及第14d比较差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：重组Canstatin蛋白可通过抑制角膜细胞及浸润的炎性细胞产生MMP-2，促进TIMP-2表达，从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展，对碱烧伤后角膜的重塑起着重要作用。]]> 2016/2/3 8:48:35 153true 方法：选择PDGFR-α shRNA/lip2 000比值1：1、1：2、1：3(其中PDGFR-α shRNA分别为2μg、3μg和4μg)制备复合物转染至人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium，HRPE)中，24h后分别取0.1mL注射到家兔玻璃体腔。选取健康成年有色家兔40只随机分为平衡盐溶液(balanced salt solution， BSS)组(N组)，含lipofectamine^TM2 000的HRPE细胞稀释液组(A组)，取最佳转染效率的1.0、1.5与2.0μmol/L含PDGF-α受体的shRNA及lipofectamine^TM2000的HRPE细胞稀释液组(B、C和D组)，每组8眼，右眼为实验眼。间接眼底镜观察PVR程度，免疫组织化学染色进行切片着色情况观察及组织病理学观察眼底改变。

结果：PDGFR-α shRNA/lip2 000比值1：2时，HRPE细胞最佳转染效率； B组、C组和D组PVR程度、组织病理学改变、免疫组织化学染色PDGFR-α浓度低于A组，D组比B组和C组更低。

结论：PDGF-α受体mRNA的RNA干扰对实验性PVR形成有抑制作用。]]> 2015/12/28 16:15:58 152true 方法：用视细胞外节膜盘(rod outer segments，ROS)于37℃孵育离体培养的3～5代C57小鼠RPE细胞，在孵育0、30、60、120、180、240min终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学； 以MERTK及Ras抗体、磷酸化MEK及MLCK抗体应用Western-Blot方法检测不同孵育时间(30、60、120、180min)MERTK、Ras、MEK及MLCK的激活状态； 以瞬时转染质粒方法抑制Ras及MERTK基因表达后，再次以Western-Blot方法检测对应时间MERTK-Ras通路激活状态及吞噬功能的变化。

结果：C57小鼠RPE细胞吞入ROS发生在孵育30min，并在3h达到饱和。在吞噬过程中，随着孵育时间的延长，RPE细胞MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达水平不断增多(与对照组相比，P<0.05)。Ras及MERTK干扰后的RPE细胞与ROS共孵育(30、60、120、180min)的全过程中，MERTK、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达及ROS的吞入数量始终维持较低水平，仅在孵育180min见到少量ROS吞入； 与未转染RPE细胞相比，siRas-RPE细胞及siMERTK-RPE细胞与ROS共孵育120、180min时，MERTK、Ras、MEK及MLCK的蛋白表达量均明显减少(P<0.05)。

结论：Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白通路是鼠RPE细胞吞噬过程中MERTK受体激活的下游信号通路。]]> 2015/12/28 16:15:58 151true 方法：SD大鼠80只，随机分组，10只为正常组，余大鼠通过一次性腹腔注射链脲佐菌素溶液(60mg/kg)联合大鼠玻璃体腔注射VEGF(0.05μg)的方式建立糖尿病视网膜病变增殖期大鼠模型。模型建立成功后，将最终成模大鼠随机分为4组：右归丸高中低剂量组、模型组，右归丸高中低剂量组每天给予相应右归丸浓缩液浓度进行灌胃，模型组、正常组每天给予等剂量蒸馏水灌胃。连续灌胃3mo后，采取SP免疫组织化学、Western-blot法分别观察检测大鼠视网膜组织PI3K和Akt的表达情况。

结果：免疫组织化学观察显示PI3K和Akt免疫组化染色的阳性表达，在视网膜上均为棕黄色颗粒； 正常组PI3K和Akt表达部分分布于神经节细胞层，内核也有少量表达，呈弱阳性免疫反应； 模型组、右归丸各治疗组大鼠视网膜神经节细胞层、内丛状层及内外颗粒层都有阳性表达； 与模型组比较，右归丸中、高剂量组PI3K和Akt表达均减弱，右归丸低剂量组表达减弱不明显； 与右归丸低剂量组比较，右归丸中、高剂量组PI3K和Akt表达减弱； 右归丸中、高剂量组表达强弱比较无差异。Western-blot检测结果显示与正常组比较，模型组、治疗组表达差异有显著统计学意义(P<0.01)，模型组、治疗组PI3K和Akt蛋白表达水平显著升高； 与模型组比较，右归丸中、高剂量组表达差异有统计学意义(P<0.05)，右归丸中、高剂量组PI3K和Akt蛋白表达水平均降低，右归丸低剂量组表达差异无统计学意义(P>0.05)； 与右归丸低剂量组比较，右归丸中、高剂量组表达差异有统计学意义(P<0.05)，右归丸中、高剂量组PI3K和Akt表达水平下降； 右归丸中、高剂量组表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：基于“阴中求阳”立法之右归丸可以通过影响PI3K和Akt蛋白表达水平，抑制PI3K/Akt 信号通路活化，延缓糖尿病视网膜病变的病变进程，为糖尿病视网膜病变防盲治疗提出新的治疗思路与科学依据。]]> 2016/11/23 14:07:30 150true 方法：将新生C57BL/6J小鼠随机分为3组，分别为正常对照组、VAS2870注射OIR组和无菌PBS缓冲液注射OIR组。将后两组小鼠在出生后第7d(P7)至P12置于体积分数为75%±2%的恒定高氧氧箱中以构建OIR模型，在P12时给予幼鼠双眼玻璃体腔注射VAS2870(0.5μL)，另一组幼鼠双眼注射同等剂量的无菌PBS缓冲液。三组小鼠均在P17时取右眼行视网膜铺片和Lectin染色，观察视网膜中央无血管区及病理性新生血管的情况； 取右眼行视网膜组织定量检测ROS/RNS含量； 取左眼应用RT-PCR检测Nox4 mRNA含量，并应用Western-blot测定视网膜组织中VEGF的表达。

结果：VAS2870注射OIR组小鼠视网膜中央无血管区面积较无菌PBS缓冲液注射OIR组明显减少(P<0.05)，病理性新生血管数目明显减少(P<0.05)； VAS2870注射OIR组小鼠视网膜组织Nox4 mRNA的表达量明显低于无菌PBS缓冲液注射组； VAS2870注射OIR组小鼠视网膜组织ROS含量较无菌PBS缓冲液注射组明显降低(P<0.05)； VAS2870注射OIR组小鼠视网膜组织VEGF的表达明显低于无菌PBS缓冲液注射组(P<0.05)。

结论：在小鼠OIR模型中，VAS2870可抑制Nox4 mRNA的表达，减少ROS/RNS，下调VEGF的生成，在视网膜病变进程中具有保护作用。]]> 2016/11/23 14:07:30 149true 方法：3周龄幼猫18只，随机分为正常组、形觉剥夺组、斜视组，利用单眼睑缝合法和外直肌离断法建立两种病因的幼猫弱视模型，12wk后行图形视觉诱发电位检测。摘取眼球做病理切片，使用免疫组化染色法检测两组弱视眼和正常组视网膜中NOS和GABA的表达。

结果：形觉剥夺组、斜视组12wk与同龄正常组图形视觉诱发电位(P-VEP)比较，均可见P1波潜伏期延长、振幅下降，差异有统计学意义(P<0.05)。弱视组视网膜内的NOS和GABA免疫阳性神经元染色淡，平均阳性面积减少，与同龄正常组相比差异有统计学意义(P<0.05)。弱视组间视网膜中的NOS和GABA平均阳性面积差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：NO和GABA的水平降低可能导致弱视眼视网膜内神经兴奋性的改变，二者在弱视形成过程中起着重要作用。]]> 2016/10/25 14:35:36 148true 2O₂诱导的人视网膜色素上皮细胞(retina pigment epithelium，RPE)氧化应激损伤的保护作用及可能机制。

方法：RPE细胞传代培养，分为阴性对照组：以正常培养液培养； 氧化损伤组：100μmol/L的H₂O₂作用12h； 槲皮素低浓度组：100μmol/L槲皮素孵育24h后，加入H₂O₂作用12h； 槲皮素高浓度组：500μmol/L槲皮素孵育24h后，加入H₂O₂作用12h。MTT比色法检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Hochest33258染色观察凋亡细胞形态，比色法检测细胞中过氧化氢酶(catalase，CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性。

结果：槲皮素能明显抑制H₂O₂诱导的RPE细胞活力的下降，用不同浓度槲皮素处理后，RPE细胞活性分别提高到79.67%±4.98%和83.00%±3.60%，与氧化损伤组(48.93%±3.39%)比较，差异具有统计学意义(P<0.05)； 经不同浓度槲皮素处理后，RPE细胞凋亡率分别下降至23.23%±3.29%和16.23%±1.94%，与氧化损伤组(38.03%±4.76%)比较，差异具有统计学意义(P<0.05)； 此外，槲皮素还能增加细胞中CAT、SOD、GSH-Px活性，与氧化损伤组比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)。

结论：槲皮素通过改善细胞中抗氧化酶活性有效抑制了H₂O₂对RPE细胞的损伤，从而为其用于治疗RPE细胞损伤提供可靠的实验依据。]]> 2016/10/25 14:35:36 147true 方法：制作角膜碱烧伤模型，取不同时间段角膜进行电镜观察，观察角膜血管化情况； 采用免疫组织化学方法检测l、3、5、7、14、28d角膜组织VEGF-C/D及VEGFR-3的表达； 并在角膜中仅有血管(A组)，同时存在新生血管及新生淋巴管(B组)，新生淋巴管消退期(C组)，角膜新生血管消退期(D组)以及正常组(N组)进行穿透性角膜移植，比较不同角膜植片的排斥反应指数(rejection index，RI)值及存活时间。

结果：电镜观察发现，在碱烧伤后第7d时鼠角膜出现新生血管，未出现新生淋巴管，在碱烧伤2wk时出现新生血管的同时出现淋巴管，5wk时无明显的新生淋巴管，8wk时新生血管逐渐消退； 大鼠角膜组织中VEGF-C/D及VEGFR-3的表达从第3d开始明显上升，并于第5d达到最高峰。角膜移植后N、A、B、C、D组的植片平均存活时间分别为14.25±0.62、9.35±1.02、5.06±1.13、8.71±0.83、9.44±1.05d。组间比较发现，B组植片平均存活时间显著性缩短(P<0.05)，A、C、D的存活时间均显著性延长(P<0.05)。

结论：角膜碱烧伤后存在VEGF-C/D及VEGFR-3的高表达，而且新生淋巴管能加速高危角膜移植后的免疫排斥反应。]]> 2016/9/19 17:26:48 146true 方法：实验分为空白对照组(未经转染BMSC细胞)、阴性对照组(采用不含BDNF基因的空载质粒转染的BMSC细胞)和实验组(采用含BDNF基因的质粒转染的BMSC细胞)。Realtime PCR测定基因修饰的BMSC细胞BDNF mRNA表达，ELISA测定基因修饰的BMSC细胞BDNF的分泌表达。

结果：实验组第3、4、5、6、7 和8代BMSC细胞BDNF mRNA表达高于空白对照组和阴性对照组，组间差异具有统计学意义(P3：F=491.788，P<0.05； P4：F=380.112，P<0.05； P5：F=1854.929，P<0.05； P6：F=224.540，P<0.05； P7：F=619.155，P<0.05； P8：F=10.092，P<0.05)。实验组BMSC细胞随着细胞传代，BDNF mRNA表达逐渐下降，不同代数间差异具有统计学意义(F=298.603，P<0.05)。实验组3、4、5、6、7和8代BMSC细胞BDNF的分泌表达高于空白对照组和阴性对照组，组间差异具有统计学意义(P3：F=520.609，P<0.05； P4：F=734.520，P<0.05； P5：F=152.847，P<0.05； P6：F=80.372，P<0.05； P7：F=96.083，P<0.05； P8：F=38.532，P<0.05)。实验组BMSC细胞随着细胞传代，BDNF的分泌表达逐渐下降，不同代数间差异具有统计学差异(F=230.084，P<0.05)。

结论：通过基因工程可增强BMSC细胞表达BDNF。]]> 2016/9/19 17:26:48 145true 方法：体外低氧培养人脐静脉内皮细胞6h后继续常氧培养3、6、12、24h，利用Real-time PCR检测miR-132和PGC-1α mRNA表达变化，Western-blot检测PGC-1α 蛋白表达变化，及观察各组与正常培养的细胞之间的表达差异。通过对人脐静脉内皮细胞转染miR-132模拟物与拮抗剂后，再分别置于常氧和低氧环境中培养，利用Real-time PCR检测不同氧条件下miR-132和PGC-1α mRNA的表达变化，Western-blot检测PGC-1α蛋白表达变化。

结果：miR-132和PGC-1α在细胞低氧培养后继续常氧培养3h时蛋白与mRNA表达量最高，与正常培养的细胞表达差异最为明显(P<0.01)。细胞转染后可观察到miR-132和PGC-1α在低氧组表达量要高于常氧组，而两组中转染miR-132模拟物后的表达量要高于转染拮抗剂组(P<0.01)。

结论：miR-132在低氧时的人脐静脉内皮细胞中表达明显上调，对PGC-1α存在调控作用。]]> 2016/9/19 17:26:48 144true 方法：利用35W白色冷光灯加用蓝色滤光片建立蓝光损伤体外培养的RPE细胞模型，蓝光控制波长在470～520nm，光照强度控制为2 000Lx左右，光照时间控制为24～96h，利用CCK-8法检测RPE细胞的增殖能力，利用real-time PCR技术检测RPE细胞中miR-103的含量。

结果：与对照组相比，蓝光照射组的RPE细胞的增殖能力减弱； 蓝光照射组的RPE细胞内的miR-103含量较对照组增加； miR-103过表达时，RPE细胞的增殖能力减退，降低miR-103的表达时，细胞增殖能力增强； 降低miR-103的表达能够减弱蓝光对RPE细胞增殖的抑制作用。

结论：蓝光通过上调miR-103抑制RPE细胞的增殖，miR-103可能成为治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜变性疾病治疗的新靶点。]]> 2017/7/24 10:38:37 143true 方法：采用随机数字法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(normal control group， NCG)、模型组(model group， MG)、姜黄素低剂量组(low-dose curcumin group， LDCG)和姜黄素高剂量组(high-dose curcumin group， HDCG)，每组15只。MG、LDCG、HDCG组SD大鼠右眼均采用前房灌注生理盐水升高眼压法建立RIRI模型。LDCG、HDCG组均于建模前30min和建模后每24h定时分别以20、100mg/kg的剂量腹腔注射姜黄素溶液。建模后72h作视网膜石蜡切片，采用HE染色观察各组视网膜组织结构及炎症细胞浸润程度。同时，提取视网膜分别作Western-blot、ELISA法检测和分析各组视网膜IL-23和IL-17的表达水平及变化情况。

结果：光学显微镜观察发现NCG组视网膜结构正常，层次清楚，细胞排列均匀整齐，视网膜厚度正常，无炎症细胞浸润。MG、LDCG组视网膜组织水肿，各层排列紊乱，可见细胞空泡、核浓缩和炎症细胞浸润等病理改变。HDCG组视网膜组织结构与NCG组相似，视网膜组织结构完整，炎症反应相对较轻。Western-blot、ELISA法检测和分析均显示IL-23、IL-17在MG组的表达明显增强，与NCG组相比差异均具有显著统计学意义(P<0.01)，但LDCG、HDCG组中IL-23、IL-17的表达较MG组明显降低，差异均有显著统计学意义(P<0.01)。

结论：姜黄素可以减轻视网膜的炎症反应，保护视网膜组织结构； 抑制视网膜IL-23、IL-17的表达，且呈剂量依赖性，这为姜黄素在亚急性期治疗RIRI提供了新的理论依据。]]> 2017/7/24 10:38:37 142true 方法：新西兰白兔36只72眼按照随机数字表法分为三组：AE组、激素组和溶媒对照组。构建Epi-LASIK动物模型，术后AE组滴用AE眼液，激素组滴用1g/L磷酸地塞米松眼液，溶媒对照组滴用不含AE的溶媒眼液。术后1、4、8wk在裂隙灯下进行haze分级评估。HE染色观察角膜上皮的修复，免疫组织化学法观察角膜上皮细胞NF-kB P65蛋白的表达。用ELISA法检测炎症细胞因子(TNF-α、TGF-β1和IL-1β)和抗炎症细胞因子(IL-4、IL-10和IL-13)的表达水平。

结果：HE染色结果显示，与激素组和溶媒对照组比较，Epi-LASIK术后1wk，AE组兔角膜上皮基底细胞形态较均匀，排列较规则； 术后4wk时，AE组浅基质层内出现少量新生胶原纤维，排列较规则，形成少量瘢痕； 术后8wk，AE组角膜浅基质层见少量新生胶原纤维，排列规则，极少形成瘢痕。在术后早期(1wk和4wk)，AE组与激素组、溶媒对照组相比，具有明显抑制炎症因子(TNF-α、TGF-β1和IL-1β)和促进抗炎症因子(IL-4、IL-10和IL-13)分泌的作用，组间比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。而且，在术后早期(1wk和4wk)，AE组与激素组、溶媒对照组相比，角膜上皮细胞NF-kB通路关键组份P65蛋白浅染，细胞核淡染，明显抑制NF-kB信号通路的激活。

结论：羊膜提取液可能通过抑制角膜上皮细胞的NF-kB信号通路，减轻炎症反应，从而减少胶原与瘢痕形成和haze的发生。]]> 2017/7/24 10:38:37 141true 目的：评估圆锥角膜基质环(keraring 355°)(ICRS)植入术前术后3mo人工晶状体(IOL)度数的计算和生物学特征。

方法：队列研究。收集18例(19眼)圆锥角膜接受角膜基质环植入术患者术前及术后3mo数据。分析裸眼视力(UCVA)， 最佳矫正视力(BCVA)，屈光度，人工晶体度数计算公式，眼轴长度(AL)和角膜曲率。

结果：患者平均年龄为29.58±0.6y。裸眼视力由0.84(0.35)LogMAR 显著提高到0.43(0.31)LogMAR(P<0.001)。3mo后，最佳矫正视力和眼轴长度无明显变化。球镜度数，柱镜度数和等效球镜(SE)均显著提高(P<0.001)。另一方面，角膜曲率1(K1)和角膜曲率2(K2)显著下降。3mo后， SRK/II(P<0.001)， Hoffer Q(P<0.001)and Holladay I(P<0.001)发生显著变化。

结论：角膜基质环植入术后，视力，屈光率和角膜曲率均有所提高，此外，人工晶状体计算公式度数明显改变。然而，角膜基质环植入术过程没有过度干预眼轴长，但降低角膜曲率值使得人工晶状体度数计算更加精确，所有公式得出同一晶状体度数。]]> 2017/6/26 0:00:00 140true 方法：利用pLenti-CMV-hChR2-EYFP 载体系统，构建携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP，进一步感染hUCMSCs，获得携带PEDF基因的hUCMSCs(PEDF-hUCMSCs)，激光共聚焦显微镜和ELISA法检测PEDF-hUCMSCs 的PEDF蛋白表达情况，采用CCK8法检测PEDF-hUCMSCs的活性。通过观察细胞形态和流式细胞术检测验证重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP感染hUCMSCs后对细胞传代、细胞表型的影响。

结果：成功构建携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP，高效感染hUCMSCs，获得的PEDF-hUCMSCs能有效表达PEDF蛋白，检测结果显示重组病毒感染组细胞与空白对照组细胞活性无统计学差异(P>0.05)。重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP感染对hUCMSCs的增殖能力、细胞形态和细胞表型没有明显改变。

结论：携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP修饰的PEDF-hUCMSCs能有效表达PEDF蛋白，为进一步探索应用PEDF-hUCMSCs治疗视网膜色素变性疾病奠定了实验基础和理论依据。]]> 2017/6/26 10:38:48 139true 方法：体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓间充质干细胞，并进行ELISA实验检测转染前IL-33的表达情况。构建GV303 Rat IL-33慢病毒载体，并进行慢病毒的包装。3d后荧光显微镜下观察GFP的表达，分别使用Western blot、ELISA检测转染后的BMSC中IL-33的表达。

结果：大鼠BMSC被成功分离并传代，流式细胞术鉴定BMSC可得到CD90、CD29为阳性，CD11b、CD45、CD34为阴性，与之前的文献报道相符。并且BMSC被成功诱导分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞。对转染前的BMSC行ELISA实验检测IL-33的表达，结果为阴性。病毒转染3d后于荧光显微镜下可观察到GFP的表达； ELISA实验检测转染后BMSC中IL-33的表达，结果为阳性； Western blot亦可以检测到IL-33的表达。

结论：应用GV303慢病毒载体可以建立稳定表达IL-33的大鼠BMSC原代细胞系。]]> 2017/4/25 17:20:01 138true 方法：选取健康雌性SD大鼠60只随机分为：空白组、模型组和实验组，每组各20只。采用视神经夹伤方法，建立大鼠视神经急性损伤模型。模型组制作视神经损伤模型成功后即刻向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL，之后的1、2wk分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL； 而实验组在视神经损伤模型制作成功后即刻向玻璃体腔注射PEDF 5μL，同样在1、2wk时分别向玻璃体腔注射PEDF 5μL。通过HE 染色，光镜下观察视网膜形态学变化并且对视网膜神经节细胞进行计数。通过免疫组织化学半定量的方法对Bcl-2和Bax的表达进行检测，观察PEDF对受损视神经的影响。

结果：HE染色观察，实验组神经节细胞从细胞形态上要好于模型组，且RGCs数量较模型组多。实验组的Bcl-2和Bax的蛋白表达与空白组、模型组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，实验组较模型组Bcl-2蛋白表达增加，Bax蛋白表达下降。

结论：PEDF可通过上调视网膜Bcl-2蛋白的表达、减弱Bax蛋白表达，以减弱或抑制视神经损伤后RGCs的细胞凋亡，减轻视神经损伤。]]> 2017/4/25 17:20:01 137true 方法：将培养的人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞暴露于电场强度为100、200、400mV/mm的直流电场中，未受电场暴露的细胞作为正常对照组。倒置显微镜观察并记录电场暴露前及暴露后的细胞图像，并计数细胞数目； 流式细胞仪检测电场暴露前及暴露24h后的细胞凋亡率和细胞周期。

结果：强度为400mV/mm的电场暴露3h后，HLE-B3细胞呈现朝向电场阴极一侧的定向移行。电场持续暴露后，HLE-B3细胞数逐渐减少，在电场作用6h和12h时分别较正常对照组减少 12.6%和18.6%，差异均具有统计学意义(P<0.05)。100、200、400mV/mm电场暴露24h后，HLE-B3细胞凋亡率分别为(9.2±1.9)%、(23.9±2.6)%、(54±2.5)%，与正常对照组相比明显增加(P<0.05)； 细胞周期检测结果显示，HLE-B3细胞进入G₂/M期的比例随电场强度增加逐渐上升，其中200mV/mm 和400mV/mm电场中G₂/M期细胞比例分别为(13.8±2.2)%和(15.6±2.5)%，与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。

结论：外加直流电场可诱导HLE-B3细胞的定向移行，随电场作用时间的延长和电场强度增加，细胞生长受到抑制，同时伴随细胞凋亡增加和细胞周期G₂/M期阻滞。]]> 2017/3/27 10:17:04 136true 方法：实验大鼠随机分为对照组和实验组。对照组为10只，饲养于海拔高度为1 500m的室内环境； 实验组为60只，分为6组，每组10只，分别饲养于模拟的海拔高度为5 000m的高原环境模拟实验舱中2、6、12、24、48、72h。各组大鼠处死后，每组分别采用苏木精-伊红染色观察大鼠视网膜病理形态的改变、免疫组化染色观察大鼠视网膜caspase-3和p53表达及流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。

结果：模拟的高海拔缺氧条件可造成大鼠视网膜的组织损伤，且缺氧时间越长视网膜病理损伤越明显。caspase-3和p53的表达于2h检测到，随着缺氧时间增加，两者表达逐渐增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。视网膜细胞早期凋亡率随缺氧时间逐渐上升，48h升高明显。

结论：细胞凋亡可能参与模拟高海拔缺氧的大鼠视网膜损伤机制，并通过caspase-3依赖的凋亡通路发挥作用。]]> 2017/3/27 10:17:04 135true 方法：选取清洁级雄性SD大鼠，腹腔注射链脲佐菌素建立DM模型，利用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)配置RU486溶液。DM模型建立成功后，腹腔注射糖皮质激素受体拮抗剂RU486为RU486治疗组，腹腔注射DMSO为糖尿病组。正常大鼠腹腔注射DMSO为对照组。3mo后，检测大鼠体质量、血糖、血清糖皮质激素(glucocorticoid，GC)浓度，HE染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)密度，利用Western blot和免疫荧光结合光密度值分析的方法，对神经元轴突再生标志物生长相关蛋白-43(growth associated protein-43，GAP-43)及突触数量标志物突触素(synaptophysin，SYN)的表达进行半定量分析。

结果：与对照组相比，糖尿病组大鼠血糖明显升高，体质量明显下降，血清GC浓度明显升高，RGC密度明显降低，视网膜GAP-43表达增强，SYN表达明显减弱(均P<0.01)； 与糖尿病组相比，RU486组RGC密度明显增加，视网膜GAP-43和SYN表达明显增强(均P<0.01)。

结论：拮抗GC的作用可能促进了糖尿病大鼠视网膜神经元轴突再生，增加了突触数量，恢复了视网膜RGC密度，结果提示GC长期升高可能参与了糖尿病视网膜病变的发生发展。]]> 2017/2/27 10:55:37 134true 方法：将采用PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成rBD-2 DNA片段连接到真核表达载体pIRES2-ZsGreen1的XhoⅠ与BamHⅠ酶切位点之间，构建pIRES2-ZsGreen1-rBD-2真核重组表达载体，重组质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，卡那霉素筛选出阳性克隆子，经酶切、测序鉴定重组载体构建成功后，采用脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞，此处实验分为三组即重组载体pIRES2-ZsGreen1-rBD-2转染的大鼠角膜上皮细胞组、未转染的空细胞组以及空载体pIRES2-ZsGreen1所转染的大鼠角膜上皮细胞组，在倒置荧光显微镜下观察细胞转染情况，最后经实时荧光定量RT-PCR相对定量法检测各组转染细胞中rBD-2基因mRNA的表达差异。

结果：成功构建pIRES2-ZsGreen1-rBD-2真核重组质粒，应用实时荧光定量RT-PCR相对定量法检测到重组质粒pIRES2-ZsGreen1-rBD-2转染组的大鼠角膜上皮细胞中rBD-2基因的mRNA表达水平明显多于另两组。

结论：应用基因工程技术构建的rBD-2真核表达载体pIRES2-ZsGreen1-rBD-2，通过脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞，能够使外源rBD-2基因在大鼠角膜上皮细胞中被转录成mRNA。]]> 2017/2/27 10:55:37 133true 方法：单独培养提纯分离出的兔泪腺上皮细胞一段时间后，将其与分离出的外周血淋巴细胞以1：1的比例混合进行培养，并用5-脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyUridine，BrdU)检测外周血淋巴细胞的增殖情况，将已激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉回输供体兔体内，回输细胞后的供体兔将作为兔自身免疫性干眼模型组，未诱导发病的正常兔个体为对照组，观察实验前后兔角膜染色和2、4、6、8wk的泪膜破裂时间、泪液的分泌等情况，回输细胞4wk后处死，收集双侧上下泪腺和结膜，并进行病理HE染色，然后提取泪腺组织中的总RNA，检测IL-17、TNF-α、IL-6、TGF-γ的表达。

