摘要:
目的：明确miR-519d-3p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)功能障碍与血管生成的影响，并阐明其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的调控机制。方法：通过5、30mmol/L葡萄糖分别诱导HRMEC建立正常(NG)和高糖(HG)细胞模型。将HRMEC分为对照组(HG细胞模型转染阴性对照模拟物)、甘露醇组(对照组加入25mmol/L甘露醇)、miR-519d-3p过表达组(HG细胞模型转染miR-519d-3p模拟物)、miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组(HG细胞模型共转染miR-519d-3p模拟物和HIF-1α过表达载体)。实时荧光定量PCR法检测各组miR-519d-3p的表达情况。Western blotting法检测各组HIF-1α蛋白的表达情况。荧光素酶报告基因实验检测miR-519d-3p和HIF-1α的结合位点情况。CCK-8法检测各组细胞增殖情况。Hoechst 33342染色法检测各组细胞凋亡情况。ELISA法检测各组细胞外液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6蛋白的表达情况。小管形成实验检测各组新生毛细血管管腔样结构形成情况。结果：与NG相比，HG细胞模型中miR-519d-3p表达显著减少，而HIF-1α蛋白表达显著增加(均P<0.01)。与对照组比较，miR-519d-3p过表达组中HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01)。miR-519d-3p中“CGUGAAA”序列可以与HIF-1α 3'-非编码区(3'-UTR)中“GCACUUU”序列特异性结合。与对照组比较，miR-519d-3p过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著增加，细胞凋亡率显著减少，细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均显著减少，新生毛细血管管腔样结构数量显著减少(均P<0.01)。与miR-519d-3p过表达组比较，miR-519d-3p联合HIF-1α过表达组细胞24、48、72h吸光度值均显著减少，细胞凋亡率显著增加，细胞外液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度均显著增加，新生毛细血管管腔样结构数量显著增加(均P<0.01)。对照组和甘露醇组中上述各指标比较无差异(均P>0.05)。结论：高糖诱导HRMEC模型中miR-519d-3p表达下调，而HIF-1α蛋白表达上调。HIF-1α是miR-519d-3p的靶基因，miR-519d-3p靶向HIF-1α增加细胞增殖并降低细胞凋亡和炎症反应，从而减轻高糖诱导的HRMEC功能障碍并抑制血管生成。