结果：BrdU检测出的外周血淋巴细胞增值比率为3.72，激活的外周血淋巴细胞回输体内会诱导产生兔自身免疫性干眼，与正常组比较，泪膜破裂时间减少，且差异具有统计学意义(P<0.05)； 模型组较对照组泪液分泌显著减少，且差异具有统计学意义(P<0.05)； HE染色显示在回输细胞4wk后，结膜组织和泪腺均有淋巴细胞浸润，检测发现模型组IL-17、TNF-α、IL-6、TGF-γ的表达较对照组均有所增加，但IL-10、TGF-β的表达较对照组有所降低，且差异具有统计学意义(P<0.05)； 流式细胞术检测表明，在对照组中，泪腺组织和脾脏中CD4⁺CD25⁺Treg细胞比例较高，模型组CD4⁺CD25⁺Treg细胞比例有所降低，且差异具有统计学意义(P<0.05)。

结论：兔干眼模型发病时，CD4⁺CD25⁺Treg细胞免疫抑制作用下降，IL-17、TNF-α、IL-6、TGF-γ等细胞因子在泪腺的炎症反应中都发挥着重要作用。]]> 2017/2/27 10:55:37 132true 方法：RGC-5细胞株分3组培养：正常对照组(DMEM高糖培养基+100mL/L胎牛血清)，高糖组(DMEM高糖培养基+100mL/L胎牛血清+30mmol/L葡萄糖)、NEP1-40组(DMEM高糖培养基+100mL/L胎牛血清+30mmol/L葡萄糖+1μmol/L NEP1-40)。各组RGC-5细胞培养3d后检测各指标：显微镜观察细胞生长状态，cell counting KIT-8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力，Annexin V/PI双染流式细胞仪(flow cytometry，FCM)检测RGC细胞凋亡率，试剂盒检测线粒体内ROS含量的变化、胞内MDA水平及SOD活力，Western-blot检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。

结果：与正常对照组相比，高糖组细胞生长状态差、活力下降、凋亡率显著增加，ROS及MDA水平显著升高，SOD活力下降，抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低，促凋亡蛋白Bax表达上调，Bcl-2/Bax蛋白比值降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖组相比，NEP1-40组细胞抑制NgR表达后，氧化应激反应减弱，Bcl-2/Bax提高，细胞状态改善、细胞活力提高、凋亡率降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：高浓度葡萄糖能通过NgR介导氧化应激反应诱导RGC-5细胞凋亡。]]> 2017/1/20 11:21:30 131true 方法：取出生1～3d的Wistar大鼠，分离RVEC进行原代培养，Ⅷ因子抗体免疫组化鉴定细胞； 设立葡萄糖浓度0mmol/L为正常对照组(C组)，按不同葡萄糖浓度依次分为10mmol/L(A组)、15mmol/L(B组)、25mmol/L(D组)、35mmol/L(F组)，分别在24、48、72h的3个时间点用MTT法检测各组细胞OD值，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。

结果：RVEC纯度达94%； MTT法检测不同浓度葡萄糖对Wistar大鼠RVEC的影响：培养24h，各组的OD值比较差异无统计学意义(F=0.42，P=0.7411)； 培养48h，五组OD值比较差异有统计学意义(F=45.2，P=0.000)，五组间两两比较，除A组、B组、C组间差异无统计学意义外(Q_48AB=44.0427，Q_48AC=36.4701，Q_48BC=27.7953，均P>0.05)，其余各组两两比较差异均有统计学意义(其中Q_48CD=11.0715，Q_48AD=14.0794，Q_48AF=12.2964，Q_48BD=23.4698，Q_48BF=12.7016，Q_48DF=10.2013，均P<0.05； Q_48CF=6.4701，P<0.01)。培养72h后，五组OD值比较差异有统计学意义(F=37.46，P=0.000)，五组间两两比较，同样A、B、C三组间差异无统计学意义(Q_72AB=27.7338，Q_72AC=25.0054，Q_72BC=33.3797，均P>0.05)，其余各组差异均有统计学意义(其中Q_72AD=13.4793，Q_72BD=12.7546，均P<0.05； Q_72CD=7.3743，Q_72CF=8.3465，Q_72AF=4.7455，Q_72BF=3.9471，Q_72DF=3.2649，均P<0.01)。不同浓度葡萄糖在不同时间点对RVEC凋亡率的影响：培养24h后各组间差异无统计学意义(P>0.05)。培养48h后，五组间两两比较，Q_48AB=31.1704，Q_48AC=33.5947，Q_48BC=29.3968，Q_48AD=30. 4097，Q_48BD=28.8164，均P>0.05； Q_48CD=12.5032，Q_48AF=11.7531，Q_48BF=14.1076，Q_48DF=13.9372，均P<0.05； Q_48CF=7.0953，P<0.01。培养72h后，五组间两两比较，Q_72AB=26. 3392，Q_72AC=24.9142，Q_72BC=30.2976，均P>0.05，其余各组差异均有统计学意义(其中Q_72AD=14.1983，Q_72BD=12.9356，均P<0.05； Q_72CD=6.8752，Q72CF=7. 6745，Q_72AF=5.0545， Q_72BF=4.0741，Q_72DF=3.8876，均P<0.01)。

结论：葡萄糖浓度为25mmol/L培养48h 是RVEC高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间。]]> 2016/12/21 10:42:28 130true 方法：人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium，hRPE)体外常规培养和传代，取3～6代细胞用于实验。将培养的人RPE细胞分为常氧对照组和缺氧处理组，常氧对照组用DMEM完全培养液培养细胞，缺氧处理组培养液中含有终质量浓度为200μmol/L CoCl₂，分别观察缺氧后4、6、8、12、24h后终止。采用细胞免疫荧光染色技术及Western-blot方法鉴定人RPE细胞中NOX4的表达以及缺氧不同时间对NOX4表达的影响。

结果：常氧对照组及缺氧处理组人RPE细胞生长良好，形态呈梭形。缺氧处理组细胞的形态及排列方式与空白对照组相比无明显改变。免疫荧光染色显示，常氧对照组RPE细胞内有少量的NOX4表达，细胞质呈绿色荧光，细胞核呈蓝色荧光； 缺氧处理后NOX4的表达量增加，一直持续到缺氧后期； Western-bolt显示缺氧条件下人RPE细胞中NOX4的表达明显增加，与缺氧时间呈正比，与常氧对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)；

结论：NADPH氧化酶在人RPE细胞中有表达，缺氧条件下NOX4的表达显著提高，且与时间呈正比。提示NADPH氧化酶可能在脉络膜新生血管形成中发挥重要调节作用。]]> 2016/12/21 10:42:28 129true 目的：研究辛伐他汀延缓大鼠生理性视网膜衰老的作用和可能机制。

方法：3月龄健康无眼疾SD大鼠40只，按随机数字表法将大鼠分为辛伐他汀组和对照组，每组20只。在相同条件下饲养至9月龄后开始给予干预，辛伐他汀组大鼠用5mg/(kg·d)辛伐他汀灌胃，对照组大鼠用等容量生理盐水灌胃，均饲养至17月龄。采用HE染色检测两组大鼠视网膜厚度； 采用免疫组织化学染色检测视网膜神经感觉层和色素上皮层氧化应激相关蛋白Cu-Zn-SOD、NOX2和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。

结果：视网膜HE染色显示：与对照组相比，辛伐他汀组神经感觉层排列整齐，细胞形态差异不大，细胞未见明显丢失，色素上皮层结构紧密； 神经感觉层及色素上皮层的厚度增加，差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示：与对照组相比，辛伐他汀组超氧化物歧化酶Cu-Zn-SOD的表达增强，过氧化物酶NOX2的表达减弱； 凋亡相关蛋白Bcl-2的表达减弱，Bax的表达增强，Bcl-2/Bax的比值较对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：辛伐他汀可通过减轻氧化应激反应、增加细胞凋亡等机制延缓生理性大鼠视网膜的衰老。]]> 2017/11/20 16:09:09 128true 目的：探讨二烯丙基三硫化物(diallyl trisulfide，DATS)抑制缝线诱导的大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)的生长情况，检测大鼠新生血管化角膜中VEGF、p-AKT 的表达量，初步探讨其抑制CNV的可能机制。

方法：缝线法诱导大鼠CNV模型，随机分为A组：含DMSO的生理盐水对照组(10只)； B组：25μmol/L DATS治疗组(10只)； C组：50μmol/L DATS治疗组(10只)； D组：100μmol/L DATS治疗组(10只)； E组：200μmol/L DATS治疗组(10只)。缝线后第7d裂隙灯下观察各组CNV的生长情况并计算面积。缝线后第14d取各组大鼠角膜组织行HE 染色，光镜下观察各组角膜病理组织形态，并采用RT-PCR 法检测VEGF mRNA 的表达情况，Western-blot 法检测VEGF、p-AKT蛋白表达情况。

结果：C、D、E组的CNV面积分别与A组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。HE切片显示，与A组相比，B、C、D组角膜水肿、新生血管、炎症细胞浸润情况逐渐减轻。与A组相比，B、C、D、E组的VEGF mRNA 的表达水平均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与A组相比，C、D、E组的VEGF、p-AKT蛋白的表达逐渐下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：DATS 能够抑制缝线诱导的大鼠CNV的形成，其机制可能与抑制VEGF的表达及使得p-AKT的失活有关。]]> 2017/10/19 16:49:00 127true 目的：通过体外细胞实验和在体动物实验初步评价MIL60在眼局部应用的安全性。

方法：常规培养人角膜上皮细胞，CCK8法体外检测MIL60抗体对角膜上皮细胞毒副作用。流式细胞仪检测MIL60对角膜上皮细胞的凋亡影响。正常SD大鼠结膜下注射MIL60抗体，观察眼部反应情况，通过裂隙灯显微镜检查、Draize的评分系统和病理切片等，分析结膜和角膜病理改变。建立SD大鼠角膜上皮缺损模型，结膜下注射MIL60抗体，观察角膜上皮愈合情况。

结果：MIL60不影响角膜上皮细胞增殖，不促进角膜上皮细胞的凋亡。结膜下注射MIL60抗体后，大鼠角结膜和眼部其他各组织形态正常，组织学检查显示结构正常，未见炎症细胞浸润。结膜下注射MIL60不影响角膜上皮愈合。

结论：MIL60结膜下应用安全性较好，不影响角膜上皮细胞正常功能。]]> 2017/10/19 16:49:00 126true 目的：研究银杏内酯B联合干细胞移植对青光眼大鼠的影响及相关机制。

方法：实验共分为五组：正常对照组(Control)、青光眼模型组(GLA)、干细胞组(RSCs)、银杏内酯B组(GKB)与混合组(RSCs+ GKB)。眼球组织进行HE染色，TUNEL染色检测视网膜神经节细胞的凋亡，免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax以及Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的蛋白表达水平，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测各组组织中Bcl-2、Bax mRNA表达水平。

结果：HE染色结果显示，给予干细胞或银杏内酯B处理，减少纤维间质水肿与空泡的出现，混合组纤维间质少见水肿与空泡； 银杏内酯B联合干细胞处理后显著减少视网膜神经节细胞的凋亡，上调Bcl-2的蛋白与mRNA表达水平，并下调Bax的蛋白与mRNA表达水平、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的蛋白表达水平。

结论：银杏内酯B联合干细胞能够抑制青光眼大鼠视网膜神经节细胞的凋亡，改善青光眼，其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9因子的表达有关。]]> 2017/10/19 16:49:01 125true 目的：结合体外细胞实验和在体动物实验研究羊膜上皮细胞(amnion epithelial cell，AEC)混悬液对兔角膜上皮细胞(cornea epithelial cell，CEC)生物学行为的影响及对急性角膜碱烧伤的治疗作用。

方法：细胞实验：实验组将AEC及CEC于Transwell小室中培养，上室为AEC混悬液，下室接种CEC，对照组上室仅为培养基，于不同时间点行CCK-8法检测CEC的增殖活性； 免疫细胞化学法检测PCNA表达； 细胞划痕法观察细胞迁移能力。动物实验：采用改良的兔角膜碱烧伤模型制备方法：将10mm直径环钻轻置于角膜中央，向环钻中央加入NaOH溶液，1min后去环钻迅速冲洗兔眼，随机分三组(空白对照、AEC混悬液滴眼液治疗组、结膜下注射治疗组)，于术后每周行裂隙灯显微镜及荧光素钠染色观察角膜情况。第28d摘除眼球并固定行HE染色，免疫组织化学法检测角膜VEGF、mcp-1的表达。

结果：CCK-8法示AEC混悬液作用后的CEC增殖活性增强(P<0.05)； 免疫细胞化学法显示PCNA阳性表达增强(P<0.05)； 划痕试验示AEC干预后CEC迁移加快。动物实验表明，滴眼液组和结膜下注射组的角膜恢复时间明显缩短，CNV面积均少于对照组(P<0.05)，滴眼液组和结膜下注射组之间差异无统计学意义(P>0.05)； HE染色示治疗组角膜组织炎症细胞浸润更少，组织排列更规则； 免疫组化显示组织中VEGF、mcp-1表达更低(P<0.05)，而滴眼液组和结膜下注射组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：AEC混悬液促进CEC增殖和迁移，影响CEC生物学行为变化。经AEC混悬液点眼及结膜下注射治疗兔眼碱烧伤后角膜修复加快，且两种方法抑制炎症反应及CNV形成，有望成为治疗急性角膜碱烧伤的新方法。]]> 2017/9/18 10:53:55 124true 目的： 探讨17-β雌二醇对高糖诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial，RPE)细胞的保护作用和可能机制。

方法：RPE细胞传代培养，随机对照法分为四组：空白对照组：5.5mmol/L葡萄糖常规培养基进行处理； 高糖组：100mmol/L葡萄糖作用12h； 17-β雌二醇低浓度组：10μmol/L 17-β雌二醇孵育24h后，加入100mmol/L葡萄糖作用12h； 17-β雌二醇高浓度组：100μmol/L 17-β雌二醇孵育24h后，加入100mmol/L葡萄糖作用12h。MTT比色法检测细胞活力，Hochest33258染色观察细胞凋亡，H₂DCFDA染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平，比色法检测过氧化氢酶(catalase，CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)的表达。

结果：随着葡萄糖浓度的增加，RPE细胞活性逐渐下降，17-β雌二醇能明显抑制高糖诱导的RPE细胞活力的下降，降低RPE细胞凋亡率，抑制细胞内ROS生成。此外，17-β雌二醇能明显增加RPE细胞内CAT、SOD表达，降低MDA的表达。

结论：17-β雌二醇能有效抑制高糖对RPE细胞的损伤，从而为用于治疗视网膜相关疾病提供可靠的实验依据。]]> 2017/9/18 10:53:55 123true 目的：观察活血散结中药复方含药血浆对血小板源性生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)干预下兔RPE细胞增殖的影响。

方法：酶消化法获取RPE原代细胞，进行RPE细胞的原代培养和传代； 制备活血散结中药复方含药血浆； 选取第4代兔RPE细胞为实验细胞，PDGF低、中、高剂量(5、10、20μg/L)干预48h后，CCK-8法检测并选取适宜细胞实验干预浓度； 建立PDGF干预下RPE细胞增殖模型。实验分组为空白对照组(DMEM)、正常血浆组、PDGF(10μg/L)组、PDGF(10μg/L)+AG1296(10μmol/L)组、PDGF(10μg/L)+10%含药血浆组，PDGF(10μg/L)+20%含药血浆组，分别加入相应处理因素干预24h后，Transwell法测定兔RPE细胞迁移力； 而干预48h后，CCK-8法测定兔RPE细胞的细胞活力OD值。

结果：10%和20%浓度的活血散结中药复方含药血浆能有效抑制PDGF干预下RPE细胞的细胞活力、细胞迁移。

结论：活血散结中药复方含药血浆能够抑制PDGF干预下兔RPE细胞增殖，这可能是其有效治疗增殖性玻璃体视网膜病变的机制之一。]]> 2018/8/17 17:07:06 122true 目的：探讨移植色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor，PEDF)蛋白修饰人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells，hUCMSCs)在治疗大鼠视网膜色素变性的作用。

方法：分离和培养hUCMSCs，以PEDF重组慢病毒转染hUCMSCs。实验RCS大鼠(royal college of surgeon rat，RCS)随机分为3组干预，每组8只。实验组视网膜下腔注射PEDF-hUCMSCs； hUCMSCs对照组注射等量hUCMSCs，PBS对照组注射等量PBS。 注射后4、8wk观察视网膜电图(electroretinogram，ERG)，检测视网膜外核层厚度，观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)了解细胞的存活情况，通过视网膜切片免疫荧光染色观察其在体吞噬功能，通过MERTK蛋白的表达检测重建吞噬能力来评价疗效。

结果：携带 PEDF基因的重组慢病毒载体，能高效感染hUCMSCs，感染后的 hUCMSCs进行传代培养，慢病毒可延长目的基因在细胞内的表达。移植后8wk视功能上ERG中b波幅值实验组明显高于对照组，移植后4、8wk形态学上视网膜外核层(outer nuclear layer，ONL)厚度实验组均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。移植后4、8wk时GFP染色发现转染PEDF慢病毒的hUCMSCs细胞均能在视网膜下腔存活，视网膜切片行免疫荧光染色显示移植的PEDF-hUCMSCs对感光细胞脱落的外节碎片有吞噬作用。移植后4、8wk时MERTK蛋白的表达检测实验组蛋白条带灰度值明显高于对照组，提示实验组中MERTK蛋白表达也明显增加，RPE重建吞噬能力提高。

结论：移植PEDF蛋白修饰hUCMSCs对RCS大鼠视网膜有保护作用。]]> 2018/7/20 11:38:05 121true 目的：探讨生长激素释放多肽(Ghrelin)对高糖环境下人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞氧化应激的影响。

方法：将体外培养的RPE细胞分为阴性对照组、高糖组、Ghrelin低浓度组、Ghrelin高浓度组。通过CCK-8法检测细胞存活率，氧敏感荧光探针H₂DCFDA染色法观察细胞氧化损伤程度，流式细胞技术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)的变化，分光光度计比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量。

结果：CCK-8结果显示，分别用10^-9mol/L、10^-6mol/L Ghrelin预处理后，RPE细胞存活率分别为54.79%±3.43%和79.16%±3.29%，与高糖组(41.65%±3.42%)比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。H₂DCFDA荧光探针染色结果显示，Ghrelin预处理后RPE细胞内ROS生成量下降，氧化损伤细胞减少。分光光度计比色法结果显示，与高糖组相比，Ghrelin组细胞SOD活力增加，MDA含量下降。

结论：Ghrelin可以抑制高糖诱导的人RPE细胞氧化损伤，其在糖尿病视网膜病变的发生发展过程中可能具有一定的细胞保护作用。]]> 2018/6/27 10:52:29 120true 目的：探讨17-β雌二醇(17-β-estradiol，E2)和他莫昔芬(tamoxifen，TAM)在慢性高眼压小鼠模型中的调节作用。

方法：通过前房注射磁珠堵塞房角构建小鼠慢性高眼压模型。将C57BL/6成年小鼠随机分为对照组、Beads组、E2组和E2+TAM组。采用眼压计监测各组眼内压(intraocular pressure， IOP)的变化； HE染色观察并测量中央视网膜厚度； Brn3a免疫组织化学染色观察并计数存活的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)； Western blot法检测视网膜中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达。

结果：造模后2wk内，Beads组小鼠平均眼压显著高于对照组，而E2组和E2+TAM组眼压均明显低于Beads组，差异均有统计学意义(P<0.05)，且E2+TAM组小鼠平均眼压较E2组更低。造模2wk后，Beads组小鼠视网膜RGCs数量较对照组显著减少(P<0.05)，而皮下注射E2+TAM可明显抑制该现象。造模2wk后，各组小鼠中央视网膜厚度比较，差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示，Beads组小鼠视网膜GFAP蛋白表达量升高，注射E2和E2+TAM后，GFAP蛋白表达量显著下降(P<0.05)。

结论：皮下注射E2和E2+TAM均能降低慢性高眼压模型小鼠眼内压，增加RGCs存活数量，且降低视网膜GFAP蛋白表达量，表明E2和TAM在青光眼的发生发展过程中具有一定的保护作用。]]> 2018/5/25 15:46:38 119true 目的：观察急性高眼压后不同时间点大鼠视网膜神经节细胞中自噬及副凋亡的发生，并探讨其机制。

方法：将50只健康成年SD雄性大鼠随机分为正常对照组、急性IOP损伤3d，1、4、8wk组。利用高眼压(elevated intraocular pressure，IOP)前房灌注法建立SD大鼠急性IOP损伤模型，取各组大鼠的视网膜组织，采用免疫荧光染色法检测视网膜微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3，LC3)的表达； 利用透射电镜(transmission electron microscopy，TEM)检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)细胞质中自噬体及胞质空泡的产生，验证自噬及副凋亡的发生。

结果：透射电镜观察可见大鼠RGCs细胞质中包裹着电子致密物的双层或多层膜的自噬泡，正常对照组、急性IOP损伤后3d，1、4、8wk组，RGCs细胞质中每50μm²自噬泡数量分别为0.79±0.43、2.14±0.36、2.29±0.47、1.57±0.51、1.21±0.43个，急性IOP损伤后各组大鼠RGCs内每50μm²自噬泡数量均较正常对照组明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组视网膜神经节细胞层(ganglion cell layer，GCL)仅见少量LC3阳性表达，LC3阳性细胞百分比15.90%。急性IOP损伤后3d，1、4、8wk组大鼠GCL中LC3阳性细胞百分比均较正常对照组明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。急性IOP损伤后3d，1、4、8wk组大鼠每200μm内RGCs数量较正常对照组明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。急性IOP后3d持续至8wk透射电镜观察可见大量由线粒体和/或内质网肿胀形成的细胞质空泡。

结论：急性IOP损伤后RGCs涉及自噬和副凋亡的激活，各种类型的程序性细胞死亡(programmed cell death，PCD)可作为单一细胞死亡的形式或多种细胞死亡形式共存，参与急性IOP后视网膜神经节细胞的损伤。]]> 2018/5/25 15:46:38 118true 目的：利用DNA探针杂交技术，结合显色探针技术建立一种新型、高灵敏的免疫检测体系，用于早期先天性白内障的筛查。

方法：选取3个常染色体显性遗传的先天性白内障家系中患者14例，取静脉血并提取mRNA，建立CRYAB的捕获探针及显色探针。利用DNA探针，通过碱基配对原则形成三明治结构(捕获探针-DNA探针-显色探针)检测入选者的血样。1家系6例患者静脉血利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测αB-晶状体蛋白。

结果：最佳条件下，双特异探针技术可检测到最低浓度的先天性白内障晶状体蛋白的突变基因，各突变位点检测率为99.5%～99.7%； ELISA法检测样本αB-晶状体蛋白上调，阳性率为85.9%。双特异探针技术敏感性更高，检测位点更多，ELISA法仅局限于蛋白检测水平，精确性不高。

结论：双特异探针检测技术操作简单，灵敏度高，可重复性高，经济实惠，在临床上用于产前诊断、优生优育具有重要的应用价值。]]> 2018/5/25 15:46:38 117true 目的：探讨大株红景天对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠眼血流的影响。

方法：将90只SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组各30只。模型组和干预组大鼠高糖高脂饲料喂养+链脲佐菌素(40mg/kg)腹腔注射，以构建DR模型大鼠，同时对照组大鼠基础饲料喂养+等量生理盐水腹腔注射。造模成功后，干预组大鼠注射大株红景天注射液(10mL/次，1次/d)，对照组和模型组大鼠注射等量生理盐水。连续干预治疗4wk。采用Laser Doppler Flowmetry激光血流仪检测大鼠眼部血流，采用TUNEL法检测大鼠视网膜细胞凋亡，采用 RT-PCR法和Western blot法检测大鼠视网膜组织血管内皮生长因子(VEGF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达。

结果：模型组和干预组大鼠全血粘度、全血粘度高切、全血粘度低切和血沉高于对照组(P<0.01)，而干预组大鼠各指标较模型组降低(P<0.01)。模型组和干预组大鼠PSV和EDC低于对照组(P<0.01)，RI高于对照组(P<0.01)； 而干预组大鼠PSV和EDC较模型组增加(P<0.01)，RI较模型组降低(P<0.01)。模型组和干预组大鼠视网膜细胞凋亡率大于对照组(P<0.01)，而干预组凋亡率较模型组降低(P<0.01)。模型组和干预组大鼠视网膜组织VEGF和GFAP 表达高于对照组(P<0.01)，GLAST表达低于对照组(P<0.01)； 而干预组大鼠VEGF和GFAP表达较模型组降低(P<0.01)，GLAST表达较模型组增加(P<0.01)。

结论：大株红景天注射液能显著改善糖尿病视网膜病变模型大鼠眼部血液流变学和血流动力学，减少模型大鼠视网膜细胞凋亡，下调视网膜组织VEGF和GFAP表达，上调GLAST表达。]]> 2018/4/24 14:27:15 116true 目的：探讨体外沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。

方法：靶向TRAF6基因的小干扰RNA(TRAF6 siRNA)转染Y79细胞，采用qRT-PCR和Western blot法检测转染效果，MTT比色法及细胞克隆实验测定沉默TRAF6对Y79细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。

结果：Y79细胞经TRAF6沉默后，TRAF6 mRNA和蛋白表达水平与对照组相比均明显降低，细胞存活率、克隆形成率均明显低于对照组细胞，细胞凋亡率明显高于对照组，同时细胞周期发生明显变化，G0/G1期细胞数目增多，S和G2/M期细胞数目减少，且侵袭细胞数目、迁移细胞数目相比对照组明显减少。

结论：沉默TRAF6后能显著抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞的生长，促进肿瘤细胞的凋亡，同时抑制其侵袭和迁移能力，TRAF6可能是视网膜母细胞瘤治疗的新靶点。]]> 2018/4/24 14:27:15 115true 目的：探讨miR-138对年龄相关性白内障晶状体上皮细胞抗氧化应激能力的影响及其作用机制。

方法：采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测年龄相关性白内障与正常人透明晶状体前囊膜组织中及人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)氧化应激模型中miR-138的表达水平。利用2'，7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内源性活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平。向人晶状体上皮细胞中分别转染miR-138 mimics，mimic controls，miR-138 inhibitors，inhibitor controls 72h后细胞暴露于400μmol/L H₂O₂ 1h，采用RT-qPCR检测p53和Bax的mRNA表达，western blotting检测p53和Bax的蛋白表达水平，MTS法检测细胞增殖活力。

结果：与正常对照组相比，年龄相关性白内障晶状体组织中与人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-138的表达均显著升高，差异有统计学意义(P<0.001)； 人晶状体上皮细胞氧化应激模型中内源性ROS的水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.001)。相对于对照组，miR-138 mimics组p53和Bax的mRNA、蛋白表达水平均明显升高，细胞增殖活力明显下降，差异有统计学意义(均P<0.001)； miR-138 inhibitors组p53和Bax的mRNA、蛋白表达水平均明显下降，细胞增殖活力显著升高，差异有统计学意义(均P<0.001)。

结论：miR-138在年龄相关性白内障囊膜组织中表达上调，通过正调控下游靶基因p53和Bax，下调人晶状体上皮细胞抗氧化应激的能力，抑制人晶状体上皮细胞增殖和修复，从而参与年龄相关性白内障的发生过程。]]> 2018/3/26 15:30:52 114true 目的：探讨Caspase-1对小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy，OIR)中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的作用及其机制。

方法：随机将12只7日龄(P7)C57BL/6J小鼠分为正常组、OIR组和OIR+VX-765组，正常组在正常氧环境中饲养，其余两组构建OIR模型； P12～P16，OIR+VX-765组和OIR组分别每天腹腔注射Caspase-1抑制剂VX-765(4mg/kg)和等量0.4%聚乙二醇(VX-765溶剂)； 于P17制作视网膜铺片行Lectin染色，比较三组间视网膜无血管区和新生血管区面积的大小； 采用免疫荧光染色法观察视网膜组织中Caspase-1的表达和活化小胶质细胞的分布。培养小胶质细胞BV-2细胞分为对照组、缺氧组及抑制剂组，抑制剂组和缺氧组分别经VX-765和0.4%聚乙二醇预处理3h后，缺氧条件下培养24h； 对照组常规培养相同时间。通过Western blot检测Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β和VEGF的蛋白表达变化； 用各组BV-2细胞培养上清液作为条件培养基，刺激培养血管内皮细胞RF/6A，进行管腔形成和细胞迁移实验，并比较各组间的差异。

结果：P17正常组小鼠视网膜血管化完全，未见明显无血管区及视网膜新生血管； OIR组视网膜无血管区和新生血管面积百分比分别为16.58%±1.14%、4.00%±0.41%； OIR+VX-765组两者明显减少，分别为12.23%±1.02%和2.16%±0.52%(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示，Caspase-1在正常小鼠视网膜组织中表达较弱，在OIR小鼠中主要在神经节细胞层和内丛状层有明显的阳性表达，并与活化的小胶质细胞有明确的共定位。Western blot检测结果显示，缺氧处理的培养小胶质细胞BV-2中Caspase-1、p20、IL-1β和VEGF蛋白表达明显提高，而Caspase-1抑制剂则可明显下调p20、IL-1β和VEGF的蛋白表达水平(P<0.05)。管腔形成和细胞迁移实验结果显示，RF/6A细胞经缺氧组BV-2培养上清液处理后，管腔形成长度和细胞迁移数目分别为271±12和347±34个，而加入抑制剂后，二者明显减少，分别为171±22和212±27个(P<0.05)。

结论：在小鼠OIR中，Caspase-1能够调节小胶质细胞促进视网膜新生血管的生成，其作用机制可能与Caspase-1活化小胶质细胞中其下游炎性效应分子IL-1β，并释放VEGF相关。]]> 2018/3/26 15:30:52 113true 目的：探讨小干扰RNA(the small interference RNA，SiRNA)沉默整合素链接激酶(integrin-linked kinase，ILK)基因对转化生长因子-β₂(transforming growth factor beta 2，TGF-β₂)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts，HTFs)增殖和凋亡的影响。

方法：体外培养HTFs细胞，波形蛋白(Vimentin)和角蛋白(keratin)免疫荧光染色进行鉴定。实验分组包括NC组：正常对照HTFs； H+T组：HTFs+5μg/L TGF-β₂； H+T+NC SiRNA组：HTFs+5μg/L TGF-β₂+50nmol/L阴性对照SiRNA； H+T+ILK SiRNA组：HTFs+5μg/L TGF-β₂+50nmol/L ILK SiRNA。50nmol/L ILK SiRNA转染HTFs细胞，5μg/LTGF-β₂刺激后，分别利用Western-blot检测细胞内ILK的蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖能力，Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡。

结果：Western-blot结果显示，TGF-β₂可以明显上调HTFs细胞内ILK的表达，ILK SiRNA可以明显抑制TGF-β₂诱导的ILK蛋白表达(P<0.05)。CCK-8检测结果显示，5μg/L TGF-β₂可以促进HTFs细胞增殖，ILK SiRNA转染后48h，细胞的增殖明显受到抑制，且低于正常对照组(P<0.05)。Hoechst 33342/PI双染结果显示，TGF-β₂并不诱导HTFs细胞发生凋亡(P>0.05)，但ILK SiRNA可以诱导HTFs细胞发生明显凋亡，并出现少量坏死细胞(P<0.05)。

结论：ILK SiRNA可以抑制TGF-β₂诱导的HTFs增殖，并诱导HTFs细胞发生凋亡。]]> 2018/3/26 15:30:53 112true 目的：分析不同浓度重组myocilin蛋白对体外培养的原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma，POAG)患者小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin，FN)表达及对黏附功能的影响。

方法：体外培养POAG患者小梁网细胞，分别加入含重组myocilin蛋白终浓度为0(对照组)、0.5、1、1.5、2、2.5μg/mL的无血清培养基，运用Western blot、ELISA法分别检测小梁网细胞内和细胞培养液中FN的表达水平； 并运用CCK-8法检测 myocilin蛋白对POAG小梁网细胞黏附的影响。

结果：Western blot检测结果：FN/β-actin比值分别为34.8±0.6、33.4±1.0、28.9±0.8、21.6±0.9、15.9±1.1、11.9±0.8； 0.5μg/mL组与对照组相比，差异无统计学意义(P=0.092)； 1.0、1.5、2、2.5μg/mL组与对照组比较，差异有统计学意义(F=346.131，P<0.05)。ELISA法检测各组细胞培养液中FN浓度为：0.4654±0.0039、0.4596±0.0032、0.4216±0.0037、0.4214±0.0039、0.4043±0.0039、0.3806±0.0071μg/mL； 0.5μg/mL组与对照组相比，差异无统计学意义(P=0.120)； 1.0、1.5、2、2.5μg/mL组与对照组比较，差异有统计学意义(F=176.054，P<0.05)。运用CCK-8法检测各组细胞吸光度均值分别为1.9814±0.1624、1.8848±0.0267、1.4895±0.0916、1.4120±0.1087、1.3392±0.1391、1.0310±0.0639； 0.5μg/mL组与对照组相比，差异无统计学意义(P=0.300)； 1、1.5、2、2.5μg/mL组与对照组相比，差异有统计学意义(F=177.818，P<0.05)。

结论：Myocilin蛋白能抑制POAG小梁网细胞FN的表达，并呈现一定的剂量依赖性； myocilin 蛋白可降低POAG小梁网细胞的黏附能力。]]> 2018/2/27 0:00:00 111true [已撤稿]

目的：研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞在人工模拟的缺氧和高糖环境中VEGF₁₆₅ 及VEGF_165b 表达的情况。

方法：正常接种并体外培养人视网膜色素上皮细胞，待细胞稳定生长后以150μmol/L CoCl₂ 和25mmol/L 葡萄糖浓度分别模拟细胞缺氧和高糖环境，将接种细胞分为正常组(5.56mmol/L 葡萄糖)、缺氧组(5.56mmol/L 葡萄糖+150μmol/L CoCl₂)、高糖组(25mmol/L 葡萄糖，不加CoCl₂)、联合组(25mmol/L 葡萄糖+150μmol/L CoCl₂)共四组。每组分别于12、24、36、48h提取RNA。MTT 比色法检测细胞活力及增长趋势； RT-PCR 法检测不同时间点四组RPE 细胞VEGF₁₆₅ mRNA 和VEGF_165b mRNA 的相对表达量。

结果：缺氧和高糖环境下RPE 细胞分裂增殖受限，细胞活力降低。同一组细胞不同时间点比较，正常组VEGF₁₆₅和VEGF_165b随时间变化的表达差异无统计学意义(P >0.05)，而缺氧组、高糖组、联合组VEGF₁₆₅和VEGF_165b的表达则随时间变化而变化，差异有统计学意义(P<0.05)。同一时间点各组相互比较，在缺氧模型建立后12h 各组细胞间VEGF₁₆₅和VEGF_165b的表达差异无统计学意义(P >0.05)，而24、36、48h 时各组细胞VEGF₁₆₅和VEGF_165b的表达差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：体外培养RPE细胞能够正常表达VEGF_165b，缺氧和高糖是在转录水平诱导VEGF₁₆₅ mRNA的表达上调，同时降低了VEGF_165b mRNA的表达量。]]> 2018/2/27 0:00:00 110true 目的：观察结膜下注射复方倍他米松对鸵鸟-兔眼板层角膜移植术后免疫排斥反应的缓释治疗作用。

方法：16只6周龄健康新西兰白兔角膜(单眼)行板层角膜移植术，植片应用鸵鸟脱细胞的角膜基质，术后分成两组，实验组术毕及术后结膜下注射复方倍他米松注射液(每隔7d一次)，对照组术毕及术后结膜下注射地塞米松磷酸钠注射液(每隔7d一次)。分别于术后1、2wk， 1、2mo取兔角膜组织做石蜡包埋切片，进行HE染色观察组织特点，同时进行间接免疫荧光法检测CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞的变化。

结果：术后2mo，实验组角膜植片在位，并保持透明，新生血管极少，组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示，仅见少许中性粒细胞浸润，未见CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞； 对照组炎症反应明显，角膜植片混浊，组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示，炎性反应以中性粒细胞浸润为主，可见CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞。

结论：复方倍他米松作为长效缓释剂可有效抑制鸵鸟-兔板层角膜移植术后免疫排斥反应，延长植片的存活时间。]]> 2017/12/18 10:32:18 109true 目的：探讨膳食途径摄入ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFAs)抑制小鼠视网膜新生血管的作用及其机制。

方法：选取60只7日龄C57BL /6J小鼠随机分为3组：A组在正常环境中给予普通膳食饲养； B、C组是将小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为75%±2%的氧箱内饲养5d后转移至正常氧环境中饲养5d建立氧诱导视网膜病变模型，其中C组按体质量给予ω-3PUFAs 7.5mg/(kg·d)饲养，B组给予普通膳食饲养。分别于出生后17d时处死小鼠，铺片法计算视网膜新生血管相对面积，HE染色检测突破内界膜的血管内皮细胞核数目，GC-MS检测视网膜组织中ω-3PUFAs/ω-6PUFAs相对含量和比例，实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)分析视网膜组织中过氧化物酶增殖活化受体-γ(preoxisome proliferator-activated receptor γ，PPAR-γ)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)的mRNA表达。

结果： 出生后17d三组小鼠间新生血管面积及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数比较差异有统计学意义(F_{新生血管面积}=20.45，P<0.05； F_{内皮细胞核数}=48.66，P<0.05)，新生血管面积A组与B组之间比较，差异有统计学意义(t=8.64，P<0. 05)，C组与B组之间比较，差异有统计学意义(t=8.91，P<0.05)。HE染色法观察内皮细胞核数，A组与B组比较差异有统计学意义(t=38.51，P<0.05)； C组与B组比较差异有统计学意义(t=19.86， P<0.05)。三组小鼠视网膜ω-3PUFAs和ω-6PUFAs相对含量比较，差异有统计学意义(F=129.86、112.44，均P<0.05)，C组含量分别与A、B组比较，差异均有统计学意义(t=23.15、25.42； t=16.43、11.95，均P<0.05)； 三组小鼠视网膜ω-3PUFAs/ω-6PUFAs比例、视网膜PPAR-γ mRNA表达、视网膜VEGF-A mRNA表达、视网膜VEGFR-2 mRNA表达比较，差异有统计学意义(F_比例=10.30，F_PPAR-γ=138.24，F_VEGF-A=69.12，F_VEGFR-2 =52.45，均P<0.05)，C组ω-3PUFAs/ω-6PUFAs比例与B组比较提高，差异均有统计学意义(P<0.05)； C组PPAR-γ mRNA表达水平明显高于B组，C组VEGF-A mRNA表达水平及VEGFR-2 mRNA表达水平低于B组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：通过膳食途径摄入一定量的ω-3PUFAs，可能通过上调ω-3PUFAs/ω-6PUFAs比例，激活PPAR-γ，进而减少VEGF-A和VEGFR-2表达，抑制视网膜新生血管形成。]]> 2017/12/18 10:32:18 108true 目的：探讨蛋白酶活化受体2(protease-activated receptor 2，PAR2)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma，UM)中的表达，以及沉默人UM 细胞系M23中PAR2基因对细胞增殖和侵袭的影响。

方法：选取2012-02/2017-12在我院行手术治疗且资料完整的UM患者45例45眼，选取同期因眼部外伤行眼球摘除且葡萄膜正常的患者30例30眼，实时荧光定量PCR术检测UM和正常脉络膜组织中PAR2基因表达，培养M23细胞并分为PAR2干扰组、阴性对照序列组和空白组，实时荧光定量PCR技术检测细胞中PAR2基因表达，MTT法检测细胞增殖能力，Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。

结果：UM组织中PAR2 mRNA相对表达量为1.73±0.13，正常脉络膜组织中PAR2 mRNA相对表达量为1.06±0.10，差异有统计学意义(t=23.732，P<0.01)； UM组织中PAR2 mRNA相对表达量与病理学类型、巩膜浸润、视盘受累和眼外生长有关，差异有统计学意义(P<0.05)； PAR2干扰组细胞中PAR2 mRNA相对表达量低于阴性对照序列和空白组，差异有统计学意义(P<0.05)； PAR2干扰组细胞24、48、72和96h时吸光度A值低于阴性对照组和空白组，差异有统计学意义(P<0.05)； PAR2干扰组迁移细胞数和侵袭细胞数低于阴性对照序列组和空白组(P<0.05)。

结论：PAR2在UM组织中呈高表达，且与肿瘤高转移风险有关，特异性沉默M23细胞中PAR2基因表达可有效抑制细胞增殖、迁移及侵袭。]]> 2018/11/19 14:44:07 107true 目的：探讨B-细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma factor，Bcl-2)，Bcl-2相关X蛋白(Bcl2-Associated X protein，Bax)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在早期糖尿病大鼠视网膜上的表达及意义。

方法：用链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射(60mg/kg)制作大鼠早期糖尿病模型。于造模后4、8、12wk颈椎脱臼法处死大鼠，取双眼全眼球组织做石蜡切片并做视网膜铺片，通过HE染色观察视网膜各层的形态学和血管分布变化； 取双眼视网膜组织石蜡切片，通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax和VEGF在视网膜组织中的表达。行ADP酶视网膜血管染色，观察视网膜血管形态变化。应用激光共聚焦显微镜检测视网膜细胞的形态、细胞中Ca²⁺的荧光强度和分布变化。

结果：糖尿病组造模12wk突破内界膜的内皮细胞核个数呈递增趋势。糖尿病组视网膜中周部和周边部可见无血管区，无血管区面积也明显大于空白对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病组大鼠VEGF、Bcl-2和Bax光密度值与空白对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病组大鼠造模4、8、12wk比较，RGCs内钙离子荧光浓度逐渐升高，荧光染色强度比值升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：早期糖尿病大鼠视网膜的Bcl-2和Bax表达非常明显，从而上调 VEGF的表达。Bcl-2、Bax和VEGF是糖尿病视网膜病变中新生血管形成的重要影响因素。]]> 2018/10/22 14:57:10 106true 目的：探讨葡萄糖关键代谢酶在高糖诱导的人晶状体上皮(HLEB3)细胞中的表达情况。

方法：将体外培养的HLEB3细胞分为正常对照组(采用DMEM培养液培养，含葡萄糖5mmol/L)、氧化应激组(采用含H₂O₂ 200μmol/L的DMEM培养液培养)、高糖诱导组(采用含葡萄糖30mmol/L的培养液培养)，培养24h后检测细胞凋亡情况和细胞活力及6种葡萄糖关键代谢酶(6-磷酸果糖激酶-1、丙酮酸激酶、己糖激酶、柠檬酸合成酶、α-酮戊二酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶)的mRNA表达情况。

结果：高糖诱导HLEB3细胞凋亡，高糖诱导组(63.43%±3.40%)细胞活力低于正常对照组(100.00%±0.00%)和氧化应激组(91.90%±5.11%)，且高糖诱导组细胞6种葡萄糖代谢关键酶的mRNA表达水平均低于正常对照组和氧化应激组(均P<0.05)。

结论：高糖可以诱导HLEB3细胞葡萄糖关键代谢酶的表达水平降低，诱导细胞凋亡，影响细胞活性。]]> 2019/8/23 9:51:20 105true 目的：研究大黄素对烟曲霉菌性角膜炎模型大鼠的抗炎作用机制。

方法：建立烟曲霉菌性角膜炎模型，分为模型组和大黄素组，各8只，正常组10只。大黄素组采取大黄治疗，模型组和正常组采取等体积生理盐水治疗。观察大鼠角膜炎症指数、病理学特征，检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、MAPK、NF-κB蛋白。

结果：大黄素组大鼠角膜炎症指数、角膜炎症细胞计数、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平、MAPK、NF-κB蛋白低于模型组，PPAR蛋白表达高于模型组(P<0.05)。

结论：大黄素通过调控PPAR、MAPK、NF-κB蛋白，改善TNF-α、IL-6、ICAM-1炎症因子水平，对烟曲霉菌性角膜炎大鼠起到抗炎作用。]]> 2019/8/23 9:51:20 104true 目的：探讨自然光暴露对单眼远视离焦幼年恒河猴正常和准分子激光角膜切削术(PRK)损伤后角膜组织潜在的光损伤作用。

方法：选取12只2月龄恒河猴，行右眼PRK，矫正度数为-4.0D，制作单眼远视离焦近视动物模型。幼猴体质量和性别均衡配对后分为两组：人工照明组(AL组，n=6)和自然光组(NL组，n=6)。两组幼猴饲养于同一人工照明条件室内饲养环境，NL组幼猴每天9：00～11：00和15：00～17：00于室外随单笼接受自然光照射。PRK术后裂隙灯检查比较两组PRK眼角膜愈合及haze形成情况； PRK术后50d，每组各取4只幼猴双眼泪液，采用蛋白质芯片法检测泪液11种细胞因子含量。PRK术后180d取角膜组织，分别行病理组织学检查组织结构变化； 免疫组织化学法检测TGF-β1和α-SMA表达； TUNEL法检测细胞凋亡以及采用羟胺法和硫代巴比妥酸法分别测定角膜上皮细胞SOD和MDA含量。

结果：PRK术后NL组PRK眼出现一过性haze，术后40d两组haze分级评估有差异(P=0.015)。PRK术后50d，两组PRK眼泪液EGF和TGF-β1含量均有差异(P=0.045、0.038)，两组间对侧眼均无差异(P>0.05)； 且AL组、NL组组内泪液TGF-β1水平有差异(P=0.003、0.036)。术后180d，两组双眼角膜组织形态学一致； 角膜组织内各层偶见细胞凋亡染色，且无明显TGF-β1和α-SMA表达； 两组PRK眼和对侧眼角膜上皮细胞SOD活力和MDA含量均无差异(P>0.05)。

结论：自然光照射量可加剧幼猴PRK术后角膜组织修复反应，但远期未对角膜组织造成不可逆病理组织学改变，对正常的幼猴角膜组织无明显光损伤作用。]]> 2019/7/25 14:32:55 103true 目的：通过研究甲醛缓释体类防腐剂(FARs)对活体兔巩膜交联后的巩膜生物力学强度的改变来衡量其有效性。

方法：将健康新西兰白兔170只随机分为17组，其中15组为FARs药物组(羟甲基甘氨酸钠、重氮咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、乙内酰脲、恶唑烷，每种药物根据给药浓度分为1/10最大允许浓度组、1/2最大允许浓度组、最大允许浓度组)，另设戊二醛(阳性对照)组、空白对照组，于右眼结膜下注射相应药物。60d后取右眼鼻上1：00位和颞下7：00位巩膜并制成巩膜条带，检测其厚度、弹性模量、蠕变率、极限应力、极限应变以衡量巩膜生物力学强度。

结果：羟甲基甘氨酸钠、重氮咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、乙内酰脲、恶唑烷均可增强巩膜生物力学强度，且具有一定的药物浓度依赖性，其中羟甲基甘氨酸钠、重氮咪唑烷基脲、恶唑烷三种药物交联效果较强，在1/10最大允许浓度下效果明显。

结论：羟甲基甘氨酸钠、重氮咪唑烷基脲、恶唑烷具备较强的巩膜胶原交联效应，能够显著提高后巩膜生物力学强度，具备治疗病理性近视的潜能。]]> 2019/7/25 14:32:55 102true 目的：观察青光安4种有效组份对抗兔眼青光眼术后滤过道胶原纤维、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)的影响。

方法：将青光安4种有效组份与青光安中药混悬液应用于滤过手术后D组(有效组份1组)、E组(有效组份2组)、F组(有效组份3组)、G组(有效组份4组)、H组(青光安混悬液组)，通过与A组(空白对照组)、B组(模型组)和C组(丝裂霉素C组)进行比较，观察青光安4种有效组份与青光安中药混悬液对青光眼术后滤过道瘢痕组织中胶原纤维、α-SMA及FN的影响。

结果：C组、E组、F组、H组胶原纤维面积比值、α-SMA的表达、FN的表达与B组比较均有差异(P<0.05)。

结论：青光安有效组份2、青光安有效组份3、丝裂霉素C以及青光安混悬液通过抑制胶原纤维、α-SMA及FN的表达，表现出明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用。]]> 2019/5/22 14:15:43 101true 目的：探讨不同浓度白细胞介素-6(IL-6)刺激下体外培养的牛眼小梁细胞中纤维连接蛋白的表达变化。

方法：采用组织块培养法取新鲜牛眼的小梁网组织，提取并培养第3代牛眼小梁细胞，采用细胞形态学对细胞进行鉴定。经终浓度为0、0.1、0.5、1ng/mL的IL-6药物刺激24h后，采用荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测各浓度IL-6刺激下牛眼小梁细胞中FN mRNA和蛋白的表达。

结果：培养出的牛眼小梁细胞符合第3代牛眼小梁细胞形态特征。实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法显示，不同浓度IL-6刺激下的牛眼小梁细胞所产生的FN mRNA量分别为1.000±0.000、0.213±0.004、0.056±0.001、0.019±0.002，FN蛋白表达量分别为1.167±0.012、0.662±0.009、0.238±0.011、0.061±0.011，均呈下调趋势(r_s=-0.713、-0.901，均P<0.05)，4组间FN mRNA和蛋白表达均有差异(P<0.05)。

结论：体外培养的牛眼小梁细胞在外源性IL-6刺激下影响FN mRNA和蛋白的表达，且IL-6浓度与蛋白表达呈负相关性，推测IL-6可能通过影响FN基因与蛋白的表达，进而改变小梁网组织结构。]]> 2019/5/22 14:15:43 100true 目的：观察抗真菌药物诱导的肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响。

方法：选用健康无眼疾的C57BL/6J雄性小鼠，将实验小鼠随机分为两组：对照组和两性霉素B组。对照组给予正常饮食，两性霉素B组给予添加两性霉素B的饮食，以诱导小鼠肠道真菌菌群失调，4wk后对两组小鼠角膜进行上皮创伤，使用荧光素钠染色角膜创伤区域，动态观察上皮修复情况，并利用免疫荧光染色观察角膜上皮细胞、炎症细胞变化，通过HE染色观察角膜厚度的变化。

结果：两性霉素B组与对照组相比，再上皮化速度和创伤修复延迟，炎症细胞明显减少，角膜上皮厚度变薄。

结论：肠道真菌菌群失调延迟角膜创伤的修复，降低角膜创伤后的炎症反应。]]> 2019/4/22 9:40:42 99true 目的：探究microRNA-152-3p(miR-152-3p)靶向胰岛素样生长因子1(IGF1)基因对高糖诱导的视网膜色素上皮ARPE-19细胞活性和凋亡的影响，并探讨其作用机制。

方法：高糖诱导ARPE-19细胞并转染miR-152-3p mimics，噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡情况，荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中miR-152-3p水平，蛋白印迹(Western blot)法检测细胞中IGF1和VEGF表达水平，双荧光素酶报告基因检测IGF1和miR-152-3p靶向结合关系。

结果：高糖能够降低ARPE-19细胞活性，提高细胞凋亡率，抑制细胞中miR-152-3p的表达，提高IGF1和VEGF的表达； 而过表达miR-152-3p能够回调高糖诱导的细胞活性抑制及凋亡增加，抑制IGF1和VEGF的表达。双荧光素酶报告基因实验验证了IGF1是miR-152-3p的靶基因。

结论：miR-152-3p可通过靶向IGF1基因调节VEGF的表达抑制高糖诱导的ARPE-19细胞活性抑制和凋亡增加。]]> 2019/4/22 9:40:42 98true 目的：观察脂联素(APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增殖、迁移和管腔形成的影响。

方法：将体外培养的RF/6A细胞随机分为空白对照组(正常培养基培养)、甘露醇对照组(含20mmol/L甘露醇的培养基培养)、高糖组(含25mmol/L D-葡萄糖的培养基培养)和高糖+APN组(含25mmol/L D-葡萄糖+10μg/mL APN的培养基培养)。分别采用CCK-8法检测细胞增殖，Transwell小室检测细胞迁移，基质胶(Matrigel)法检测细胞管腔形成能力。

结果：空白对照组与甘露醇对照组细胞增殖率(100.00%±0.00% vs 99.09%±0.46%)、迁移数(121.60±6.02个 vs 119.60±9.39个)及管腔形成数(12.11±0.84个 vs 12.22±0.96个)均无差异(P>0.05)。高糖组细胞增殖率(71.42%±2.29%)明显低于空白对照组和甘露醇对照组，细胞迁移数(144.20±9.65个)和管腔形成数(16.00±2.90个)均明显高于空白对照组和甘露醇对照组(P<0.05)。高糖+APN组细胞增殖率(90.87%±1.68%)明显低于空白对照组和甘露醇对照组，明显高于高糖组； 细胞迁移数(73.00±6.04个)和管腔形成数(7.89±0.38个)均明显低于空白对照组、甘露醇对照组及高糖组(P<0.05)。

结论：APN可以促进高糖条件下RF/6A细胞存活及增殖，抑制细胞迁移和管腔形成，提示APN对高糖导致的RF/6A细胞损伤具有一定的保护作用，抑制病理刺激条件下的血管生成。]]> 2019/2/21 10:57:17 97true 目的：研究细胞自噬在缺氧条件下视网膜色素上皮(RPE)细胞表达炎性因子IL-1β和IL-6中的作用。

方法：将体外培养的人RPE细胞系随机分为缺氧组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+缺氧组、氯喹(CQ)+缺氧组和对照组。培养24h后采用Western blot法检测各组细胞的自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、Beclin-1及p62的相对表达水平； 采用ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-6的浓度。

结果：缺氧组IL-1β和IL-6的浓度明显高于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中LC3B-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的相对蛋白表达量均明显高于对照组和3-MA+缺氧组，缺氧组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ的相对蛋白表达量低于CQ+缺氧组(均P<0.01)。缺氧组细胞中p62相对蛋白表达量明显低于对照组、3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组(均P<0.01)。

结论：缺氧使RPE细胞LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达增强，p62表达减弱，并促进细胞分泌IL-1β和IL-6，自噬抑制剂3-MA和CQ能够减少RPE细胞表达IL-1β和IL-6。]]> 2019/2/21 10:57:17 96true 目的：探讨阿柏西普对大鼠视网膜Müller细胞信号转导及转录活化因子3(STAT3)表达的影响。

方法：采用不同浓度的阿柏西普 100μL(加药浓度分别为400、200、100pg/mL)大鼠永生化视网膜Müller细胞24、48h后，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell小室法检测细胞侵袭，Western-blot法检测AKT、STAT3蛋白表达。

结果：随着阿柏西普浓度的升高，Müller细胞的增殖活性下降(P<0.05)。处理48h后，随着阿柏西普浓度的升高，Müller细胞的凋亡率逐渐上升，Müller细胞的侵袭穿透指数逐渐降低(P<0.05)。转染48h后，随着阿柏西普浓度的升高，Müller细胞的AKT蛋白相对表达量无显著变化(P>0.05)，STAT3蛋白相对表达量逐渐降低(P<0.05)。

结论：阿柏西普可抑制大鼠视网膜Müller细胞STAT3蛋白表达，从而抑制细胞增殖与侵袭性，促进细胞凋亡。]]> 2019/2/21 10:57:18 95true 目的：探讨氢对氧化应激诱导的视网膜衰老的保护机制。

方法：将小鼠随机分为三组：对照组、模型组(NaIO₃处理组)和治疗组(H₂水灌胃组)。模型组通过鼠尾静脉注射NaIO₃溶液建立视网膜氧化应激损伤模型； 对照组小鼠注射生理盐水； 治疗组予富含H₂的饮用水灌胃后造模。利用SA-β-gal染色检测视网膜衰老情况。收集小鼠视网膜，western-blot检测DNA损伤反应相关蛋白ATM、NF-κB蛋白、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和DNA修复相关蛋白HMGB1的表达。

结果：SA-β-gal染色显示，治疗组蓝绿色沉淀较模型组相比减少。western-blot结果显示治疗组中DNA损伤反应相关蛋白ATM、NF-κB、Cyclin D1相对表达量(0.10±0.009、0.32±0.01、0.19±0.002)较模型组(0.77±0.08、0.70±0.02、0.36±0.01)均显著降低，差异均具有统计学意义(均P<0.01)； 而治疗组中DNA修复相关蛋白HMGB1相对表达量(0.927±0.06)较模型组(0.383±0.07)显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。

结论：氢可以通过抑制氧化应激诱导的DNA损伤减弱视网膜衰老。]]> 2019/1/17 14:38:59 94true 目的：探讨五苓散对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制。

方法：SD雄性大鼠50只随机分为空白组、模型组、高剂量组、低剂量组、阳性对照组，每组10只，采用高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。高剂量组和低剂量组大鼠采用五苓散水煎液灌胃，模型组和空白组大鼠采用等量生理盐水灌胃，阳性对照组大鼠右眼球内注射康柏西普。给药12wk后，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清C反应蛋白(CRP)和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)表达水平，HE染色观察视网膜组织结构，伊文思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠血-视网膜屏障通透性，免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜中的表达。

结果：模型组大鼠空腹血糖水平和视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均较空白组明显升高，高剂量组大鼠视网膜组织EB渗透量、CRP和sICAM-1表达均低于低剂量组和阳性对照组(均P<0.05)。模型组大鼠视网膜神经节细胞层结构紊乱，视网膜水肿，VEGF表达明显升高； 与低剂量组和阳性对照组比较，高剂量组大鼠视网膜组织神经节细胞排列较清晰，水肿减轻。

结论：五苓散能有效降低糖尿病大鼠血清炎症因子水平，降低视网膜组织中VEGF的表达，减轻水肿，保护血-视网膜屏障。]]> 2019/1/17 14:38:59 93true 目的：探讨石斛酚对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的醛糖还原酶(AR)通路及氧化应激的保护作用。

方法：将体外培养的HRMECs分为5组：正常组(葡萄糖5.5mmol/L)、甘露醇组(葡萄糖5.5mmol/L +甘露醇24.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖30mmol/L)、石斛酚组(葡萄糖30mmol/L+石斛酚5μmol/L)、依帕司他组(葡萄糖30mmol/L+依帕司他1μmol/L)。通过MTS实验检测细胞活力，DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平； Western blotting法检测核因子κB(NF-κB)的蛋白表达； qRT-PCR法检测AR、HIF-1α及VEGF的mRNA表达。

结果：DCFH-DA荧光探针法结果显示石斛酚可明显降低高糖环境下细胞内的ROS水平。与高糖组相比，石斛酚组NF-κB的蛋白表达，AR、HIF-1α及VEGF的mRNA表达也都明显下降。依帕司他组的AR及NF-κB表达趋势与石斛酚组一致。

结论：石斛酚与依帕司他都可抑制AR/NF-κB通路的激活，同时石斛酚还可抑制高糖诱导的HRMECs氧化应激反应。石斛酚在糖尿病视网膜病变的发生发展中可能有一定的保护作用，可能帮助减少新生血管的生成。]]> 2019/1/17 14:38:59 92true 目的：研究角膜胶原交联方法联合那他霉素应用时的体内外抗真菌效果，为临床真菌性角膜炎的治疗提供治疗方法及实验基础。

方法：采用黄曲霉菌、茄病镰刀菌、白色念珠菌三种常见致病真菌，实验组分为交联联合那他霉素组、那他霉素联合核黄素组、那他霉素联合紫外照射组、交联组，并用那他霉素组作为对照。将药物涂到有1.5麦氏浊度的真菌孢子悬液的沙堡弱琼脂培养皿的中心，10min后使用胶原交联仪照射10min，之后28℃培养36h，测量抑菌圈并进行统计学分析。制备兔眼茄病镰刀菌感染模型，按随机数字表法将模型兔随机分为模型对照组、交联治疗组、那他霉素治疗组、交联联合那他霉素治疗组，每组5只； 另取5只正常兔按照角膜胶原交联疗法进行照射，5只正常对照。通过前节照相、角膜刮片、共焦显微镜等观察各组治疗结果，并在治疗结束后采用电镜观察角膜超微结构改变情况。

结果：体外单独应用角膜胶原交联术，对三种真菌均无效； 当交联与那他霉素联合应用时，抗真菌效果均优于对照组，且差异具有统计学意义(P<0.05)； 那他霉素与核黄素、那他霉素与紫外线分别联合应用时，抗菌效果与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。针对兔真菌感染模型，那他霉素治疗组及交联联合那他霉素治疗组病程约14d，交联治疗组病程约21d； 经治疗后，各治疗组均已愈合，各组角膜上皮均无缺损，新生血管较多，角膜内无菌丝； 前节照相结果显示，交联联合那他霉素治疗组治疗结果优于其它各治疗组，瘢痕组织较少，角膜愈合较好，病程相对短。

结论：角膜胶原交联方法联合那他霉素，可促进角膜愈合，缩短病程，增强抗真菌效果，有望为眼科临床真菌性角膜炎的治疗提供一种新的治疗技术。]]> 2018/12/17 9:54:34 91true 目的：观察色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)在氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy，OIR)中对小鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization，RNV)和单核细胞趋化因子-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)表达的影响，探讨PEDF对缺血缺氧性视网膜病变的保护作用和机制。

方法：取7日龄C57BL/6J新生小鼠160只，将120只7日龄小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为(75±2)%的氧环境内饲养5d，然后返回正常氧环境中饲养5d，建立OIR模型； 40只小鼠始终置于正常氧环境饲养。分别于12日龄和14日龄给予PEDF药物治疗组小鼠右眼玻璃体腔注射PEDF(2μg/μL)各1μL，给予PBS治疗对照组和正常对照组小鼠右眼玻璃体腔注射等量的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)。所有小鼠于17日龄麻醉处死后取视网膜，采用视网膜铺片和Lectin染色法观察各组小鼠病理性新生血管的生成情况； Western-blot检测PEDF和MCP-1蛋白在各组小鼠视网膜的表达； 实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠视网膜PEDF和MCP-1 mRNA的表达。

结果：视网膜铺片和Lectin染色结果显示OIR模型组RNV面积较正常组显著增大，差异有统计意义(P<0.01)，PEDF药物治疗组RNV面积较PBS治疗对照组明显减小，差异有统计意义(P<0.01)。Western-blot和RT-PCR结果显示，OIR模型组MCP-1蛋白和mRNA的表达水平均明显高于正常组，差异有统计意义(均P<0.05)； OIR模型组PEDF蛋白和mRNA的表达水平均明显低于正常组，差异有统计意义(均P<0.01)； PEDF药物治疗组MCP-1蛋白和mRNA的表达量较PBS治疗对照组均显著减少，差异有统计意义(均P<0.05)； PEDF药物治疗组MCP-1蛋白和mRNA的表达量较正常对照组升高，但差异均无统计学意义(均P>0.05)。

结论：PEDF能够抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成，同时下调MCP-1在OIR小鼠视网膜的表达，后者可能是其抑制新生血管形成从而发挥视网膜保护作用的机制之一。]]> 2018/12/17 9:54:34 90true 目的：探讨二十二碳六烯酸(DHA)玻璃体注射对年龄相关性黄斑变性(ARMD)大鼠光感受器细胞凋亡和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路的影响。

方法：大鼠随机分为空白对照组、模型组、低剂量DHA组(L-DHA组)、中剂量DHA组(M-DHA组)和高剂量DHA组(H-DHA组)。采用光损伤法建立干性ARMD大鼠模型。HE染色观察视网膜病理变化，TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况，透射电镜观察视网膜神经节细胞超微结构，酶联免疫吸附法测定视网膜组织TNF-α和IL-6水平，Western Blot检测视网膜组织p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达。

结果：与空白对照组比较，模型组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05)，神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较，M-DHA组和H-DHA组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均升高(P<0.05)，神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。

结论：DHA可能通过激活PI3K/Akt通路抑制ARMD大鼠光感受器细胞凋亡。]]> 2019/11/21 15:09:55 89true 目的：探讨小分子RNA干扰HIF-1α对糖尿病视网膜病变小鼠视网膜的保护作用及机制。

方法：C57BL/6雄性小鼠40只随机分为正常组、糖尿病组、siRNA-HIF-1α组、siRNA-NC组，制备糖尿病模型。观察各组小鼠视网膜组织病理学变化，免疫组织化学检测微血管密度(MVD)，实时荧光定量PCR检测各组小鼠视网膜组织中HIF-1α、VEGF、NF-κB、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA表达，Western blot法检测各组小鼠视网膜组织中HIF-1α、ET-1、vWF蛋白表达。

结果：糖尿病组、siRNA-NC组和siRNA-HIF-1α组大鼠的体质量低于正常组，而血糖水平高于正常组(均P<0.05)； 糖尿病组和siRNA-NC组小鼠视网膜组织中MVD高于正常组，而siRNA-HIF-1α组低于糖尿病组和siRNA-NC组(均P<0.05)； 与糖尿病组和siRNA-NC组相比，siRNA-HIF-1α组小鼠视网膜组织中HIF-1α、VEGF、NF-κB、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA相对表达量降低(均P<0.05)； 与糖尿病组和siRNA-NC组相比，siRNA-HIF-1α组小鼠视网膜组织中HIF-1α、ET-1、vWF蛋白相对表达量降低(均P<0.05)。

结论：特异性沉默HIF-1α基因可保护DR小鼠视网膜，其机制可能通过减少血管新生和血管内皮损伤有关。]]> 2019/11/21 15:09:55 88true 目的：探究羊膜泪小管支架对手术阉割雄兔干眼症的影响。

方法：将36只成年雄性兔分组，其中A组行假阉割手术，B组假植入泪小管支架，C组植入泪小管支架。分别于植入前和植入后2、4、6wk行角膜荧光素染色(FL)和泪液分泌试验(SⅠt)检查，共聚焦显微镜观察角膜神经变化。

结果：A组角膜光滑、清晰，FL染色不明显； B组角膜粗糙，角膜上皮见点染色斑点； C组角膜较假手术组更为光滑、清晰，无明显点状染色。各组植入后2、4、6wk时FL染色评分和SⅠt比较，差异有统计学意义(均P<0.05)。共聚焦显微镜下可见A组为相对直的神经丛，量多，清晰可见； B组角膜上皮细胞下神经可见弯曲，数量有所减少； C组角膜上皮下神经相对直，与正常雄兔角膜上皮下神经相比，数量略有减少。

结论：羊膜泪小管支架可显著改善阉割去势雄兔干眼症的症状和体征，具有治疗作用。]]> 2019/10/23 15:17:25 87true 目的：研究TGFBI和微管相关蛋白轻链3(LC3)在角膜营养不良患者中的表达，及氯化锂(LiCl)通过TGFBI对角膜基质成纤维细胞增殖能力的影响。

方法：用免疫组化和Western-blot方法检测角膜营养不良及正常角膜组织中TGFBI和LC3的表达。实验构建了TGFBI过表达载体并转染角膜基质成纤维细胞，分别以5、10、20、40mmol/L LiCl作用于突变型TGFBI转染的角膜基质成纤维细胞，检测不同时间(0、1、6、12h)后，TGFBI与LC3蛋白表达变化，并用CCK-8法检测细胞增殖活性。

结果：TGFBI和LC3在角膜营养不良患者角膜组织中显著高表达。TGFBI过表达抑制角膜基质成纤维细胞增殖活性(P<0.05)。LiCl抑制突变型TGFBI转染的角膜基质成纤维细胞中TGFBI和LC3蛋白表达，并增强其细胞增殖活性(P<0.05)。

结论：LiCl可以促进角膜基质成纤维细胞增殖活性和自噬，其作用机制与下调TGFBI和LC3的表达有关。]]> 2019/10/23 15:17:25 86true 目的：观察G补缀FHA域血管生成因子1(AGGF1)在糖尿病视网膜组织及高糖条件下视网膜血管内皮细胞中的表达，以及AGGF1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。

方法：将C57BL/6J小鼠随机分为对照组和糖尿病视网膜病变(DR)模型组，采用免疫组化法检测视网膜组织中AGGF1的蛋白表达。将体外培养的恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)随机分为对照组(低糖环境培养)和高糖组(培养基中加入25mmol/L D-葡萄糖)，采用免疫荧光法检测细胞中AGGF1的蛋白表达。然后将RF/6A细胞分为对照组和AGGF1处理组，分别采用CCK-8法、Transwell法和Matrigel检测细胞增殖、迁移及管腔形成。

结果：AGGF1蛋白在视网膜各层均有表达，在血管内皮细胞中也有明显表达，AGGF1在DR组视网膜中的表达(0.17±0.05)明显强于对照组(0.07±0.02)(P<0.05)。AGGF1蛋白在高糖组和对照组RF/6A细胞中均有表达，AGGF1在高糖下RF/6A细胞中的表达(0.63±0.10)明显强于对照组(0.40±0.03)(P<0.05)。处理12h，AGGF1组细胞增殖率(114.88%±0.84%)明显高于对照组(100.00%±2.17%)(P<0.05)； 处理24h，AGGF1组细胞增殖率(157.35%±1.89%)明显高于对照组(142.77%±0.50%)(P<0.05)； 处理48h，AGGF1组细胞增殖率(185.39%±1.90%)明显高于对照组(160.17%±1.33%)(P<0.05)。处理12h，AGGF1组细胞迁移数(127.00±7.00个)明显多于对照组(90.33±6.66个)(P<0.05)。处理12h，AGGF1组细胞管腔数(33.67±1.15个)明显多于对照组(15.33±3.51个)(P<0.05)； AGGF1组细胞分支总长度(8226.33±288.55μm)明显多于对照组(6463.33±938.01μm)(P<0.05)。

结论：糖尿病视网膜组织和高糖诱导的视网膜血管内皮细胞表达AGGF1蛋白明显增多，AGGF1可促进视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成，提示AGGF1可能参与了DR的视网膜新生血管形成。]]> 2020/8/19 19:18:37 85true 目的：探究d-δ-生育酚对人晶状体上皮SRA细胞生长的影响以及相关分子机制，为d-δ-生育酚用于治疗与预防后发性白内障提供实验依据。

方法：实验分为6组，即空白对照组及实验组，即5个不同浓度的d-δ-生育酚(40、60、80、100、120μmol/L)，噻唑兰(MTT)法检测各组细胞的增殖抑制率。在倒置显微镜下观察人晶状体上皮SRA细胞形态。流式细胞仪检测细胞周期，蛋白印迹法(Western blot)检测bcl-2、bax、Cyclin D1、P21蛋白表达。

结果：随着d-δ-生育酚的浓度逐渐增加，SRA细胞较对照组细胞明显减少； 作用时间的延长，SRA细胞增殖抑制率逐渐增高(P<0.05)； S期细胞所占比例与对照组比较逐渐增高，细胞被阻滞于S期(P<0.05)； d-δ-生育酚干预人晶状体上皮SRA细胞48h后，人晶状体上皮SRA细胞P21、Cyclin D1和bcl-2表达量逐渐降低，bax表达量逐渐增高(P<0.01)。

结论：d-δ-生育酚能明显抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖，阻滞细胞周期于S期。其机制可能是通过抑制bcl-2、P21、Cyclin D1的表达，诱导bax的表达实现的。]]> 2020/8/19 19:18:37 84true 目的：探讨不同波长的蓝光对人视网膜色素上皮细胞(RPE)的影响。

方法：将体外培养的ARPE-19细胞随机分为对照组、447nm蓝光组、456nm蓝光组、468nm蓝光组，对照组细胞于常规条件下培养，蓝光组细胞使用光强为200Lx的OLED蓝光背光源照射72h，利用细胞活/死染色实验、CCK-8实验、Real-time PCR等方法比较不同波长的蓝光对细胞形态、细胞活性、增殖能力及视循环功能指标和炎症指标mRNA表达的影响。

结果：蓝光照射后，ARPE-19细胞的形态发生变化，细胞融合减少。蓝光波长越短，对细胞增殖抑制作用越明显，细胞内增殖标志物Ki-67 mRNA表达越少，视循环功能指标卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)、视黄醛结合蛋白(CRALBP)、视黄醛脱氢酶(RDH)、光受体视黄醇类结合蛋白(IRBP)mRNA表达下调越明显，细胞内炎症因子单核细胞趋化因子(MCP-1)、白介素-6(IL-6)mRNA表达水平上调越明显。

结论：不同波长蓝光对RPE细胞均有损害作用，且蓝光波长越短，其损害作用越大。]]> 2020/7/22 11:15:57 *,汤志敏^*,王宇瑶,代小婵,罗敏,谷平]]> 83true 目的：研究脂联素对缺氧损伤的恒河猴脉络膜/视网膜内皮(RF/6A)细胞的保护作用及相关机制。

方法：将体外培养的RF/6A细胞随机分为对照组、缺氧损伤(CoCl₂刺激诱导24h)组和缺氧损伤+脂联素(5、50、100μmol/L脂联素预处理6h)组。采用MTT法检测细胞活力，选择合适的脂联素内皮细胞保护作用浓度，并采用Western blot检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2的表达情况，同时测定细胞内活力氧簇(ROS)的表达水平。

结果：与对照组相比，缺氧损伤组和各浓度脂联素预处理的RF/6A细胞活力均下降(均P<0.01)； 与缺氧损伤组相比，各浓度脂联素预处理后细胞活力均显著增加(均P<0.05)，其中50μmol/L脂联素是较为合适的保护作用浓度。与对照组相比，缺氧损伤组细胞活力降低，Bax蛋白表达量升高，Bcl-2蛋白表达量降低，ROS生成增加(P<0.01)； 与缺氧损伤组相比，脂联素预处理后细胞活力增加，Bax蛋白表达量降低，Bcl-2蛋白表达量增加，ROS生成减少(P<0.01)。

结论：脂联素可明显减轻缺氧造成的视网膜血管内皮细胞损伤和凋亡，其机制可能与脂联素减轻氧化应激有关。]]> 2020/7/22 11:15:57 82true 目的：分别采用摘除泪腺法和泪腺注射肉毒杆菌毒素A法诱导大鼠干眼症模型，通过对比两种干眼症模型的临床表现、病理学特点和细胞因子变化，探讨其优缺点和适用范围。

方法：健康8周龄雄性Brown Norway大鼠30只，随机分为3组：A组左眼为空白组，B组摘除大鼠左侧主泪腺，C组左侧泪腺注射肉毒杆菌毒素A。比较实验前1d，实验后3、7、14、28、42d的泪液分泌量(SⅠt)、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素钠染色评分的变化。42d观察结膜、角膜和泪腺组织病理学改变； 通过实时荧光定量PCR对白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和上皮生长因子(EGF)表达量进行检测。

结果：实验后第3d开始，B、C组均出现泪液分泌量持续性减少，与A组均有差异(P<0.05)； 实验后第7d开始，B、C组均出现BUT持续性缩短以及角膜上皮染色明显增多，与A组比较有差异(P<0.05)； 以上临床数据B、C组间比较均无差异(P>0.05)。A组角膜上皮细胞形态正常，B组及C组角膜上皮均存在不同程度表层细胞丝状分离，结膜杯状细胞数目明显减少，C组泪腺组织明显萎缩。B、C组结膜和角膜组织的EGF、TNF-α和IL-6表达量均显著增高，与A组比较均有差异(P<0.05)。B、C组间EGF和TNF-α的表达均无差异(P>0.05)； 与C组比较，B组中IL-6的表达量更高(P<0.05)。

结论：摘除泪腺和泪腺注射肉毒杆菌毒素A均可以构建稳定的水液缺乏型大鼠干眼模型，建议根据实验设计及实验目的去选择合适的动物模型。]]> 2020/7/22 11:15:57 81true 目的：探讨微小RNA-96-5p(miR-96-5p)对高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。

方法：体外培养SD大鼠视网膜血管内皮细胞(RRVEC)进行实验，将细胞分为对照组(NG)、高糖组(HG)，收集高糖诱导的细胞，分别或共同转染miR-96-5p模拟物(mimic)、无义miRNA(miR-NC)、FOXO4 siRNA(si-FOXO4)、FOXO4阴性对照序列(si-NC)、pcDNA-FOXO4、pcDNA。分别采用qRT-PCR与Western blotting检测miR-96-5p与FOXO4的表达； MTT法检测细胞增殖活性； 流式细胞仪检测细胞凋亡率； 双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p的靶基因； Western blotting检测细胞中CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspased-3蛋白表达。

结果：高糖处理后，RRVEC中miR-96-5p、CyclinD1、Bcl-2表达水平均显著降低，而FOXO4、p21、p27、Bax、cleaved-caspased-3表达水平显著升高，抑制细胞增殖活性，促进细胞凋亡； miR-96-5p过表达与抑制FOXO4表达后CyclinD1、Bcl-2表达水平显著升高，抑制p21、p27、Bax、cleaved-caspased-3表达，增强细胞增殖能力，抑制细胞凋亡； 双荧光素酶报告实验证明，FOXO4是miR-96-5p的靶基因； FOXO4过表达可逆转miR-96-5p过表达对高糖诱导的RRVEC增殖和凋亡的作用。

结论：miR-96-5p通过靶向FOXO4以抑制高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡并促进细胞增殖。]]> 2020/7/22 11:15:57 80true 目的：探讨槲皮素通过Nrf2/Keap1/ARE通路对小鼠年龄相关性黄斑变性的保护作用及机制研究。

方法：以昆明小鼠为研究对象，分为：对照组、模型组、槲皮素组； 眼底检查各组小鼠眼底是否出现黄白色似玻璃疣物质； OCT检查各组小鼠视网膜厚度； HE染色观察各组小鼠视网膜形态的改变； FFA观察各组小鼠眼底血管完整性； ELISA检测小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量变化； Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2/Keap1/ARE相关蛋白的表达情况。

结果：槲皮素能使小鼠眼底的黄白色似玻璃膜疣物质减少且视网膜厚度增加(P<0.05)，视网膜血管渗漏点明显减少； 与模型组比较，槲皮素组小鼠的a波振幅、b波振幅较模型组均明显上升(P<0.01)； 槲皮素能使小鼠视网膜结构比较清晰，部分外核层发生坏死脱落，且使小鼠血清中ROS、MDA含量降低(均P<0.05)，SOD、GSH-Px、CAT活性提高(均P<0.05)； 与模型组比较，槲皮素组小鼠视网膜细胞质中Nrf2蛋白表达上调(P<0.05)，细胞核中Nrf2蛋白表达下调(P<0.05)，小鼠视网膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表达下调(均P<0.05)。

结论：槲皮素可能通过Nrf2/Keap1/ARE通路，改善视网膜光损伤后的氧化应激状态，保护视网膜功能，对年龄相关性黄斑变性具有保护作用。]]> 2020/6/22 14:51:53 79true 目的：检测常见泪腺上皮性肿瘤中类表皮生长因子结构域 7(EGFL7)、微血管密度(MVD)、Ki67的表达，探究EGFL7与MVD、Ki67之间的相互关系。

方法：应用免疫组化法，对10例正常泪腺组织(取自因炎性假瘤、Mikulicz病等良性泪腺肿瘤切除后，标本中的部分正常泪腺组织)、20例泪腺多形性腺瘤、12例多形性腺癌、14例腺样囊性癌组织中的EGFL7蛋白、Ki67进行检测，并应用CD34标记计数MVD。

结果：EGFL7主要在泪腺多形性腺癌、腺样囊性癌的肿瘤细胞的细胞浆中表达，免疫组化染色结果显示，在正常泪腺组织中EGFL7无阳性表达，泪腺多形性腺瘤组织中EGFL7的阳性率为5%(1/20)，泪腺多形性腺癌中EGFL7的阳性表达率83%(10/12)，泪腺腺样囊性癌中EGFL7的阳性表达率为86%(12/14)，两种恶性肿瘤中的表达率明显高于多形性腺瘤和正常泪腺组织(P<0.001)。CD34可使肿瘤微血管染色呈棕黄色的单个或成簇细胞群。在泪腺多形性腺癌(32.58±14.46)及腺样囊性癌(43.43±4.60)中CD34的表达明显高于多形性腺瘤(4.20±1.19)(P<0.001)； Ki67在具有增殖活性的细胞核呈棕褐色着色，在泪腺多形性腺癌(44.83±13.68)及腺样囊性癌(26.29±8.44)中Ki67的表达明显高于多形性腺瘤(2.80±3.14)及正常组织(0.40±0.70)(P<0.001)。在两种恶性肿瘤中EGFL7的表达分别与MVD、Ki67呈明显正相关(r_s=0.897，P<0.001； r_s=0.837，P<0.001)。

结论：EGFL7在泪腺上皮性肿瘤中的表达与MVD、Ki67呈正相关性，提示EGFL7不仅在泪腺上皮性肿瘤血管生成中起重要作用，而且参与泪腺上皮性肿瘤的增殖。]]> 2020/6/22 14:51:53 78true 目的：探讨Apelin-13在缺氧诱导的视网膜Müller细胞凋亡中的作用及机制。

方法：以视网膜Müller细胞为研究对象，实验分为对照组、缺氧组和实验组，对照组细胞培养于正常环境中，缺氧组细胞培养于缺氧环境中，实验组细胞培养于缺氧环境中并以Apelin-13(1μmol/L)处理，MTT法检测细胞活力变化，结晶紫染色法观察细胞形态，免疫荧光染色法观察细胞GFAP和YAP的表达情况，TUNEL染色检测细胞凋亡并计算凋亡指数，蛋白印记实验检测p-LATS1、p-YAP、LATS1及YAP蛋白表达变化。

结果：提取分离的Müller细胞传代后贴壁生长，细胞呈长梭形、多角形、圆形等形态，细胞质丰富，细胞核呈圆形，细胞GFAP表达阳性。0.1、1、10μmol/L Apelin-13处理显著抑制缺氧诱导的Müller细胞活力下降(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比，缺氧组细胞凋亡指数明显升高(P<0.01)； 而与缺氧组相比，实验组凋亡指数明显降低(P<0.01)。对照组和缺氧组细胞p-LATS1和p-YAP蛋白表达无明显差异； 与缺氧组相比，实验组细胞p-LATS1和p-YAP蛋白表达明显降低(P<0.01)。对照组和缺氧组细胞核YAP蛋白表达无明显差异； 与缺氧组相比，实验组YAP细胞核表达明显升高(P<0.01)。

结论：Apelin-13能抵抗缺氧诱导的视网膜Müller细胞凋亡，该作用可能与调节YAP入核有关。]]> 2020/5/25 15:42:58 77true 目的：探讨玻璃体腔注射曲安奈德(TA)对光化学诱导大鼠视网膜分支静脉阻塞(BRVO)模型血管生成及Notch通路的影响。

方法：制备光化学诱导BRVO大鼠模型，随机分为BRVO模型组、玻璃体腔注射TA后1、7、21d组； 同时设置空白对照组进行对照。眼压计测量大鼠眼压状况； 眼底彩照、荧光素眼底血管造影(FFA)和光学相干断层扫描(OCT)观察大鼠眼底情况； 蛋白免疫印迹法(WB)检测大鼠视网膜血管生成相关因子血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)，Notch通路重要因子Notch1、Jagged1、DLL4蛋白表达情况。

结果：正常对照组眼底血管排列整齐、状态清晰。BRVO模型组眼底出现水肿，视网膜变白，血管排列紊乱，视盘凹消失，视网膜血管收缩。玻璃体腔注射TA后1、7、21d组水肿逐渐减轻，血管扩张和弯曲逐渐减缓，视盘凹恢复。与空白对照组相比，BRVO模型组眼压升高，损伤处视网膜、损伤250μm处视网膜厚度增加，VEGF、VEGFR2、Notch1、Jagged1蛋白表达升高，DLL4蛋白表达降低(P<0.05)。与BRVO模型组相比，玻璃体腔注射TA后 1d组损伤250μm处视网膜厚度减少，VEGFR2、Notch1、Jagged1蛋白表达降低，DLL4蛋白表达升高； 玻璃体腔注射TA后7d组损伤处视网膜、损伤250μm处视网膜厚度减少，VEGFR2、Notch1、Jagged1蛋白表达降低，DLL4蛋白表达升高； 玻璃体腔注射TA后21d组眼压降低，损伤处视网膜、损伤250 μm处视网膜厚度减少，VEGF、VEGFR2、Notch1、Jagged1蛋白表达降低，DLL4蛋白表达升高(P<0.05)。

结论：玻璃体腔注射TA可能通过调控Notch通路抑制VEGF激活从而抑制血管生成，实现对BRVO大鼠视网膜保护作用。]]> 2020/5/25 15:42:58 76true 目的：探究自噬水平变化对高糖诱导人晶状体上皮细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。

方法：人晶状体上皮细胞(HLE-B3)分为正常对照组(NC组)和高糖处理组(HG组)，分别用含5.5mmol/L葡萄糖的DMEM和添加了30mmol/L葡萄糖的上述DMEM培养12、24、48h，用Western blot检测上皮间质转化标志蛋白(E-cadherin、α-SMA)和自噬标志蛋白(LC3、Beclin 1和SQSTM1/p62)的表达变化，用划痕实验观察细胞的移行能力以明确高糖对晶状体上皮细胞自噬和EMT的影响。利用雷帕霉素调节自噬水平，将细胞分为正常对照组(NC组)、高糖处理组(HG组)，高糖处理细胞的同时添加DMSO溶剂组(DMSO组)和添加200nmol/L雷帕霉素的雷帕霉素组(RAPA组)，处理细胞24h，用Transwell实验观察细胞的移行能力，用Western blot检测EMT、自噬标志蛋白和TGF-β信号通路蛋白(TGF-β2、Smad2/3、p-Smad2/3、Snail)的表达。用细胞免疫荧光染色观察SQSTM1/p62与Smad2/3在细胞内的表达，免疫共沉淀方法检测细胞中SQSTM1/p62与Smad2/3之间的相互结合。

结果：在高糖刺激后12、24、48h，HG组细胞E-cadherin、LC3 Ⅱ/Ⅰ和Beclin 1蛋白表达逐渐降低(F=67.52、163、206，均P<0.0001)，而α-SMA、SQSTM1/p62蛋白表达增加(F=53.37、302.1，均P<0.0001)，细胞移行也较NC组增加(均P<0.001)，提示高糖刺激后细胞发生EMT，而自噬水平降低； 雷帕霉素处理后，与HG组和DMSO组相比，RAPA组LC3 Ⅱ/Ⅰ和E-cadherin蛋白表达水平增加，α-SMA、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3及Snail蛋白表达降低(均P<0.05)，TGF-β2表达无明显改变(均P>0.05)，细胞移行被抑制(均P<0.001)，提示雷帕霉素在提高自噬水平的同时下调了TGF-β信号通路分子的表达进而抑制了EMT。细胞免疫荧光染色结果显示SQSTM1/p62与Smad2/3在胞浆内存在共定位，免疫共沉淀实验证实了SQSTM1/p62与Smad2/3蛋白相互结合。

结论：高糖可刺激HLE-B3细胞发生EMT，下调细胞的自噬水平； 自噬通过SQSTM1/p62与Smad2/3相互作用，改变了TGF-β信号通路中Smad2/3的表达，实现对EMT的调节。]]> 2020/4/26 11:24:08 75true 目的：观察MicroRNA-34a对人晶状体上皮细胞系SRA01/04衰老和凋亡的影响及作用机制。

方法：qRT-PCR检测年龄相关性白内障(ARC)晶状体和透明晶状体上皮细胞中MicroRNA-34a表达水平，采用脂质体转染试剂盒将MicroRNA-34a mimics(过表达组)、MicroRNA-34a inhibitors(抑制组)和空脂质体(对照组)转染至SRA01/04细胞，qRT-PCR检测MicroRNA-34a的表达量； 采用β-半乳糖苷酸(SA-β-gal)染色检测转染后细胞的衰老情况。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测MicroRNA-34a对人晶状体细胞系SRA01/04细胞凋亡的影响； 蛋白免疫印迹检测Cdc42、Rac1蛋白的表达。

结果：透明晶状体前囊膜组织中MicroRNA-34a的表达量显著低于ARC晶状体前囊膜组织(P<0.05)； MicroRNA-34a过表达组、对照组、MicroRNA-34a抑制组SA-β-gal阳性率分别为(87.56±2.34)%、(12.22±2.74)%、(3.45±0.45)%。MicroRNA-34a过表达组明显高于对照组，而MicroRNA-34a抑制组SA-β-gal阳性率明显低于对照组(P<0.05)； MicroRNA-34a抑制组、对照组和MicroRNA-34a过表达组的细胞凋亡率分别为(5.87±1.22)%、(12.26±2.14)%、(29.45±3.12)%，MicroRNA-34a抑制组细胞凋亡率明显低于对照组，而MicroRNA-34a过表达组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)； MicroRNA-34a过表达组中Cdc42和Rac1的表达明显高于对照组(P<0.05)，MicroRNA-34a抑制组中Cdc42和Rac1的表达明显低于对照组(P<0.05)。

结论：MicroRNA-34a可能通过上调Cdc42和Rac1促进人晶状体上皮细胞衰老和凋亡。]]> 2020/4/26 11:24:08 74true 目的：探讨高糖环境下外源性趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响及其机制。

方法：将对数生长期的细胞分为对照组(葡萄糖浓度5.5mmol/L)、低糖组(葡萄糖浓度5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度30mmol/L)，分别加入CXCL9(100ng/mL)、CXCL10(10ng/mL)、CXCL11(100ng/mL)，培养24、48、72h，采用CCK-8法检测细胞增殖能力，RT-PCR检测CXCR3 mRNA的表达，免疫荧光法检测细胞增殖标志分子Ki-67阳性表达情况。

结果：CCK-8法检测结果显示，加入三种外源性趋化因子后，随着时间的延长，对照组细胞吸光度值逐渐增强； 低糖组细胞吸光度值呈现先增强后降低的趋势，48h达到高峰； 高糖组细胞吸光度值总体呈降低趋势。RT-PCR检测结果显示，加入三种外源性趋化因子后48、72h，低糖组和高糖组细胞CXCR3 mRNA表达水平均高于对照组，且均较同组24h时升高。免疫荧光检测结果显示，加入三种外源性趋化因子后72h，低糖组与高糖组细胞Ki-67荧光强度降低，高糖组变化更明显。

结论：高糖环境下外源性加入CXCL9、CXCL10、CXCL11可使HUVEC细胞活力下降并诱导CXCR3表达增强，且以外源性加入CXCL10、CXCL11配体后，CXCR3表达增幅最高，这可能成为临床干预糖尿病视网膜病变的靶点。]]> 2020/4/26 11:24:08 73true 目的：探究用全飞秒激光小切口微透镜摘除术(Smile)来源的角膜基质透镜构建组织工程角膜基质支架的可行性及最佳保存条件。

方法：从Smile来源的角膜基质透镜中分离培养人角膜基质细胞(HCFs)，采用MTT法检测人纤维蛋白粘合剂(FS)对细胞的毒性作用； 将FS粘贴双层角膜基质透镜构建的双层透镜支架分别置于不同介质(无水甘油、透明质酸钠、胎牛血清、模拟湿房环境)及不同温度(常温、4℃、-20℃)中保存，对比支架透明度及硬度。

结果：MTT检测结果显示，FS作用0～72h，HCFs与正常培养细胞具有相似的增殖趋势，细胞毒性评级为0～1级，相对生存率均超过90%。FS粘贴的双层基质透镜支架表面平整、贴合紧密、透明度良好且硬度适宜。4℃保存14d后，无水甘油中9枚支架复水后均未出现开裂情况，透明度良好； 透明质酸钠中9枚支架中3枚出现开裂，剩余6枚完整，透明度尚可； 模拟湿房环境中9枚支架均无开裂现象，但皱缩严重； 胎牛血清中9枚支架全部开裂，水肿严重。保存14d后，常温无水甘油中的15枚支架其中2枚保持无色透明，5枚轻微变黄但透明度尚可，8枚严重变黄且透明度明显降低； 4℃无水甘油中的15枚支架其中5枚无色透明，10枚轻微变黄且透明度良好； -20℃无水甘油中的15枚支架均保持无色透明状态，未出现变黄情况。

结论：FS是一种安全无毒的生物胶，可利用FS粘贴Smile来源的角膜基质透镜构建稳定性好、透明度高且硬度适宜的角膜基质支架，且-20℃无水甘油是角膜基质透镜支架的较佳保存条件。]]> 2020/3/25 14:45:37 72true 方法：建立TTase基因敲除小鼠模型并进行基因型鉴定。裂隙灯观察TTase基因敲除型和野生型小鼠白内障随年龄的发生情况。检测小鼠晶状体中谷胱甘肽(GSH)含量。Western blot检测晶状体中氧化产物蛋白质二硫化物(PSSG)的变化。免疫共沉淀法鉴定形成PSSG的蛋白质。观察纯化的重组人晶状体TTase(RHLT)对PSSG的脱硫醇作用。

结果：TTase基因敲除型小鼠和野生型小鼠白内障的发生均随年龄而增加，且主要表现为核性白内障。在TTase基因敲除型小鼠中，白内障最早从4月龄开始发生，9月龄时最为显著； 野生型小鼠白内障最早从9月龄开始发生，12月龄时最为显著。两种基因型小鼠晶状体中GSH含量均随年龄增加而下降，9月龄TTase基因敲除型小鼠晶状体中GSH下降更为显著，且PSSG的表达明显高于野生型，主要表现为高分子聚合物。免疫共沉淀反应证实形成PSSG的蛋白质包含肌动蛋白(actin)和三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)，这种积聚的PSSG可被GSH还原，且与纯化的RHLT反应更有效。

结论：TTase基因敲除可以加速小鼠年龄相关性白内障的发生，这与晶状体中PSSG的积聚相关，且形成的PSSG可被TTase脱硫醇，证实TTase在防止年龄相关性白内障的发生中发挥重要作用。]]> 2020/3/13 19:43:56 71true 方法：将36只雄兔随机分为：空白组、模型组、密蒙花滴眼液低浓度组(1mg/mL)、中浓度组(1.5mg/mL)、高浓度组(3mg/mL)、睾酮组。除空白组外各组均行睾丸及附睾切除建立干眼动物模型，造模成功后，空白组和模型组不予以处理，密蒙花滴眼液低浓度组(1mg/mL)、中浓度组(1.5mg/mL)、高浓度组(3mg/mL)给予密蒙花不同浓度滴眼液，3次/d，睾酮组按0.5mL/kg剂量在大腿肌肉处注射丙酸睾酮，每3d 1次，各组分别于造模前和用药4wk后在全身麻醉下检测荧光素染色、SchirmerⅠ试验(SⅠt)和泪膜破裂时间(BUT)。用药4wk后处死兔子，取其双眼球结膜组织，采用免疫组织化学染色法检测结膜中IL-1β、MUC5AC、P38MAPK的表达。

结果：密蒙花滴眼液低浓度组、中浓度组、高浓度组用药4wk后，SⅠt值明显高于模型组，BUT值明显长于模型组，角膜荧光素染色阳性较模型组有明显改善(均P<0.01)。密蒙花滴眼液低浓度组、中浓度组、高浓度组结膜IL-1β、P38MAPK的阳性表达低于模型组，MUC5AC的表达高于模型组(P<0.01)，密蒙花滴眼液高浓度组优于低浓度、中浓度组。

结论：密蒙花滴眼液具有类雄激素效果，对于去势雄兔干眼可以下调干眼结膜组织中IL-1β、P38MAPK的表达，增加MUC5AC的表达，从而减少干眼结膜组织的炎症浸润，维持泪膜稳定性，但其作用弱于雄激素。密蒙花滴眼液中、高浓度组对于干眼治疗作用强于低浓度组，高浓度组优于中浓度组。]]> 2020/3/13 19:43:56 70true 目的：探讨高钙状态下衰老标记蛋白30(SMP30)低表达对人晶状体上皮细胞(LECs)系SRA01/04增殖、氧化应激的影响。

方法：设计3条干扰SMP30靶向基因RGN表达的RNAi序列(KD1～3)，以空载序列为阴性对照组(NCKD)，构建慢病毒载体并感染SRA01/04细胞，同时以未感染的SRA01/04细胞作空白对照组(CON)。RT-PCR筛选干扰效率最高的慢病毒载体用于后续实验。采用含15mmol/L CaCl₂的完全培养基处理细胞24h模拟发生白内障时人LECs的病理状态，通过BrdU-Elisa法检测细胞增殖活力，并检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及氧化型谷胱甘肽/总谷胱甘肽(GSSG/T-GSH)水平以评估细胞氧化应激水平。

结果：成功构建KD1～3及NCKD慢病毒载体，感染SRA01/04细胞效率约80%。三种慢病毒载体(KD1～3)敲减效率分别为93%、60%、74%，故选择KD1慢病毒载体进行后续实验。高钙状态下，KD1组细胞相对增殖活力和SOD活力\〖(2.42±0.08)和(11.69±0.52U/mg)\〗均低于NCKD组\〖(2.95±0.08)和(31.10±2.24U/mg)\〗和CON组\〖(2.96±0.25)和(26.33±1.04U/mg)\〗，GSSG/T-GSH比值(70.80±2.34)高于NCKD组(15.93±3.47)和CON组(20.05±2.45)(均P<0.05)，而NCKD组与CON组上述指标均无差异(P>0.05)。

结论：高钙状态培养下，RGN-RNAi慢病毒载体介导的SMP30低表达SRA01/04细胞增殖活力及抗氧化应激能力减弱，提示SMP30可能具有调控细胞增殖、抗氧化应激的保护作用。]]> 2020/1/19 11:26:19 69true 目的：检测丰富环境干预对单眼剥夺成年弱视小鼠视皮质中IGF-1及其受体的表达变化，初步探讨其对成年弱视小鼠初级视皮质突触可塑性的影响及分子机制。

方法：将正常新生昆明小鼠随机分为正常组(Nor)，单眼剥夺+标准环境组(MD+SE)，单眼剥夺+丰富环境组(MD+EE)，单眼剥夺+氟西汀组(MD+FLX)。在小鼠21日龄时构建单眼剥夺模型，确定模型建立成功后，每组选取18只小鼠按照预先分组放置在标准环境或丰富环境中饲养4wk，单眼剥夺+氟西汀组小鼠饮水中加入氟西汀。通过前爪触地反射实验检测小鼠视敏度，闪光视觉诱发电位检测客观视功能； 小鼠处死后取材，使用电镜检测视皮层神经元的突触间隙宽度、突触活性区长度及突触后致密物厚度，Western Blot法检测视皮层中IGF-1、IGF-1R及IGFBP5蛋白表达。

结果：(1)视敏度检测结果：MD+SE组小鼠前爪触地成功率明显低于Nor组(P<0.001)； MD+EE组及MD+FLX组小鼠前爪触地成功率明显高于MD+SE组(均P<0.001)； 与MD+FLX组比较，MD+EE组小鼠前爪触地成功率无差异(P=0.816)。(2)闪光视觉诱发电位检测结果：与Nor组比较，MD+SE组小鼠剥夺眼闪光视觉诱发电位P2波潜伏期延长、波幅降低(均P<0.01)； 丰富环境饲养后，MD+EE组较MD+SE组小鼠剥夺眼闪光视觉诱发电位P2波潜伏期缩短、波幅增加(均P<0.01)； 与MD+FLX组比较，MD+EE组小鼠剥夺眼闪光视觉诱发电位P2波的潜伏期和波幅变化无差异(P>0.05)。(3)电镜检测视皮层神经细胞突触超微结构：与Nor组比较，MD+SE组小鼠剥夺眼对侧视皮层神经细胞突触间隙增宽(P<0.01)，突触活性区长度缩短(P<0.01)，突触后致密物厚度变薄(P<0.01)； 丰富环境饲养后，MD+EE组小鼠较MD+SE组突触间隙变窄(P=0.0035)，突触活性区长度延长(P<0.01)，突触后致密物厚度增加(P<0.01)，MD+EE组突触超微结构各项指标较MD+FLX组比较无差异(P>0.05)。(4)Western blot检测视皮层中IGF-1、IGF-1R及IGFBP5蛋白表达：MD+SE组小鼠IGF-1及IGF-1R蛋白表达明显低于Nor组(均P<0.01)； MD+EE组小鼠IGF-1及IGF蛋白的表达明显高于MD+SE组(均P<0.01)，然而仍显著低于Nor组(均P<0.01)。各组间小鼠IGFBP5蛋白表达异常无差异(P>0.05)。

结论：丰富环境能重新激活成年单眼剥夺弱视小鼠视皮质可塑性，改善弱视小鼠视觉功能，其机制可能与调控IGF-1及受体的表达有关。]]> 2020/1/19 11:26:19 68true 目的：探讨灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激的影响。

方法：常规培养RPE细胞，分为对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30mmol/L)、灯盏花素低浓度组(30mmol/L葡萄糖+1μmol/L灯盏花素)和灯盏花素高浓度组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/L灯盏花素)。细胞划痕实验观察RPE细胞的迁移性，CCK-8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平变化，Hoechst染色法观察凋亡细胞比例，Western blot分析各组Bcl-2和Bax的变化。

结果：细胞划痕实验结果显示，灯盏花素低浓度组和灯盏花素高浓度组RPE细胞形态较高糖组改善，细胞迁移性较高糖组增加； CCK-8结果显示，用1、10μmol/L浓度的灯盏花素处理后，RPE细胞存活率分别提高到61.06%±5.59%和79.81%±7.04%，与高糖组(40.63%±4.72%)比较有差异(P<0.05)； 2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H₂DCFDA)荧光探针染色结果显示，灯盏花素抑制了RPE细胞内ROS水平； Hoechst染色法显示，1、10μmol/L灯盏花素处理后发生凋亡的RPE细胞数量逐渐减少； Western blot结果显示，灯盏花素增强了Bcl-2蛋白的表达，降低了Bax蛋白的表达。

结论：灯盏花素可以抑制高糖诱导的RPE细胞氧化损伤和凋亡的发生，为糖尿病视网膜病变的治疗靶点研究提供了理论支持。]]> 2020/1/19 11:26:19 67true 目的：探讨缺氧条件下骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管内皮细胞迁移和管腔形成的影响。

方法：制备3种细胞的条件培养基(CM)，分别为对照组(血管内皮细胞培养基，VCM)、常氧条件下BMSCs的CM组(NCM)和缺氧条件下BMSCs的CM组(HCM)。分别用以上3种CM培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)和猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞(RF/6A)6～24h后，观察血管内皮细胞迁移和管腔形成的能力。

结果：相对于对照组和常氧组的CM，缺氧组即HCM作用下的血管内皮细胞的迁移数目和成管数量(包括成管总长度和分支数)均显著增加(均P<0.05)。在RF/6A细胞，对照组VCM、常氧组NCM和缺氧组HCM作用24h后，迁移的细胞数分别为19.00±3.61、32.33±3.06、114.00±11.53个(F=153.3，P<0.001)； 而HUVECs的3组细胞迁移个数则分别是76.00±9.54、122.00±18.68、307.70±25.97个(F=121.5，P<0.001)。RF/6A细胞经各组CM孵育6h后，成管数目分别为12.00±3.00、37.00±4.58、51.00±3.61个(F=81.7，P<0.0001)； 3组HUVECs细胞管腔形成的结果类似。

结论：缺氧条件下BMSCs可促进血管内皮细胞的迁移和成管能力，这种机制可能在视网膜新生血管中发挥作用。]]> 2019/12/20 14:53:54 66true 目的：探讨小檗碱对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖能力的影响及可能的作用机制。

方法：通过对手术获取的翼状胬肉组织进行培养，获取翼状胬肉成纤维细胞。采用不同终浓度(0、20、40、80μmol/L)小檗碱对细胞进行诱导，检测小檗碱诱导后翼状胬肉成纤维细胞凋亡水平、线粒体膜电位和凋亡相关因子mRNA与蛋白表达水平变化。

结果：小檗碱能够以剂量依赖的方式提高体外培养翼状胬肉成纤维细胞线粒体去极化水平、细胞凋亡比率、促凋亡基因Bax和Bad mRNA与蛋白的表达水平，降低Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。

结论：小檗碱可能通过提高体外培养翼状胬肉细胞线粒体去极化水平诱导胬肉细胞发生凋亡。]]> 2019/12/20 14:53:54 65true 目的：小鼠通过悬尾来模拟失重状态下体液头向重分布，然后观察视网膜电图(ERG)和视网膜微循环的变化。

方法：正常成年雄性C57BL/6J小鼠随机分到3个实验组和3个对照组，最终每组6只。具体分组如下：实验1组(尾悬15d)，实验2组(尾悬30d)，实验3组(悬吊30d后恢复体位30d)； 对照1组(正常饲养15d)，对照2组(正常饲养30d)，对照3组(正常饲养60d)。时间满足后马上检测暗适应闪光ERG，记录混合反应和振荡电位(OPs)，并进行荧光素眼底血管造影(FFA)。然后提取视网膜组织，用免疫组化法检测感光细胞视色素或视蛋白的表达，用TUNEL试剂盒检测视网膜组织细胞的凋亡情况。

结果：悬吊15d组，暗适应ERG的混合反应，b波较大而OPs振幅明显降低，后者第二个子波(O₂)幅值197±33μV，15d未悬吊组336±47μV(t=-5.938，P<0.001)。悬吊30d组，小鼠ERG恢复，O₂幅值264±39μV，与30d未悬吊组308±41μV无差异(t=-1.887，P>0.05)。悬吊15d组FFA，视网膜微血管较对照组更密集，呈迂曲扩张的表现，其他实验组基本正常。各实验组感光细胞视色素或视蛋白的表达未见明显异常，视网膜未见凋亡阳性细胞。

结论：模拟失重状态下体液头向重分布，短期内小鼠ERG和视网膜微循环可能受到影响，但未对视网膜产生明显的永久性损伤。]]> 2019/12/20 14:53:54 64true 目的：探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间。

方法：体外培养原代兔CSCs，并行细胞免疫组化鉴定，利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染兔CSCs，倒置荧光显微镜下观察转染后细胞生长状态及荧光强度，体外动物实验，随机分为2组，实验组行LV-EGFP标记的兔CSCs细胞悬液角膜基质注射，对照组等量生理盐水角膜基质注射，转染后1wk，1mo取材冰冻切片观察移植的CSCs荧光，石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态。

结果：LV-EGFP转染兔CSCs在倒置荧光显微镜下24h后可见少量荧光，96h和110h荧光较强，转染后的CSCs与正常CSCs细胞形态无明显差异； 转染后1wk，1mo实验组中角膜基质层中可见绿色荧光，对照组中无绿色荧光； 石蜡切片1wk实验组见明显上皮细胞增生及角膜轻微水肿，少量炎症细胞浸润，转染后1mo实验组上皮细胞增生减弱，未见角膜层水肿； 对照组1wk，1mo均未见明显异常。

结论：LV-EGFP标记的兔CSCs行体外角膜基质移植，可在角膜中至少存活1mo，且与邻近组织相容性较好。]]> 2019/12/20 14:53:54 63true 目的：观察体外高糖诱导环境，对人视网膜色素上皮细胞中内脏脂肪素(Visfatin)的表达影响，以及研究高糖环境下重楼皂苷I(Polyphyllin I)对Visfatin表达情况的影响。

方法：人视网膜色素上皮细胞培养后分3组，正常对照组、高糖组和高糖加Polyphyllin I药物干预组，干预培养12h后进行检测。正常对照组：5.5mmol/L葡萄糖浓度常规培养； 高糖组：将25mmol/L的高糖加入培养基建立模型； 高糖加Polyphyllin I药物干预组：高糖25mmol/L和3μg/L Polyphyllin I药物加入培养基。免疫荧光染色法观察人视网膜色素上皮细胞中Visfatin和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达； 实时荧光定量PCR检测上皮细胞中Visfatin和VEGF mRNA的表达； Western-blot法检测上皮细胞中Visfatin和VEGF蛋白的表达。

结果：免疫荧光检测发现Visfatin和VEGF在正常组视网膜色素上皮细胞中表达呈弱阳性。但在高糖组视网膜色素上皮中可见Visfatin和VEGF呈强阳性表达。药物干预组中Visfatin和VEGF荧光较高糖组明显减弱。RT-PCR显示高糖组Visfatin mRNA表达水平较正常组和干预组明显增高(t=4.24、3.89，均P<0.05)。高糖组VEGF mRNA表达水平较正常组和干预组明显增高(t=3.53、2.57，均P<0.05)。Western-blot结果示Visfatin蛋白水平，高葡萄糖组表达量显著高于正常对照组(t=3.62，P=0.01)，干预组表达低于高糖组(t=3.79，P<0.01)。

结论：高糖环境可刺激视网膜色素上皮细胞中Visfatin的表达增加，Polyphyllin I可抑制高糖环境下视网膜色素上皮细胞中Visfatin的表达，可能为治疗糖尿病视网膜病变提供新的思路。]]> 2020/11/19 16:34:45 62true 目的：探讨骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植对大鼠青光眼模型的神经保护作用。

方法：提取大鼠原代骨髓间充质干细胞并进行鉴定； Lewis大鼠分别随机分为3组：对照组、青光眼模型组和骨髓间充质干细胞组，并制作青光眼大鼠模型：左眼为实验眼(青光眼)，右眼为对照眼，并进行鉴定； 然后进行骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植； HE染色观察视网膜组织形态； 免疫荧光法检测视网膜神经节细胞数量； TUNEL染色观察视网膜神经节细胞凋亡情况； Western blot检测视网膜组织中IGF1和BDNF蛋白表达情况。

结果：大鼠实验眼的眼内压均明显高于对照眼(P<0.01)，表明青光眼大鼠模型均建造成功； 青光眼模型组大鼠视网膜神经纤维排列不整齐，视网膜神经节细胞数量和视网膜厚度显著低于对照组(P<0.01)，视网膜神经节细胞凋亡数量显著高于对照组(P<0.001)； 骨髓间充质干细胞组大鼠视网膜神经纤维细胞排列较整齐，视网膜神经节细胞数量和视网膜厚度明显高于青光眼模型组(P<0.05)，视网膜神经节细胞凋亡数量明显低于青光眼模型组(P<0.05)； 青光眼模型组大鼠视网膜中IGF1和BDNF蛋白表达量明显低于对照组(P<0.01)，骨髓间充质干细胞组大鼠的视网膜中IGF1和BDNF蛋白表达量高于青光眼模型组(P<0.05)。

结论：骨髓间充质干细胞玻璃体腔移植能改善大鼠青光眼，可以保护视网膜神经节细胞。]]> 2020/10/22 16:19:25 61true 目的：研究沉默胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)增殖和凋亡的影响及其机制。

方法：采用qRT-PCR法检测高糖(30mmol/mL)和低糖(5mmol/mL)处理的hRMECs中GFAP的表达。通过慢病毒介导法建立GFAP基因稳定沉默的高糖诱导的hRMECs细胞模型，用SRI-011381(TGF-β信号通路特异性激活剂)、二甲基亚砜(DMSO)处理该细胞模型，采用Western blot法检测细胞中GFAP、转化生长因子-β1(TGF-β1)、转录激活因子2(Smad2)、Smad3蛋白的表达，并分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。

结果：高糖处理的hRMECs中GFAP表达水平显著升高。通过慢病毒介导法可成功构建GFAP基因沉默的高糖诱导的hRMECs细胞模型，且沉默GFAP后，细胞的增殖能力明显提高，凋亡率明显抑制，TGF-β信号通路关键基因TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表达均明显抑制，而激活TGF-β信号通路可逆转沉默GFAP对高糖诱导的hRMECs细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。

结论：沉默GFAP基因可促进高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖，抑制细胞凋亡，其机制可能与TGF-β信号通路失活相关。]]> 2020/10/22 16:19:25 60true 目的：观察聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响。

方法：观察不同浓度聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响，取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为：对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组。观察不同消毒时间聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响，取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为：对照组、短时间组、中等时间组和长时间组。采用ELISA检测各组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量，采用倒置显微镜、CCK-8法检测各组细胞活性，采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。

结果：聚维酮碘浓度越高，角膜上皮细胞的MDA含量越高，SOD含量越低，细胞活性越低，凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈浓度依赖性，组间有差异(均P<0.01)。聚维酮碘消毒时间越长，角膜上皮细胞的MDA含量越高，SOD含量越低，细胞活性越低，凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈时间依赖性，组间有差异(均P<0.01)。

结论：聚维酮碘对角膜上皮细胞有氧化损伤作用，损伤呈浓度和时间依赖性。]]> 2020/9/17 16:45:29 59true 目的：观察内质网应激(ERS)在氧化低密度脂蛋白(OxLDL)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡中的作用。

方法：人RPE细胞系ARPE19采用低糖DMEM培养基和10%胎牛血清进行常规培养。实验分为3组：对照组(常规培养的ARPE19)、OxLDL组(加入5、10、25、50、100μg/mL OxLDL)和LDL组(加入5、10、25、50、100μg/mL LDL)培养24h。分别采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测各组细胞活性，流式细胞仪检测凋亡比例，蛋白质印迹(Western blotting)检测ERS相关蛋白及凋亡相关酶的表达。激光共聚焦显微镜观察人RPE细胞吞噬红色荧光探针Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-OxLDL)情况。

结果：CCK8结果显示：对照组细胞存活率为(100±5.637)%，加入5、10、25、50、100μg/mL OxLDL后细胞活力分别为(105.298±9.395)%、(97.106±5.417)%、(77.015±4.055)%、(67.613±3.853)%和(43.872±9.532)%(P<0.05)； 加入5、10、25、50、100μg/mL LDL后细胞活力分别为(97.55±6.217)%、(99.640±3.586)%、(90.495±2.786)%、(83.552±9.171)%和(90.910±1.429)%(P>0.05)。流式细胞仪结果显示浓度为25μg/mL的OxLDL会明显诱导细胞凋亡，对照组、OxLDL组(25μg/mL)和LDL(25μg/mL)组凋亡率分别是(5.271±0.519)%、(41.23±1.686)%和(13.07±2.579)%(P<0.01)； Western blotting结果显示OxLDL(25μg/mL)组的ERS相关蛋白和凋亡相关酶的表达量明显高于对照组与LDL组(Caspase-12：F=50.53， P<0.05； GRP78：F=55.60， P<0.05； CHOP：F=38.22， P<0.05； XBP-1：F=53.94， P<0.05； ATF6：F=20.01， P<0.05)，而LDL组(25μg/mL)和对照组之间无差异(P>0.05)。

结论：ERS参与了OxLDL诱导的人RPE细胞凋亡，调控ERS可能抑制人RPE细胞凋亡，从而治疗RPE细胞凋亡相关疾病。]]> 2020/9/17 16:45:29 58true 目的：研究水蛭提取液对人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞的抑制作用。

方法：采用不同浓度水蛭提取液(0.02、0.04、0.08、0.16U/mL)作用于体外培养的WERI-RB-1细胞0、24、48、72h，经CCK-8法筛选最佳药物干预浓度和时间进行后续实验。将体外培养的WERI-RB-1细胞分为对照组(正常培养基培养)和实验组(含水蛭提取液培养基培养)，采用流式细胞仪检测药物对细胞周期和细胞凋亡的影响，Transwell侵袭实验检测药物对细胞侵袭能力的影响。

结果：根据CCK-8法检测结果选择0.04、0.08U/mL水蛭提取液作用48h为最佳干预条件进行实验。水蛭提取液干预的细胞主要阻滞在G2/M期，其中0.04、0.08U/mL实验组处于G2/M期的阳性细胞率分别为(12.59±5.36)%、(14.79±4.12)%，均明显高于对照组\〖(3.00±2.32)%，P<0.01\〗。水蛭提取液可诱导细胞凋亡，其中0.04、0.08U/mL实验组细胞凋亡率分别(37.91±3.44)%、(33.05±2.25)%，均明显高于对照组\〖(4.64±2.56)%，P<0.01\〗。Transwell侵袭实验检测结果显示，实验组Transwell小室下细胞数明显少于对照组，表明水蛭提取液能够抑制细胞侵袭。

结论：水蛭提取液在体外实验中能够抑制人视网膜母细胞瘤细胞的增殖、侵袭，并诱导细胞凋亡。]]> 2020/9/17 16:45:29 57true 目的：观察高糖培养的人晶状体上皮细胞在创伤刺激后Cyclin D1的表达情况。

方法：采用MTT法观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEB3)作用24h后细胞增殖活性的影响，确定最适葡萄糖作用浓度。将HLEB3细胞分为高糖预处理组(高糖培养基预处理24h后再更换高糖培养基培养)和非高糖预处理组(正常培养基培养24h后再更换高糖培养基培养)，根据更换高糖培养基时是否进行划伤处理将细胞分为对照组和划伤组，分别采用qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞创伤后不同时间点Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达情况。

结果：一定浓度范围的葡萄糖能够增强细胞增殖活性，25.5mmol/L葡萄糖处理时细胞活性最强。高糖预处理细胞Cyclin D1表达在一定时间范围内呈时间依赖性表达下调； 非高糖预处理细胞Cyclin D1表达呈不规律性，在12h和48h处表达上调； 划伤处理可在一定程度上刺激细胞Cyclin D1表达上调。

结论：葡萄糖对人晶状体上皮细胞活性及Cyclin D1表达的影响呈现不规律性，创伤处理可在一定程度上上调细胞Cyclin D1的表达。]]> 2020/9/17 16:45:30 56true 方法：采用波形蛋白(Vimentin)和角蛋白(CK)免疫细胞化学染色鉴定原代培养的HPFs。分别设置对照组、DOX低、中、高浓度(50、100、200mg/L)组，应用CCK-8法和划痕实验检测各组HPFs活力及迁移能力，利用细胞三维培养及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察各组细胞VM生成情况，并通过Western blot法检测各组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9及血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。

结果：免疫细胞化学染色结果显示，细胞呈梭形且Vimentin阳性表达，CK阴性表达，符合成纤维细胞特性。与对照组相比，DOX组细胞活力、迁移能力、VM密度及MMP-9和VEGF蛋白的表达均显著降低(P<0.05)，DOX各浓度组组间相比均有差异(P<0.05)。相关性分析提示HPFs形成的VM密度与MMP-9和VEGF蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.949、0.960，均P<0.05)。

结论：DOX可通过减少MMP-9及VEGF的表达抑制HPFs的活力及迁移能力，减少VM的形成，提示MMP-9和VEGF可能是翼状胬肉形成VM的分子机制。]]> 2021/8/18 21:32:58 55true 方法：将54只豚鼠随机分为正常对照组(NC组)、透镜诱导组(LIM组)和电针+透镜诱导组(LIM+EA组)。NC组正常饲养，不干预； LIM组和LIM+EA组右眼配戴-6.00D透镜片，建立近视模型。造模2、4wk测量各组豚鼠屈光度、眼轴和脉络膜毛细血管密度，实时荧光定量PCR(q-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组化检测各组脉络膜ET-1、ETAR和ETBR mRNA及蛋白表达水平。

结果：造模2、4wk后，与NC组相比，LIM组和LIM+EA组近视屈光度和眼轴均增加(均P<0.001)； LIM+EA组与LIM组相比，屈光度和眼轴均减小(均P<0.05)。造模2、4wk后，与NC组相比，LIM组脉络膜毛细血管密度均降低(P<0.001)，脉络膜ET-1、ETAR及ETBR mRNA和蛋白水平均增加(均P<0.05)； 而LIM+EA组与LIM组相比，脉络膜毛细血管密度升高(P<0.01)，脉络膜ET-1、ETAR及ETBR mRNA和蛋白水平均降低。

结论：在透镜诱导型近视豚鼠中，随着屈光度和眼轴的增长脉络膜血流减少，而电针可能通过神经调控改善了脉络膜的血流，影响了血管剪切力，下调ET-1及其受体含量以延缓近视的发生发展。]]> 2021/7/21 22:23:09 54true 目的：探讨miR-373靶向血管内皮生长因子A(VEGFA)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠的作用。

方法：将40只大鼠随机分为对照组(n=10)和DR组(n=30)，造模成功后的DR组大鼠分为模型组(n=10)、miR-373 agomir组(n=10)、agomir-NC组(n=10)，右眼玻璃体腔分别注射200μL生理盐水、miR-373 agomir(200nmol)、agomir-NC(200nmol)，每周1次，共处理12wk。通过RT-qPCR检测各组大鼠视网膜组织中miR-373和VEGFA mRNA表达水平，双荧光素酶实验验证miR-373与VEGFA靶向关系，Western-blot检测各组大鼠视网膜组织中VEGFA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化-丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)蛋白表达水平。

结果：与对照组比，模型组和agomir-NC组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著下降，VEGFA mRNA、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。与agomir-NC组比，miR-373 agomir组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著升高，VEGFA mRNA及蛋白、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著下降(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实VEGFA是miR-373的靶基因。

结论：miR-373通过靶向VEGFA抑制糖尿病视网膜病变，其机制可能与miR-373抑制PI3K/AKT信号通路有关。]]> 2021/7/21 22:23:09 53true 目的：探讨在角膜碱烧伤所致高渗和炎症环境中，左旋肉碱(LC)对角膜上皮修复的作用及其调控的分子机制。

方法：将96只健康C57/6J小鼠随机分为空白对照组、磷酸缓冲盐溶液(PBS)组和LC组，空白对照组不做任何处理、LC组及PBS组制备急性碱烧伤模型。自模型制作前1d，LC组给予60mmol/L LC滴眼液，PBS组给予磷酸缓冲盐溶液连续每天点眼，每天6次。建模后0h，3、7d裂隙灯显微镜下荧光素钠染色观察角膜上皮修复情况。在第3d，取眼球进行冰冻切片免疫荧光检测Ki-67、IL-1β蛋白表达情况； 提取角膜上皮全蛋白进行Western blot检测P63、NLRP3、Caspase-1的表达及STAT3的活化水平。

结果：角膜荧光素钠染色结果显示在碱烧伤后3、7d时PBS组与LC组比，残留角膜上皮缺损面积占原始缺损面积的百分比分别为(29.38±6.83)% vs(17.78±4.11)%、(14.23±4.51)% vs(4.10±2.10)%(P<0.01)。LC组比PBS组角膜上皮修复快。造模后3d，与空白对照组比，碱烧伤处理的各组小鼠角膜上皮中焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1表达上调，P63表达降低，p-STAT3/STAT3水平升高，除cleaved Caspase-1空白对照组vs LC组，差异均有意义。与PBS组比，LC组的NLRP3、pro Caspase-1、cleaved Caspase-1蛋白表达降低，P63表达量上调，p-STAT3/STAT3水平升高，差异均有意义。免疫荧光显示，碱烧伤后3d，PBS组和LC组与空白对照组比IL-1β、Ki-67表达上调。与PBS组比，LC组Ki-67蛋白表达上调，IL-1β表达降低。

结论：LC可通过抑制细胞焦亡信号通路，促进STAT3信号通路的活化，促使小鼠角膜上皮干/祖细胞增生，进而促进碱烧伤后角膜上皮的修复。]]> 2021/6/24 15:27:59 52true 2021/4/21 21:12:00 51true 2021/3/25 20:05:41 50true 2021/3/25 20:05:41 49true 目的：探讨蒲黄提取物对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠的保护作用。

方法：将50只SPF级大鼠随机分为对照组：正常饲养； DR组：给予等量的生理盐水灌胃； 实验A组：蒲黄提取物50mg/(kg·d)； 实验B组：蒲黄提取物100mg/(kg·d)； 实验C组：蒲黄提取物200mg/(kg·d)。测定各组大鼠空腹血糖； HE染色观察各组大鼠视网膜病理学变化； ELISA检测各组大鼠血清中IL-6、TNF-α含量； Western blot检测视网膜组织VEGF、VEGFR2和Ang-1蛋白表达水平； qRT-PCR法检测视网膜组织VEGF、VEGFR2和Ang-1 mRNA表达水平。

结果：与对照组相比，DR组和各实验组大鼠空腹血糖、血清中IL-6、TNF-α含量及视网膜组织VEGF、VEGFR2和Ang-1的蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)； 与DR组相比，各实验组大鼠空腹血糖均有下降，且实验B组和实验C组大鼠空腹血糖显著降低(P<0.05)； 此外，实验B组和实验C组大鼠血清中IL-6、TNF-α含量、视网膜组织VEGF、VEGFR2和Ang-1的蛋白及mRNA表达水平与DR组相比均降低(P<0.05)。HE结果发现，DR组大鼠视网膜光感受器细胞层结构被明显破坏，细胞出现水肿、间隙增宽； 实验B组和实验C组大鼠视网膜组织病理学均有不同程度改善。

结论：蒲黄提取物可下调DR大鼠炎症水平及VEGF、VEGFR2和Ang-1的表达，从而改善视网膜组织病变。]]> 2021/2/24 14:14:51 48true 目的：建立缺氧诱导内皮细胞的内皮-间质转化(EndoMT)模型，探讨吡非尼酮(PFD)在视网膜下纤维瘢痕形成过程中的抗纤维化作用及机制。

方法：原代培养人脐静脉内皮细胞，鉴定后取4～7代用于实验。CoCl₂诱导细胞缺氧建立纤维化模型。CCK-8法检测细胞增殖率，筛选药物浓度。将细胞分为对照组(无血清培养基培养)、CoCl₂(200μmol/L)模型组、CoCl₂+低浓度(0.3mg/mL)PFD组、CoCl₂+高浓度(0.6mg/mL)PFD组。Western blot法检测细胞CD31、VE-cadherin、α-SMA、FSP1、p-p38和p38的蛋白表达水平。CD31/α-SMA免疫荧光双染法观察蛋白表达的变化。划痕实验观察细胞迁移能力的改变。q-PCR法检测TGF-β1、SNAI1 mRNA转录水平。

结果：与CoCl₂模型组相比，PFD能明显提高缺氧细胞的增殖率，抑制细胞的迁移能力(均P<0.05)； PFD组细胞标志蛋白CD31、VE-cadherin表达增加，α-SMA、FSP1表达降低(均P<0.05)。免疫荧光检测显示PFD可明显抑制α-SMA和增加CD31的蛋白表达(P<0.05)。内皮细胞EndoMT过程中，p38总蛋白表达不变(P>0.05)，但p-p38磷酸化蛋白表达增加、TGF-β1和SNAI mRNA转录水平增高的现象可明显被PFD抑制(均P<0.05)。高低浓度PFD组上述各现象无明显差异。

结论：PFD可以抑制内皮细胞纤维化的发生，TGF-β/p38 MAPK通路可能是PFD调控EndoMT过程的机制之一，为视网膜下纤维化的治疗提供了新思路。]]> 2021/1/19 16:56:23 47true 目的：探讨复方血栓通胶囊对高海拔视网膜病变大鼠的保护作用及其作用机制。

方法：雄性SD大鼠24只随机分为6组，分别饲养于模拟高海拔5 000m的高原舱内2、4、6、10、24、72h，观察各组大鼠视网膜组织形态，HIF-1α的表达和入舱前后大鼠视网膜电图中暗适应最大反应b波振幅的变化； 雄性SD大鼠24只随机分为4组，分别予安慰剂，大花红景天口服液，肌苷片及复方血栓通胶囊灌胃喂药7d后，饲养于模拟海拔为5 000m模拟舱内10h，观察各组大鼠视网膜组织形态，HIF-1α的表达和入舱前后大鼠视网膜电图中暗适应最大反应b波振幅的变化。

结果：高海拔视网膜病变SD大鼠模型中，结果显示随着各实验时间的增加，神经节细胞层细胞肿胀明显，HIF-1α在神经节细胞及内核层细胞胞浆表达增高，均在10h时最为明显。各组SD大鼠进舱自身前后F-ERG暗适应最大反应b波振幅变化分析，4、6、10、72h组F-ERG暗适应最大反应b波振幅显著降低(P<0.05)； 2h组和4h组(P=0.007)、6h组(P=0.008)、10h(P=0.002)有差异，24h组和4h组(P=0.035)、6h(P=0.040)、10h组(P=0.012)有差异。复方血栓通对SD大鼠高海拔视网膜病变预防作用研究中，结果显示与安慰剂组相比较，复方血栓通组、红景天组及肌苷组的视网膜水肿均明显减轻，但复方血栓通组与红景天组视网膜水肿程度明显低于肌苷组； 复方血栓通组及红景天组HIF-1α在神经节细胞层及内核层表达明显下降； 各组SD大鼠进舱后F-ERG暗适应最大反应b波振幅比较显示，安慰剂组与复方血栓通组(P=0.032)，红景天组(P=0.001)均有差异。

结论：在模拟高海拔环境下，复方血栓通可能是通过抑制HIF-1α的表达对大鼠高海拔视网膜病变有保护作用，但是具体作用机制有待我们进一步研究。]]> 2021/1/19 16:56:24 46true 目的：探讨木犀草素对H₂O₂诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化损伤的保护作用及其机制。

方法：将ARPE-19细胞分为对照组、H₂O₂组、不同剂量木犀草素组和Nrf2抑制剂组，除对照组外均采用100μmol/L H₂O₂制备RPE氧化损伤模型。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力并确定木犀草素处理浓度，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量，采用试剂盒法检测细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量，采用Western blot检测细胞Caspase-3、多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白表达水平。

结果：100μmol/L木犀草素对ARPE-19具有毒性作用，因此选择25μmol/L和50μmol/L木犀草素进行后续实验。与H₂O₂组比较，25μmol/L和50μmol/L木犀草素组细胞活力明显升高，凋亡率降低，ROS和MDA含量明显减少，SOD活性明显升高，Caspase-3和PARP蛋白表达水平明显降低，Bcl-2、Nrf2及HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与50μmol/L木犀草素组比较，Nrf2抑制剂组细胞活力明显降低，凋亡率明显升高，ROS和MDA含量明显升高\〖(654.96±26.99)vs(446.52±29.42)，(3.89±0.29)nmol/mL vs(2.06±0.19)nmol/mL\〗，SOD活性明显降低\〖(13.83±1.49)U/mL vs(22.69±1.83)U/mL\〗，Caspase-3和PARP蛋白表达水平明显升高，Bcl-2、Nrf2及HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。

结论：木犀草素能够改善H₂O₂诱导的RPE细胞氧化损伤，其作用机制与激活Nrf2/HO-1通路有关。]]> 2020/12/22 18:57:45 45true 目的：分析白藜芦醇对青光眼大鼠视神经的保护作用及对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及其相关因子的影响。

方法：SPF级SD大鼠以烧灼巩膜表面静脉法制作右眼青光眼模型，建模成功后以不同剂量(10、20、40mg/kg腹腔注射)白藜芦醇干预，末次给药后2h检测各组大鼠眼压，进行视网膜铺片观察视网膜神经节细胞(RGC)存活情况，采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测视网膜PI3K、Akt、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及蛋白表达情况。

结果：模型组眼压(30.25±4.25mmHg)高于低剂量组(26.30±4.05mmHg)、中剂量组(22.31±3.68mmHg)和高剂量组(18.32±3.21mmHg)，模型组RGC标识率(48.25%±4.50%)低于低剂量组(56.32%±5.05%)、中剂量组(66.03%±6.68%)和高剂量组(78.56%±7.82%)(均P<0.05)，且低、中、高剂量组眼压呈剂量依赖性下降，RGC标识率呈剂量依赖性升高。模型组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白比值及bFGF、BDNF mRNA和蛋白相对表达量低于低剂量组、中剂量组和高剂量组(均P<0.05)，且低剂量组、中剂量组、高剂量组呈剂量依赖性升高。

结论：白藜芦醇能抑制青光眼大鼠RGC的凋亡，减轻视神经损伤，其机制可能与上调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的磷酸化及视神经保护作用因子基因与蛋白的表达有关。]]> 2020/12/22 18:57:45 44true 方法：用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HCECs发生炎症反应，设对照组、TNF-α组、RSV+TNF-α组； 用H₂O₂诱导HCECs发生氧化应激反应，设正常组、H₂O₂组、RSV+H₂O₂组。采用MTT法检测细胞活力； RT-qPCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测相关炎症因子IL-1、IL-6、IL-8的表达； 免疫荧光染色法及Western blot法检测核因子-κB p65(NF-κB p65)的核转位； 2'，7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平。

结果：在HCECs炎症反应中，RT-qPCR及ELISA结果均显示，与对照组相比，TNF-α组的HCECs IL-1、IL-6、IL-8的表达水平均显著升高。RSV预处理细胞后，以上指标较TNF-α组显著下降； 免疫荧光染色及Western blot结果均显示，TNF-α组NF-κB p65核转位增加，而RSV预处理细胞后NF-κB p65核转位受到抑制。在HCECs氧化应激反应中，MTT和DCFH-DA荧光探针染色结果分别显示，H₂O₂刺激使HCECs活力显著下降，HCECs内ROS的产生增多。而RSV 预处理后，细胞活力显著上升，且RSV抑制了H₂O₂诱导的HCECs内ROS的产生。

结论：RSV对HCECs的炎症和氧化应激反应具有抑制作用，RSV通过抑制NF-κB通路激活以抑制炎症反应。]]> 2021/11/22 20:59:15 43true 目的：观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。

方法：运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARPE-19细胞分为NC组、45mmol/L HG组、si-NC+45mmol/L HG组、si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、miR-NC+45mmol/L HG组、miR-19a-3p mimics+45mmol/L HG组、si-con+45mmol/L HG组、si-TSHZ3+45mmol/LHG组、pcDNA+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、pcDNA-TSHZ3+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组。运用CCK-8检测细胞存活率，qRT-PCR检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-19a-3p和TSHZ3 mRNA表达，Western Blot检测TSHZ3、活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白质的表达，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平。双荧光素酶活性检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-19a-3p、miR-19a-3p和TSHZ3之间的靶向结合。

结果：15、45、135mmol/L HG抑制ARPE-19细胞的存活率，后续选择细胞存活率约50%的HG浓度45mmol/L。45mmol/L HG提高ARPE-19细胞中lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3 mRNA、TSHZ3蛋白表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平，降低miR-19a-3p表达水平、细胞存活率(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3低表达或miR-19a-3p高表达提高HG诱导的ARPE-19细胞的存活率，降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-19a-3p，miR-19a-3p靶向TSHZ3，lncRNA KCNQ1OT13通过miR-19a-3p调控TSHZ3的表达。lncRNA KCNQ1OT1低表达对HG诱导的ARPE-19细胞存活率、凋亡以及氧化应激的影响被TSHZ3过表达所逆转。

结论：lncRNA KCNQ1OT13低表达通过miR-19a-3p/TSHZ3，促进HG诱导的ARPE-19，并抑制其凋亡和氧化应激。]]> 2021/11/22 20:59:15 42true 2021/10/22 21:57:36 41true 2021/10/22 21:57:36 40true 目的：探索17β-雌二醇(17β-estradiol，E₂)对人晶状体上皮细胞的保护作用与细胞焦亡的相关性及其机制。

方法：体外培养人晶状体上皮细胞，设立空白对照组、H₂O₂处理组(含100μmol/L H₂O₂培养基培养12h)、雌二醇组(分别于含1×10^-3、1×10^-2、1×10^-1μmol/L雌二醇培养基中培养24h后，再加入含100μmol/L H₂O₂的培养基处理12h)。扫描电子显微镜观察细胞超微结构； 免疫荧光染色法检测Gasdermin D(GSDMD)分布及荧光强度； CCK-8法检测细胞活力； TUNEL法检测细胞焦亡； 免疫印迹实验(Westen-blot)检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(Caspase-1)、GSDMD、NOD样受体蛋白(NLRP3)表达水平； 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)表达。

结果：与空白对照组相比，H₂O₂处理组的细胞活力下降，细胞焦亡率升高，Caspase-1、GSDMD、NLRP3蛋白的表达上调，IL-1β分泌增多。而与H₂O₂处理组相比较，雌二醇组细胞焦亡率下降，Caspase-1、GSDMD、NLRP3蛋白的表达下调，IL-1β分泌量减少，并随雌激素浓度的递增，而呈递减趋势。

结论：17β-雌二醇对人晶状体上皮细胞的保护作用具有浓度依赖性，其保护机制与抑制人晶状体上皮细胞焦亡过程相关，并有经典焦亡途径参与。]]> 2021/9/16 22:17:06 39true 目的：探讨环状RNA(circRNA)circ_0000144是否靶向微小RNA(miRNA)-502-5p调控人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。

方法：将Y79细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ_0000144组(转染si-circ_0000144)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-502-5p组(转染miR-502-5p mimic)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ_0000144组(转染pcDNA-circ_0000144)、si-circ_0000144+anti-miR-NC组(转染si-circ_0000144+anti-miR-NC)、si-circ_0000144+anti-miR-502-5p组(转染si-circ_0000144+anti-miR-502-5p)。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测视网膜母细胞瘤组织和细胞中circ_0000144和miR-502-5p表达，溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)检测细胞增殖，免疫印迹实验(western blot)测定细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达，流式细胞术分析细胞凋亡，Transwell测定细胞迁移、侵袭。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验分析circ_0000144是否靶向miR-502-5p。

结果：31例视网膜母细胞瘤组织中circ_0000144表达量比瘤旁组织高，miR-502-5p表达量比瘤旁组织低(P<0.05)。与si-NC组比较，si-circ_0000144组Y79细胞中circ_0000144表达量、OD值、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量、迁移、侵袭细胞数减少，Bax蛋白表达量、凋亡率增加(P<0.05)。circ_0000144靶向负调控miR-502-5p的表达。miR-502-5p组较miR-NC组增加Y79细胞凋亡率、Bax蛋白表达量，减少OD值、迁移及侵袭细胞数、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量(P<0.05)。与si-circ_0000144+anti-miR-NC组比较，si-circ_0000144+anti-miR-502-5p组Y79细胞凋亡率、Bax蛋白表达量降低，OD值、迁移及侵袭细胞数、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达量升高。

结论：视网膜母细胞瘤组织中circ_0000144高表达，通过负调控miR-502-5p抑制其表达降低视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、迁移侵袭，促进凋亡。]]> 2021/9/16 22:17:07 38true 目的：探讨神经酰胺类似蛋白(CERKL)是否通过激活沉默信息调节因子1(SIRT1)/E2F转录因子1(E2F1)轴减轻蓝光导致的视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤。

方法：培养人视网膜色素上皮-19(ARPE-19)细胞，蓝光照射后观察细胞形态变化，PCR与蛋白免疫印迹法测定细胞CERKL的表达情况； 分别采用siRNA-CERKL与pcDNA3.1-CERKL转染ARPE-19细胞，蓝光暴露处理后，采用MTT法测定细胞活力，TUNEL法检测细胞凋亡情况，分析氧化应激标志物的含量与SIRT1/E2F1轴的表达情况； 随后转染siRNA-SIRT1至ARPE-19细胞，再次测定蓝光照射下细胞氧化应激损伤状况。

结果：蓝光照射后，ARPE-19细胞逐渐收缩成圆球状，且出现空泡； 蓝光照射导致CERKL表达水平升高(P<0.05)，同时观察到细胞活力降低(P<0.05)，凋亡率升高(P<0.05)，活性氧、丙二醛与8-羟基脱氧鸟苷含量升高(P<0.05)； 沉默CERKL会加剧此现象，而上调CERKL则能缓解此变化(P<0.05)； 上调CERKL同时激活了SIRT1表达，促进了E2F1的脱乙酰化(P<0.05)，而沉默SIRT1能逆转上调CERKL对蓝光导致ARPE-19细胞氧化应激损伤的缓解作用(P<0.05)。

结论：CERKL通过激活SIRT1表达，促进E2F1脱乙酰化，从而减轻蓝光诱发的ARPE-19细胞氧化应激损伤。]]> 2022/7/27 16:29:02 37true 方法：C57BL/6小鼠30只随机分为阴性对照组、近视模型组以及中药干预组，每组10只。除了阴性对照组外，近视模型组、中药干预组小鼠均使用半透明EP管遮盖右眼制成形觉剥夺性近视(FDM)模型； 中药干预组灌胃驻景丸加减方混悬液0.546g/(kg·d)(0.15mL/d)，阴性对照组、近视模型组灌胃等量生理盐水(0.15mL/d)，共4wk。分别于实验开始、实验结束，使用带状检影镜测量小鼠右眼屈光度，A超测量小鼠右眼眼轴长度。实验结束时，取所有小鼠右眼进行检测，免疫荧光法定位和检测视网膜小胶质细胞标志物(Iba1)活性与迁移； 透射电镜观察视网膜色素上皮细胞中自噬小体形成情况； Western Blot、实时荧光定量PCR(q-PCR)检测视网膜组织自噬标志物LC3Ⅱ和p62蛋白定量及基因表达情况。

结果：实验结束时小鼠右眼屈光度示，近视模型组、中药干预组形成相对近视，近视模型组、中药干预组较阴性对照组显著降低(均P<0.01)。实验结束时，近视模型组、中药干预组眼轴长度较阴性对照组眼轴长度显著增加(P<0.01)。免疫荧光法定位和检测Iba1示，近视模型组视网膜中Iba1的平均光密度增加趋势最明显，阴性对照组增高趋势次之，中药干预组有降低趋势，近视模型组较阴性对照组显著增加(P<0.05)，中药干预组较近视模型组显著降低(P<0.05)，且发现近视模型组、中药干预组Iba1向神经节细胞层迁移。透射电镜示，近视模型组、中药干预组视网膜色素上皮细胞中观察到自噬小体。Western Blot法、q-PCR检测结果示，LC3Ⅱ、p62表达在中药干预组增加趋势最明显、近视模型组其次、阴性对照组最低。

结论：驻景丸加减方可能通过抑制小胶质细胞活化，增强FDM小鼠视网膜自噬。]]> 2022/6/28 10:46:43 36true 方法：选取6～8周龄健康C57BL/6雄性小鼠50只随机分为正常对照组、单纯铁剂组、抑制剂组、增强剂组及溶剂对照组，每组10只。正常对照组腹腔注射生理盐水0.2mL，其它组均腹腔注射50mg/mL右旋糖酐铁0.2mL，每3d注药1次； 第14d起抑制剂组、增强剂组及溶剂对照组每天分别增加1次腹腔注射同体积(0.2mL)50mg/kg XMD8-92、10mg/kg辛伐他汀和50% DMSO溶剂。于注药后第7、14、28d裂隙灯下观察各组小鼠眼前节情况，进行眼表炎症指数评估及角膜荧光素染色评分； 28d后取角膜、结膜及泪腺组织进行HE染色、免疫荧光染色，并采用RT-PCR检测巨噬细胞极化相关指标(CD86、CD206、iNOS、Arg-1)； Western blot检测胞葬作用相关信号因子(Gas6、MerTK)的表达； ELISA检测炎症因子(IL-1β、TNF-α、MMP-9)的表达。

结果：注药28d，与正常对照组比较，单纯铁剂组及溶剂对照组眼表炎症指数及角膜荧光素染色评分增加； HE染色显示角膜上皮欠完整，结膜杯状细胞减少，泪腺结构欠清晰且细胞排列相对杂乱； 各组织中CD86、iNOS等M1型巨噬细胞标志物表达上调，CD206、Arg-1等M2型巨噬细胞标志物表达下调，IL-1β、TNF-α、MMP-9等炎症因子表达上调(均P<0.05)。与单纯铁剂组和溶剂对照组比较，抑制剂组小鼠眼表炎症指数及角膜荧光素染色评分进一步增长； HE染色显示角膜上皮脱落明显，结膜杯状细胞进一步减少甚至消失，泪腺结构紊乱且细胞排列杂乱不规则； 各组织中Gas6、MerTK等胞葬作用相关信号因子表达下调(均P<0.05)，CD86、iNOS等M1型巨噬细胞标志物及IL-1β、TNF-α、MMP-9等炎症因子表达进一步上调(均P<0.05)； 而增强剂组小鼠眼表炎症指数及角膜荧光素染色评分下降，HE染色显示角膜上皮完整，结膜杯状细胞增多，泪腺结构形态改善； 各组织中Gas6、MerTK等胞葬作用相关信号因子表达上调(均P<0.05)，且CD206、Arg-1等M2型巨噬细胞标志物表达上调，IL-1β、TNF-α、MMP-9等炎症因子表达下调(均P<0.05)。

结论：高铁环境诱导巨噬细胞向M1型定向极化，加重眼表炎症反应及组织损伤，胞葬作用可调控巨噬细胞极化影响高铁环境下眼表炎症反应的发生。]]> 2022/6/28 10:46:43 35true 方法：将40只雄性C57BL/6小鼠(取右眼为实验眼)用随机数字表法将小鼠分为4组：对照组10只，每次腹腔注射生理盐水0.2mL； 低剂量组、中剂量组、高剂量组各10只为模型组，每次分别腹腔注射浓度为12.5、25、50mg/mL的右旋糖酐铁溶液0.2mL。每3d注射1次，共注射28d。注药后第7、14、28d观察各组小鼠眼表炎症指数、角膜荧光素染色、泪膜破裂时间(BUT)及泪液分泌量(SⅠt)，评估干眼及眼表炎症程度。28d后处死小鼠，取角膜、结膜及泪腺组织，进行HE染色、普鲁士蓝染色以及组织铁检测，评估小鼠炎症反应及铁过载情况； 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。

结果：与对照组相比，模型组小鼠出现一系列干眼症状，小鼠眼表炎症指数增高，角膜荧光素染色评分增加，BUT缩短，泪液分泌量减少(均P<0.05)； 模型组小鼠角膜、结膜及泪腺组织均受到不同程度的损伤，各组织眼表铁沉积情况较对照组加重，组织铁含量明显增加(均P<0.01)； 模型组小鼠角膜、结膜及泪腺组织中炎症因子(IL-1β、TNF-α、MMP-9)的含量均高于对照组(均P<0.01)，随着右旋糖酐铁注药时间及浓度增加，小鼠干眼及眼表炎症程度逐渐加重。

结论：腹腔注射右旋糖酐铁可成功建立小鼠铁过载干眼模型，其机制可能与铁过载加重眼表炎症反应有关。]]> 2022/6/28 10:46:43 34true 2)诱导人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞缺氧损伤的保护作用，从而探讨黄芪是否通过抗氧化应激来改善糖尿病视网膜病变(DR)。

方法：建立CoCl₂诱导ARPE-19细胞缺氧模型，并分为以下5组：正常组(细胞正常培养，不加任何处理)、缺氧模型组(200μmol/L CoCl₂)、空白血清组(200μmol/L CoCl₂+空白血清)、低剂量含药血清组(200μmol/L CoCl₂+10%含药血清)、高剂量含药血清组(200μmol/L CoCl₂+20%含药血清)。CCK-8检测细胞活性； 试剂盒检测细胞上清液中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平； ELISA检测细胞培养基中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量； 实时荧光定量PCR(qPCR)检测VEGF、HIF-1α和脯氨酰羟化酶-2(PHD-2)的mRNA水平； Western Blot法检测VEGF、HIF-1α和PHD-2的表达情况。

结果：采用200μmol/L的CoCl₂浓度可成功建立ARPE-19细胞缺氧模型。低剂量和高剂量黄芪含药血清可抑制缺氧诱导的ARPE-19细胞增殖(P<0.05)，升高ARPE-19细胞缺氧损伤中GSH水平，降低MDA含量(P<0.05)。低剂量和高剂量黄芪含药血清可抑制ARPE-19细胞缺氧损伤上清液中HIF-1α和VEGF的表达(P<0.05)，以及ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α、PHD-2的mRNA表达和蛋白表达(P<0.05)。

结论：低剂量和高剂量黄芪含药血清通过抗氧化作用减轻CoCl₂诱导ARPE-19细胞缺氧损伤。]]> 2022/5/30 15:27:42 33true 方法：收集病理确诊且临床资料完整的视网膜母细胞瘤组织标本25例，同时选取因外伤摘除眼球的正常视网膜组织9例为对照； qRT-PCR法检测正常视网膜组织、视网膜母细胞瘤组织、人正常视网膜血管内皮细胞ACBRI-181、视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44中DLGAP1-AS2、miR-1193的表达量； 将si-NC、si-DLGAP1-AS2、miR-NC、miR-1193 mimic、si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor(共转染)分别转染至HXO-Rb44细胞； 双荧光素酶报告实验检测DLGAP1-AS2与miR-1193的靶向关系； CCK-8法、平板克隆形成实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成数、迁移及侵袭； Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。

结果：视网膜母细胞瘤组织中DLGAP1-AS2的表达量高于正常视网膜组织(P<0.05)，而miR-1193的表达量低于正常视网膜组织(P<0.05)； HXO-Rb44细胞中DLGAP1-AS2的表达量高于ACBRI-181细胞(P<0.05)，miR-1193的表达量低于ACBRI-181细胞(P<0.05)； DLGAP1-AS2可靶向调控miR-1193的表达； 转染si-DLGAP1-AS2或转染miR-1193 mimic可抑制HXO-Rb44细胞增殖、迁移及侵袭； 共转染si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor可降低转染si-DLGAP1-AS2对HXO-Rb44细胞增殖、迁移及侵袭的作用。

结论：沉默DLGAP1-AS2可通过靶向调控miR-1193表达而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移及侵袭。]]> 2022/5/30 15:27:43 32true 方法：以人视网膜血管内皮细胞为研究对象，建立高糖损伤模型。胃饥饿素处理细胞后，采用CCK-8试剂盒检测不同浓度胃饥饿素对高糖下细胞增殖的影响，以筛选最佳浓度。将细胞分为正常对照组(NC)、胃饥饿素组(ghrelin)、高糖组(HG)和胃饥饿素+高糖组(ghrelin+HG)。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖，Annexin-APC/7-AAD试剂盒检测细胞凋亡，蛋白质印迹法检测细胞NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18的表达。

结果：与NC组(100.00%±0.00%)相比，HG组细胞增殖率(69.87%±0.68%，P<0.05)明显下降。与HG组相比，ghrelin+HG组细胞增殖率(92.31%±3.62%，P<0.05)明显升高。与NC组(4.94%±0.15%)相比，HG组细胞凋亡率(28.33%±1.37%，P<0.05)明显升高。与HG组相比，ghrelin+HG组细胞凋亡率(14.24%±0.32%，P<0.05)明显降低。与NC组相比，HG组细胞表达NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18蛋白均明显升高(均P<0.05)。与HG组相比，ghrelin+HG组细胞表达NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18蛋白均明显下降(均P<0.05)。

结论：胃饥饿素能对高糖损伤的视网膜血管内皮细胞起到保护作用，可能是通过抑制NLRP3炎症小体信号通路发挥其功能。]]> 2022/5/30 15:27:43 31true 方法：用高糖培养基模拟糖尿病环境建立HRCECs体外高糖模型，将培养的细胞分为：正常对照组、高糖对照组、高糖+20、40、80μmol/L姜黄素组，分别用CCK-8法检测姜黄素干预后HRCECs的增殖能力，用Western-blot及免疫细胞化学法检测VEGF、NF-κB p65的表达。

结果：CCK-8法结果示：与正常对照组比较，高糖显著促进HRCECs增殖(P<0.01)，各浓度姜黄素作用12、24、48h后与高糖对照组比较，细胞增殖均有明显抑制作用(P<0.01)，且呈浓度与时间依赖性。Western-blot结果示：与正常对照组比较，高糖对照组中VEGF-A、NF-κB p65表达显著增加(P<0.01)，各浓度姜黄素作用12、24、48h后与高糖对照组比较，VEGF-A、NF-κB p65的表达显著减少，且随着浓度增加、时间延长抑制作用增强，各加药组间两两比较均有差异(P<0.01)。免疫细胞化学法结果示：与正常对照组相比，高糖对照组VEGF表达显著增加(P<0.01)，各浓度姜黄素干预24h后与高糖对照组比较，VEGF表达逐渐下降(P<0.01)，各加药组间两两比较均有差异(P<0.01)。

结论：姜黄素可呈浓度与时间依赖性地抑制高糖诱导的HRCECs增殖以及VEGF、NF-κB p65的表达，这种增殖抑制作用可能与其下调VEGF、NF-κB p65表达有关。]]> 2022/4/24 18:49:22 30true 方法：氯化钴(CoCl₂)诱导人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞建立化学性缺氧模型，采用CCK-8法检测姜黄素对CoCl₂诱导的ARPE-19细胞活性的影响，采用RT-qPCR和Western blot检测姜黄素对CoCl₂诱导的ARPE-19缺氧模型细胞内AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达的影响。采用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验、Transwell小室侵袭实验及Matrigel基质胶管腔形成实验，观察在非接触情况下ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。

结果：100μmol/L CoCl₂可成功建立ARPE-19细胞化学缺氧模型。CoCl₂在100μmol/L浓度下促进ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。姜黄素在浓度为100μmol/L时可减少ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。ARPE-19细胞姜黄素低(6.25μmol/L)、中(25μmol/L)、高剂量组(100μmol/L)条件培养液可显著抑制HUVEC细胞水平迁移； 其中高剂量组条件培养液可显著抑制HUVEC细胞垂直迁移和细胞侵袭。ARPE-19细胞姜黄素中、高剂量组条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。

结论：姜黄素在100μmol/L对CoCl₂诱导ARPE-19细胞缺氧有保护作用。姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。]]> 2022/3/24 15:57:49 29true 方法：选取75只新西兰大白兔随机分为3组，球结膜下植入不同的引流物材料，其中PMMA组植入表面涂裹聚一氯对二苯(Parylene C)的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)块； 硅胶-MMC组植入硅胶块，同时注射丝裂霉素C(MMC)； 硅胶组植入硅胶块。收集术后第1、3d，1、2、3、4、8wk兔眼房水，采用ELISA法检测房水中IL-10蛋白表达。收集术后第1、2、3、4、8wk材料块周围结缔组织，采用HE染色检测组织中成纤维细胞增生和炎症细胞浸润情况； 采用免疫组织化学染色及RT-PCR法检测组织中IL-10蛋白及mRNA的表达。

结果：HE染色显示硅胶组中成纤维细胞增生和炎症细胞浸润较PMMA组及硅胶-MMC组显著。ELISA检测显示术后早期三组房水中IL-10表达呈先增高再降低的趋势，术后第3d达高峰； 术后早期(第1d～3wk)硅胶组的表达高于PMMA组和硅胶-MMC组(均P<0.05)，术后晚期(第4～8wk)三组表达无明显差异。免疫组织化学及RT-PCR检测显示结缔组织中IL-10蛋白及mRNA的表达在术后第1wk最高，术后第2～3wk逐渐下降，术后第4～8wk再次升高，且硅胶组明显高于其他两组(均P<0.05)。术后晚期(第4～8wk)结缔组织中IL-10蛋白的表达与成纤维细胞增生水平呈正相关性。

结论：青光眼引流物材料植入术后，IL-10表达呈先升高后逐渐降低，4wk后再次升高的动态过程，推测IL-10可能对瘢痕形成起抑制作用。]]> 2022/3/24 15:57:50 28true 方法：新西兰大白兔64只行右眼PRK手术后，根据术后局部用药不同，随机分为4组：单纯手术组、14μmol/L二甲基亚砜组(DMSO)、50μmol/L雷帕霉素组、100μmol/L雷帕霉素组，每组16只。根据分组情况，术后2h开始给予上述滴眼液治疗，每天3次，1次1滴，持续7d，另选取16只兔为正常对照组。术后每天用手持裂隙灯显微镜照相系统，观察兔眼术后炎症反应及角膜上皮愈合情况。裂隙灯显微镜照相系统采集PRK术后1、4wk时各组兔眼haze的形成情况。各组分别于术后1、4wk采用空气栓塞法处死8只兔子，摘取角膜组织，冻存备用。免疫组化检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平。Real Time-PCR技术检测自噬因子-5(ATG5)、自噬因子-12(ATG12)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)基因的相对表达量。

结果：PRK术后兔眼角膜上皮均在3～4d完全愈合，各组兔眼术后角膜上皮愈合时间比较无差异(F=0.745，P=0.530)。在观察期间，各组术后haze均于4wk时最明显，单纯手术组和14μmol/L DMSO组haze症状均较严重，其次为50μmol/L雷帕霉素组，100μmol/L雷帕霉素组haze症状较其他组明显减轻，各组兔眼术后不同时间点haze分级比较有差异(均P<0.05)。免疫组化显示，术后1、4wk，单纯手术组和14μmol/L DMSO组TGF-β1、MMP-2和α-SMA的表达均较强，其次为50μmol/L雷帕霉素组，100μmol/L雷帕霉素组较其他组表达明显减弱(均P<0.05)。PCR法检测显示，术后1、4wk，50、100μmol/L雷帕霉素组ATG5、ATG12和Bcl-2 mRNA相对表达量较单纯手术组和14μmol/L DMSO组明显升高(均P<0.05)； 50、100μmol/L雷帕霉素组Caspase3 mRNA相对表达量较单纯手术组和14μmol/L DMSO组明显降低(均P<0.05)。

结论：雷帕霉素可以增强自噬水平，抑制凋亡水平，从而减轻兔眼PRK术后haze的形成。]]> 2022/2/24 14:17:20 27true 方法：用3000±150Lx蓝光建立hRPE细胞损伤模型； 利用流式细胞术检测照射时间分别为0、3、6、9、12、24h的6组hRPE细胞凋亡率及活性氧相对量； 利用流式细胞术检测照射0h组、照射6h组、照射6h前或后加不同浓度Vit E组(Vit E的浓度分别为10、50、100μmol/L)的hRPE细胞凋亡情况和活性氧相对量，并采用Hoechst 33258试剂染色在荧光显微镜下观察hRPE细胞的荧光强度。

结果：与照射0h组相比，照射3、6、9、12、24h组的hRPE细胞活性氧相对量明显增加(均P<0.01)，照射6、9、12、24h组的hRPE细胞凋亡率也明显增加(均P<0.01)，但照射3h组的hRPE细胞凋亡率无明显增加，差异无统计学意义(P=0.46)。与照射6h组相比，除照射6h前加入10μmol/L的hRPE细胞凋亡率(P=0.66)外，其他加Vit E的实验组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率明显减少、细胞中Hoechst 33258释放蓝色荧光逐渐减弱，且呈浓度依赖(均P<0.01)。与照射0h组相比，加Vit E的6组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率有差异(均P<0.01)。同一浓度的Vit E，除10μmol/L Vit E的hRPE细胞凋亡率在照射前或后加无差异(P=0.08)外，照射后加Vit E组比照射前加Vit E组的hRPE细胞活性氧相对量、凋亡率明显减少(均P<0.01)。

结论：hRPE细胞经蓝光照射后出现胞内活性氧相对量增多的现象早于细胞凋亡，清除胞内活性氧是减少大剂量蓝光诱导hRPE细胞损伤的思路。Vit E可保护由大剂量蓝光诱导的RPE细胞损伤，这种效应随Vit E浓度增加而增强，且照射后加入比照射前加入的效果更好。但需要一定剂量的Vit E才能显效，而且无法完全修复损伤。]]> 2022/1/27 16:19:50 26true 方法：采用接触镜辅助的角膜划痕法建立树鼩细菌性角膜炎模型。在进行接种后第1、4、7、14d使用前段照相、活体共聚焦显微镜对模型感染症状进行评估，制作病理切片观察角膜组织病理学改变。在相应时间点进行取材，实时荧光定量PCR检测树鼩角膜组织中IL-17 mRNA的表达，ELISA检测IL-17蛋白表达水平。

结果：树鼩铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌性角膜炎模型造模成功率为96%、100%，树鼩细菌性角膜炎临床表现、炎症细胞浸润情况和组织病理改变规律相吻合。IL-17基因和蛋白的表达情况在树鼩角膜中与角膜炎症的严重情况一致。

结论：采用接触镜辅助的角膜划痕法可成功建立更接近人细菌性角膜炎自然感染病程的树鼩铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌性角膜炎动物模型。IL-17参与树鼩细菌性角膜炎发生发展的过程。]]> 2021/12/21 20:43:50 25true 目的：研究不同程度牵拉力对大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)存活率和神经传导功能的影响，探讨RGCs自噬水平对上述指标的影响。

方法：选取健康雄性SD大鼠30只随机分为空白组、假手术组、0.15N组、0.3N组、0.6N组，每组各6只。模型组采用横向定量牵拉法制作视神经损伤大鼠模型。空白组大鼠不予处理。假手术组仅暴露视神经，不予牵拉。造模后第1、3d行闪光视觉诱发电位(f-VEP)检查，第3d取视网膜组织行Brn-3a免疫组织化学染色观察RGCs存活情况，透射电子显微镜观察自噬小体，蛋白质印迹法检测LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平。

结果：造模后第3d，与假手术组比较，模型组大鼠f-VEP P2潜伏期延长，振幅降低，视网膜组织中RGCs存活率降低，LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达水平降低，且各组大鼠视网膜组织中均可见自噬小体。

结论：视神经牵拉伤会降低大鼠早期视网膜自噬水平，导致RGCs死亡和相应的神经传导功能障碍，且不同牵拉力造成的损伤程度不同，RGCs存活情况可能与其自噬水平有关。]]> 2022/10/28 16:28:10 24true 目的：探讨lncRNA MALAT1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响及其分子机制。

方法：qPCR检测正常对照组、糖尿病患者无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变患者组血清中lncRNA MALAT1的表达水平以及葡萄糖培养对lncRNA MALAT1的表达水平的影响。qRT-PCR检测miR-124-3p表达水平； Western blotting检测SOX7表达水平； 双荧光素酶报告系统检测lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7的靶向作用关系； CCK-8实验检测细胞的增殖活力； Transwell实验检测细胞的迁移能力； 体外成管实验检测hRMECs血管形成能力。

结果：lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者血清中的表达水平显著高于糖尿病患者无视网膜病变组和正常对照组(P<0.001)； 体外葡萄糖培养显著促进lncRNA MALAT1在hRMECs细胞的表达，并显著促进hRMECs细胞的增殖、迁移和血管形成(均P<0.05)。敲低lncRNA MALAT1显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明，lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7之间存在靶向结合作用。过表达miR-124-3p显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05)； 过表达lncRNA MALAT1+miR-124-3p，同时过表达miR-124-3p+SOX7，敲低lncRNA MALAT1+过表达SOX7均显著消除了过表达miR-124-3p对hRMECs细胞增殖、迁移和血管形成的抑制作用(均P<0.05)。

结论：lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p对SOX7的负调控作用促进糖尿病视网膜病变中视网膜内皮细胞增殖、迁移和血管形成。lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者的异常上调可能是微血管功能障碍的潜在生物标志。]]> 2022/9/22 16:19:00 23true 2023/8/22 13:56:42 22true 2023/8/22 13:56:43 21true 目的：探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine， m⁶A)甲基化转移酶3(METTL3)在糖尿病性白内障发病中的作用机制。

方法：用低糖和高糖培养基培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)24h后，采用RT-qPCR和Western blot实验检测细胞的上皮-间质转分化(EMT)指标：E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化情况； transwell和划痕实验检测细胞迁移能力。采用免疫荧光染色检测人晶状体前囊膜组织中METTL3的表达量及定位，m⁶A dot blot实验检测在低糖和高糖培养基中培养24h细胞的m⁶A甲基化水平， RT-qPCR和Western blot实验检测细胞中METTL3的RNA和蛋白表达量。加入METTL3抑制剂的培养基中培养24h的细胞，RT-qPCR和Western blot实验检测EMT指标的变化情况； m⁶A dot blot实验检测细胞m⁶A甲基化水平； Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力。免疫荧光染色检测细胞中转化生成因子β(TGFβ₁)的表达； RT-qPCR和Western blot实验检测细胞中的TGFβ₁和SNAIL的表达量。

结果：与低糖条件相比，高糖条件能够促进细胞EMT的发生，促进METTL3的表达和上调了细胞总RNA的m⁶A甲基化水平(P<0.05)。高糖能够促进细胞的迁移能力。糖尿病性白内障患者晶状体前囊膜中METTL3表达较单纯年龄相关性白内障患者增高。与高糖+DMSO组相比，加入METTL3抑制剂STM2457，能够抑制细胞的EMT发生，抑制TGFβ₁和SNAIL的 表达，抑制细胞总RNA 的m⁶A甲基化水平(均P<0.05)。加入METTL3抑制剂STM2457后细胞迁移能力较高糖+DMSO组降低。

结论：m⁶A甲基化转移酶METTL3通过激活TGFβ₁/SNAIL通路促进了在高糖条件下人晶状体上皮细胞的EMT发生从而诱导糖尿病性白内障的发生。]]> 2023/7/25 11:03:25 20true 目的：探讨miR-375表达对脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖和侵袭的影响。

方法：培养MUM-2B细胞，分别转染miR-375模拟物序列(模拟物组)、miR-375抑制物序列(抑制物组)、阴性对照序列(阴性对照组)和不做任何处理(空白组)，分别采用qRT-PCR实验、CCK-8实验、细胞凋亡实验、Transwell实验检测细胞中miR-375、细胞增殖活性、细胞凋亡情况、细胞迁移和侵袭情况。

结果：相比于阴性对照组(1.01±0.10)和空白组(1.03±0.07)，模拟物组细胞中miR-375表达量(2.65±0.15)升高，而抑制物组细胞中miR-375表达量(0.28±0.06)降低(P<0.05)； 与空白组和阴性对照组比较，模拟物组细胞24、48、72和96h时OD值均降低(P<0.05)，而抑制物组细胞24、48、72和96h时OD值均升高(P<0.05)； 与空白组细胞凋亡率(20.54±4.01)%和阴性对照组细胞凋亡率(22.80±4.28)%比较，模拟物组细胞凋亡率(39.11±3.37)%升高(P<0.05)，而抑制物组细胞凋亡率(10.13±2.17)%降低(P<0.05)； 与空白组和阴性对照组比较，模拟物组细胞迁移数和细胞侵袭数均降低(P<0.05)，而抑制物组细胞迁移数和细胞侵袭数均升高(P<0.05)。

结论：上调MUM-2B细胞中miR-375表达可降低细胞增殖活性，加速细胞凋亡，抑制细胞迁移和侵袭，下调miR-375表达则发挥相反的作用，表明miR-375可能在脉胳膜黑色素瘤病程中发挥抑癌功能。]]> 2023/7/25 11:03:25 19true 目的：探讨红景天苷(SA)对透镜诱导型近视(LIM)豚鼠脉络膜厚度及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、多巴胺及其D1受体表达的影响。

方法：将18只2周龄豚鼠随机分为正常对照(NC)组、LIM组和透镜诱导型近视+红景天苷(LIM+SA)组，每组6只。NC组正常饲养，给予2mL/d生理盐水灌胃； LIM组豚鼠右眼前配戴-5D透镜，建立近视模型，给予2mL/d生理盐水灌胃； LIM+SA组豚鼠右眼前配戴-5D透镜同时给予2mL/d红景天苷(100mg/kg)灌胃。造模4wk后测量各组豚鼠右眼屈光度、眼轴长度及脉络膜厚度，通过实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫组织化学(IHC)检测各组豚鼠右眼脉络膜视网膜HIF-1α mRNA及蛋白表达量，通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot法检测多巴胺浓度及其D1受体表达量。

结果：造模4wk后，与NC组比较，LIM组和LIM+SA组豚鼠右眼屈光度均负向增加，眼轴均延长，脉络膜厚度均减小，脉络膜视网膜HIF-1α mRNA和蛋白表达量均增加，多巴胺浓度及其D1受体表达量均降低； 与LIM组比较，LIM+SA组豚鼠右眼近视屈光度明显减小，眼轴长度较短，脉络膜厚度增加，脉络膜视网膜HIF-1α mRNA和蛋白表达量均降低，多巴胺浓度及其D1受体表达量均增加。

结论：红景天苷干预近视豚鼠可通过影响脉络膜厚度及HIF-1α、多巴胺及其D1受体的表达延缓近视进展。]]> 2023/7/25 11:03:25 18true 2023/6/21 14:36:09 17true 2023/6/21 14:36:09 16true 目的：观察铁死亡在高糖(HG)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤中的作用及机制，为糖尿病视网膜病变(DR)的治疗提供新思路。

方法：将体外培养的ARPE-19细胞分为正常对照组(NC组)、高糖组(HG组)、高糖+铁死亡抑制剂组(Fer-1组)。采用CCK-8法检测各组细胞活力； 使用ELISA试剂盒检测白细胞介素6(IL-6)、IL-1β及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达水平； 使用化验试剂盒检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)水平； 使用铁离子检测试剂盒检测细胞铁含量； 通过透射电子显微镜观察细胞线粒体变化； 通过Western blotting和免疫荧光染色技术检测铁死亡相关蛋白长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、GPX4以及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。

结果：与NC组相比，HG组细胞活力显著下降，细胞上清液中炎症因子表达水平升高，细胞中氧化应激指标MDA和铁含量显著升高，GSH含量和GPX4活性显著降低(均P<0.01)，且线粒体皱缩，ACSL4及VEGF蛋白表达增加，GPX4蛋白表达降低(均P<0.01)。与HG组相比，Fer-1组细胞活力明显增加，细胞上清液中炎症因子表达水平下降，细胞中MDA和铁含量明显下降，GSH含量和GPX4活性显著提高(均P<0.05)，且线粒体形态改善，ACSL4及VEGF蛋白表达减少，GPX4蛋白表达升高(均P<0.05)。

结论：铁死亡参与高糖诱导的RPE细胞损伤，抑制铁死亡能改善细胞活性，降低炎症及氧化应激水平，减轻高糖诱导的RPE细胞损伤。]]> 2023/5/29 16:33:19 15true 目的：研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效，分析多形核中性白细胞(PMNs)的浸润和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。

方法：将75只健康日本白兔随机分成A、B、C组，每组25只，均建立右眼角膜碱烧伤模型。A组兔右眼角膜碱烧伤后立即行角膜病灶区羊膜负载hUCMSCs覆盖术； B组兔右眼角膜碱烧伤后立即行角膜病灶区羊膜覆盖术； C组兔右眼角膜碱烧伤后未进行处理。角膜碱烧伤后3、7、14、21、28d，裂隙灯下观察实验兔角膜恢复情况并照相，对角膜新生血管(CNV)生长情况进行评分，并分离角膜组织制作病理切片，通过苏木素-伊红(HE)染色观察PMNs浸润情况，采用免疫组化染色法测定VEGF的表达。

结果：角膜碱烧伤后14d时，A组CNV较B组生长明显缓慢，A组病灶区周围CNV生长评分明显低于B组(P<0.05)。碱烧伤后3d时，角膜PMNs数量增加，浸润角膜基质层，7d时稍有下降，14d时达到峰值，后渐进性下降，碱烧伤后早期浸润在病灶区角膜基质内，后期浸润范围与溃疡面积相同，碱烧伤后各时间点A组和B组角膜PMNs密度均明显低于C组(P<0.05)，且14、21d时，A组均明显低于B组(P<0.05)。碱烧伤后各组角膜VEGF表达水平均在7～14d时达到峰值，28d时明显降低，碱烧伤后各时间点A组和B组VEGF表达水平均明显低于C组(P<0.05)，且7、14、21d时，A组均明显低于B组(P<0.05)。

结论：羊膜负载hUCMSCs移植治疗兔角膜碱烧伤可减少CNV形成，抑制碱烧伤后角膜血管化，角膜病理损伤及血管化与PMNs和VEGF密切相关。]]> 2023/4/27 14:33:08 14true 目的：探索甲基转移酶3(METTL3)介导的N6-甲基腺苷(m⁶A)甲基化修饰在脉络膜新生血管发病中对血管内皮细胞生物学活性的调控作用及机制。

方法：将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为：对照组(正常培养)、低密度脂蛋白(LDL)组、荧光标记LDL(Dil-LDL)组、12.5μg/mL、25μg/mL氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、12.5μg/mL、25μg/mL荧光标记ox-LDL(Dil-ox-LDL)组、DMSO组、STM2457(METTL3抑制剂)组、DAPT组； 将体外培养的猴视网膜-脉络膜内皮细胞(RF/6A)分为：对照组、DMSO组、12.5μg/mL ox-LDL组、DAPT组。荧光显微镜观察细胞内吞脂蛋白水平，dot blot检测m⁶A甲基化水平，Western blot检测METTL3及血管形成相关蛋白的表达水平，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测METTL3及血管形成相关标志物的mRNA表达水平，免疫荧光检测METTL3表达水平及定位，transwell实验检测细胞迁移能力，体外成管实验检测细胞血管形成能力。

结果：与对照组相比，Dil-LDL组、12.5μg/mL、25μg/mL Dil-ox-LDL组细胞内荧光标记的脂蛋白含量显著升高，12.5μg/mL、25μg/mL ox-LDL组m⁶A甲基化水平显著升高(均P<0.05)，METTL3蛋白表达水平显著升高(均P<0.01)，细胞迁移及血管形成能力显著上升(均P<0.01)，12.5μg/mL ox-LDL组METTL3 mRNA表达水平显著上调(P<0.05)； 与DMSO组相比，STM2457组m⁶A甲基化水平显著降低(P<0.05)，METTL3的蛋白及mRNA表达水平无显著差异(均P>0.05)，血管内皮生长因子(VEGF)等血管形成相关标志物表达水平显著下降(均P<0.05)，细胞迁移及血管形成能力显著下降(均P<0.01)，NICD表达水平显著下降(P<0.05)； 与DMSO组相比，DAPT组NICD、VEGF表达水平显著下降(均P<0.05)，HUVEC及RF/6A细胞迁移及血管形成能力显著下降(均P<0.01)。

结论：METTL3介导的m⁶A甲基化修饰在脉络膜新生血管发病中可经Notch通路促进血管内皮细胞的血管形成。]]> 2023/4/27 14:33:08 13true 目的：探讨姜黄素对体外培养的人翼状胬肉成纤维(HPF)细胞增殖和凋亡及迁移的影响。

方法：收集我院2021-11-24/12-16手术切除的翼状胬肉组织7例，进行原代成纤维细胞体外培养，并采用免疫荧光染色法进行细胞鉴定。采用含等量二甲基亚砜的0、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素处理HPF细胞24h后，用CCK8法检测细胞增殖情况。根据CCK8检测结果将细胞分为对照组(不含姜黄素)、20μmol/L姜黄素组、40μmol/L姜黄素组，每组分别处理HPF细胞24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell迁移实验检测细胞迁移，实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cyclin D1及MMP2的mRNA与蛋白表达。

结果：与对照组相比，20μmol/L姜黄素组和40μmol/L姜黄素组均能抑制HPF细胞的增殖和迁移，并诱导其凋亡(均P<0.05)。与对照组相比，20μmol/L姜黄素组能下调Cyclin D1及MMP2，上调Bax的mRNA表达，下调Bcl-2的蛋白表达(均P<0.05)。与对照组相比，40μmol/L姜黄素组能下调Bcl-2、Cyclin D1及MMP2的mRNA与蛋白表达，上调Bax的mRNA与蛋白表达(均P<0.05)。与20μmol/L姜黄素组相比，40μmol/L姜黄素组能下调MMP2的mRNA表达，下调Bcl-2的蛋白表达，上调Bax的mRNA与蛋白表达(均P< 0.05)。

结论：姜黄素可通过抑制Cyclin D1的表达抑制HPF细胞的增殖，通过下调Bcl-2并上调Bax的表达来诱导HPF细胞的凋亡，通过下调MMP2的表达来抑制HPF细胞的迁移。]]> 2023/4/27 14:33:08 12true 目的：基于网络药理学及实验验证探讨枸杞子治疗干眼(DE)的作用机制。

方法：以“枸杞子”为关键词，通过采用TCMSP数据库与分析平台，搜索枸杞子的药物活性成分及作用靶点，以GeneCards和OMIM数据库搜索Dry eye(DE)相关的基因靶点，将枸杞子与DE的靶点基因导入Venn软件，可获得两者交集的靶点图，后将数据导入String数据库获得PPI蛋白与蛋白相互作用网络图，借助于Cytoscape3.7.2软件构建枸杞子活性成分-作用靶点-相关疾病的网络图； 再利用Bioconductor平台及R语言GO富集分析、KEGG富集分析； 通过实验验证干眼发病机制中的关键靶标。

结果：通过TCMSP数据库与分析平台筛选得到枸杞子的有效化学成分45种，活性成分对应的靶点基因174个，与DE共同的靶点基因131个，根据“药物-成分-疾病-靶点”网络拓扑图，枸杞子治疗DE的主要有效成分27个。分析PPI网络，根据度值较高，即枸杞子治疗DE的关键靶点主要包括AKT1、VEGFA、CASP3、IL1B、JUN、PTGS2、CXCL8等，根据GO富集分析获得枸杞子治疗DE的166种生物学功能与过程，KEGG富集分析显示涉及31条信号通路，此外，通过实验验证发现DE模型组的结膜组织中AKT1、IL-6、TNF-α及IL-17蛋白表达量显著升高。

结论：枸杞子治疗DE是多成分-多靶点-多途径的复杂过程，且枸杞子治疗DE主要通过抗炎及抑制细胞凋亡相关分子参与调控。]]> 2023/4/27 14:33:09 11true 目的：探讨姜黄素抑制BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)的机制。

方法：激光光凝诱导BN大鼠36只建立CNV模型，随机分为6组，每组6只。正常组BN大鼠正常饲养，不做干预； 实验组BN大鼠行532nm倍频激光光凝后，根据不同分组分别干预14d：模型组：生理盐水灌胃14d； 雷珠单抗组：光凝后第2d玻璃体腔注射雷珠单抗注射液(10mg/mL，0.2mL/支)1次5μL。姜黄素组：低\〖100mg/(kg·d)\〗、中\〖200mg/(kg·d)\〗、高\〖400mg/(kg·d)\〗剂量的姜黄素混悬液分别灌胃14d。光凝14d后进行眼底照相、FFA与ICGA检查。制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本，采用HE染色法观察不同组CNV中央厚度。制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本，采用免疫组织化学法观察不同组CNV眼组织中AKT/p-AKT/ HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的表达情况。采用RT-qPCR法检测CNV眼组织中AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子mRNA的相对表达量。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的相对表达量。

结果：模型组，雷珠单抗组，姜黄素低、中、高剂量组CNV生成率分别为78.18%、73.21%、77.19%、75.86%、74.55%，均大于70%； 荧光素渗漏平均光密度值分别为182.12±6.59、119.22±8.03、166.45±8.33、164.34±5.69、149.22±6.45； 雷珠单抗组较模型组显著降低(P<0.05)； 姜黄素低、中、高剂量组较雷珠单抗组显著升高(P<0.05)，其中姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。HE染色结果显示：正常组BN大鼠视网膜组织各层结构清晰、排列整齐。光凝后14d，雷珠单抗组CNV中央厚度较模型组显著减少(P<0.05)； 姜黄素高剂量组较模型组显著减少(P<0.05)，较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。免疫组化结果显示：正常组BN大鼠视网膜组织结构中AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子表达呈阴性，未见棕黄色反应物。光凝后14d，模型组AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达高于正常组(P<0.05)； 雷珠单抗组低于模型组(P<0.05)； 姜黄素高剂量组的表达较模型组显著降低(P<0.05)，较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。mRNA结果显示：光凝后14d，模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组(P<0.05)； 雷珠单抗组均低于模型组(P<0.05)； 姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)，较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示：光凝后14d，AKT蛋白各实验组间比较差异无统计学意义。p-AKT蛋白相对表达量模型组较正常组显著增加(P<0.05)； 雷珠单抗组较模型组显著降低(P<0.05)； 姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。HIF-1α和VEGF蛋白相对表达量模型组较正常组显著增加(P<0.05)，雷珠单抗组较模型组显著降低(P<0.05)，HIF-1α蛋白相对表达量姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)，较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。VEGF蛋白相对表达量姜黄素中、高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。

结论：400mg/(kg·d)的姜黄素具有抑制BN大鼠实验性CNV的作用。姜黄素抑制BN大鼠实验性CNV的机制可能与降低AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路的活性密切相关。]]> 2023/3/30 16:29:49 10true 目的：探讨蓝光诱导人视网膜色素上皮(ARPE)细胞铁死亡的发生及可能机制。

方法：体外培养的ARPE-19细胞接受405nm蓝光50mW/cm²辐照度照射不同时间，分为对照组、16.3J/cm²组、32.6J/cm²组和65.2J/cm²组； 将65.2J/cm²组定为高能量蓝光照射组，进一步分为对照组、高能量蓝光照射组和高能量蓝光照射+铁死亡抑制剂组，CCK-8检测细胞活力，试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、二价铁离子浓度及丙二醛(MDA)含量，Western blot法检测细胞内GPX4和xCT蛋白相对表达量。

结果：蓝光照射导致ARPE-19细胞活力下降呈剂量依赖性，高能量蓝光照射导致细胞内GSH含量下降，二价铁离子浓度和MDA含量上升(均P<0.05)； 加入铁死亡抑制剂可部分恢复蓝光照射组细胞活力和GSH含量，减少MDA含量，降低二价铁离子浓度(均P<0.05)； 蓝光照射组GPX4和xCT蛋白相对表达量显著下降，加入铁死亡抑制剂后蛋白表达量不同程度恢复(P<0.05)。

结论：蓝光照射可能通过影响xCT和GPX4相关抗氧化途径诱导RPE细胞铁死亡发生。]]> 2023/3/30 16:29:49 9true 2023/3/2 16:43:33 8true 目的：阐明组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对脉络膜黑色素瘤(CM)细胞系C918细胞增殖的影响并探讨相关机制。

方法：使用倒置荧光显微镜观察不同浓度SAHA(0.625、1.25、2.5μmol/L)对C918细胞形态的影响； CCK-8法观察C918细胞活力的变化； 细胞平板克隆形成实验和EdU染色法观察SAHA对C918细胞增殖的影响； 同时，Western blot检测细胞增殖相关蛋白c-Myc、细胞周期蛋白CyclinA2和CDK2以及HDAC7和成纤维细胞生长因子18(FGF18)的表达。

结果：与空白对照组比较，光镜下见SAHA可减小C918的细胞密度，促进细胞皱缩，且随着SAHA浓度的增加对细胞的抑制作用也增强； CCK-8法检测结果显示SAHA浓度依赖性抑制C918细胞活力，2.5μmol/L浓度时抑制率达80%； Western blot结果表明SAHA可呈浓度依赖地降低C918细胞中的增殖蛋白c-Myc、细胞周期蛋白CyclinA2和CDK2的表达； 另外，1.25μmol/L SAHA显著降低EdU染色阳性细胞数和细胞克隆数。更为重要的是，与空白对照组相比，SAHA能浓度依赖地降低HDAC7和FGF18的表达。

结论：SAHA能够通过抑制HDAC7/FGF18信号通路抑制CM细胞系C918细胞的增殖。]]> 2023/2/2 16:41:45 7true 目的：探讨加味桃红四物汤(MTSD)对视网膜Müller细胞rMC-1缺氧损伤的保护作用。

方法：用加味桃红四物汤含药血清干预缺氧条件下rMC-1细胞，随机分为正常对照组(21%O₂)、缺氧模型组(1%O₂)、含药血清低(1%O₂+5%含药血清)、中(1%O₂+10%含药血清)、高剂量组(1%O₂+15%含药血清)，CCK-8法检测细胞的活力，ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)分泌，Western blot检测磷酸化转录激活因子3(p-STAT3)、转录激活因子3(STAT3)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达，Real time PCR检测VEGF、PEDF、STAT3和HIF-1α的基因表达。

结果：在1%O₂条件下培养48h，rMC-1细胞活力较正常对照组明显受到抑制(P<0.05)，加味桃红四物汤含药血清低、中剂量组均可以改善rMC-1细胞缺氧48h的细胞存活率(P<0.05)，而高剂量组无改善作用(P>0.05)。加味桃红四物汤含药血清低、中剂量组均可减少缺氧条件下rMC-1细胞上清液VEGF的蛋白表达量(P<0.05)，但不能增加PEDF的蛋白含量(P>0.05)，对p-STAT3和HIF-1α在蛋白水平均有下调作用(P<0.05)，且低剂量组抑制作用优于中剂量(P<0.05)。加味桃红四物汤含药血清中剂量组对缺氧后rMC-1细胞STAT3的蛋白表达有上调作用(P<0.05)。加味桃红四物汤含药血清低、中剂量组对缺氧后rMC-1细胞VEGF基因表达均有下调作用(P<0.05)，对PEDF基因表达均有上调作用(P<0.05)，且低剂量组优于中剂量(P<0.05)； 并且加味桃红四物汤含药血清低剂量可下调缺氧后STAT3和HIF-1α的基因表达(P<0.05)。

结论：加味桃红四物汤含药血清可能通过抑制STAT3/HIF-1α通路，下调缺氧诱导的视网膜Müller细胞rMC-1的VEGF蛋白和基因表达，上调PEDF基因表达，减轻该细胞的缺氧损伤。]]> 2023/1/4 15:06:18 6true 目的：在大鼠2型糖尿病(T2DM)造模的基础上继续制备糖尿病视网膜病变(DR)模型，观察二甲双胍对T2DM大鼠DR的预防及保护作用和对血清胱抑素C(Cys C)的影响，并对其机制进行探讨。

方法：筛选120只雄性SD大鼠，随机取30只分为空白对照组A(10只)，T2DM组(10只)和二甲双胍干预组A(10只)； 其余90只随机分为三组，分别为空白对照组B(30只)，DR组(30只)和二甲双胍干预组B(30只)。除空白对照组A、B外，其余所有组大鼠均构建T2DM模型，成模后二甲双胍干预组A大鼠给予二甲双胍灌胃，空白对照组A和T2DM组大鼠均给予生理盐水灌胃，干预3mo后分别测量三组大鼠的空腹血糖(FBG)和空腹血清胰岛素(FINS)指标，计算并分析胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)； 测各组大鼠血清Cys C、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、血管内皮生长因子(VEGF)和活性氧(ROS)水平，并行FFA、HE染色及透射电镜观察大鼠视网膜组织及血管形态； 在T2DM病程3mo后，二甲双胍干预组B大鼠开始给予二甲双胍灌胃，其余大鼠均给予生理盐水灌胃，按干预时长不同，分别于第4、5、6mo各组取10只大鼠进行观察，测各组大鼠血清Cys C、TNF-α、IL-8、VEGF和ROS水平，并行FFA、HE染色及透射电镜观察大鼠视网膜组织及血管形态。

结果：空白对照组A、T2DM组和二甲双胍干预组A三组间大鼠血清FBG、FINS、HOMA-IR、Cys C、TNF-α、IL-8、VEGF和ROS的表达均有差异(P<0.05)，且均为T2DM组最高，二甲双胍干预组A低于T2DM组； 空白对照组B、DR组和二甲双胍干预组B分别在4、5、6mo各同龄组中，三组间大鼠血清Cys C、TNF-α、IL-8、VEGF和ROS的表达均有差异(P<0.05)，且均为DR组最高，二甲双胍干预组B的表达低于DR组，随着DR病程的延长，Cys C、TNF-α、IL-8、VEGF和ROS的表达也进一步增加； FFA结果显示：与对应的空白对照组相比，各模型组大鼠视网膜血管走行迂曲，并且随着病程的延长可见微动脉瘤及荧光渗漏； HE染色结果显示：与对应的空白对照组相比，各模型组大鼠视网膜细胞排列紊乱，并随着病程的延长可见异常扩张的血管； 透射电镜结果显示：与对应的空白对照组相比，各模型组大鼠视网膜毛细血管损伤严重； 但与对应模型组比较，各二甲双胍干预组大鼠FFA、HE和透射电镜结果均有不同程度的改善。

结论：二甲双胍可通过下调血清Cys C介导的炎症和氧化应激水平，改善视网膜组织病变，从而对T2DM大鼠视网膜病变起预防和治疗作用。]]> 2023/1/4 15:06:18 5true 2023/10/24 9:37:17 4true 2023/10/24 9:37:18 3true 目的：通过建立BALB/c与C57BL/6小鼠视网膜光损伤模型，研究17β-雌二醇(17β-estradiol， E2)的视网膜神经保护作用，为成功构建E2抗视网膜光损伤模型提供实验数据。

方法：成年雌性BALB/c、C57BL/6小鼠各40～45只，实验分组如下：正常对照组，去势手术对照组，去势光照组(小鼠去势手术14d后进行持续10 000lx白光光照刺激4、8、12、16、24h组)，玻璃体腔注射假手术组，生理盐水组和E2预处理组(去势手术14d后暗适应24h后分别行玻璃体腔注射2μL生理盐水或10^-5mol/L E2)，每组各6只。通过石蜡切片HE染色、TUNEL染色、视网膜电图检测视网膜形态及功能变化。

结果：去势光损组视网膜内核层/外核层厚度从白光10 000lx光照4h组开始显著减小； 玻璃体腔注射E2预处理可显著抑制两种品系小鼠视网膜各层细胞的凋亡(P<0.01)以及C57BL/6小鼠视网膜电图检测中最大混合反应a波和b波波幅的下降(P<0.05)。

结论：相同光照条件对两种品系小鼠光损敏感性存在差异； E2对BALB/c小鼠无论是视网膜形态学及功能学上都产生了保护作用，而对C57BL/6小鼠功能学保护作用显著。]]> 2023/9/19 10:01:14 2true 目的：探讨ALK5抑制剂EW-7197对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响及其机制。

方法：采用MTS法检测细胞增殖率，并摸索EW-7197最佳的作用浓度和作用时间。之后将细胞分为3个组，分别为正常对照组、TGF-β1诱导组和TGF-β1+EW-7197处理组，采用Transwell小室观察各组细胞迁移情况，采用Western blot检测各组细胞Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。

结果：MTS结果显示，不同处理条件的EW-7197以6.0μmol/L作用24h的细胞增殖率最低(均P<0.01)。Transwell小室实验结果显示，TGF-β1诱导组的细胞迁移数量为228.0±17.0个/视野，明显高于正常对照组(149.0±15.0个/视野)和TGF-β1+EW-7197处理组(46.0±8.0个/视野)(均P<0.01)。Western blot检测结果显示，TGF-β1诱导组细胞中Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3相对表达量高于正常对照组和TGF-β1+EW-7197处理组(均P<0.001)。

结论：EW-7197能够通过TGF-β/Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖和迁移。]]> 2023/9/19 10:01:15 1true